基于液体芯片-飞行时间质谱分析的肺结核患者血清差异表达蛋白

目的应用液体芯片-飞行时间质谱技术分析肺结核患者和正常对照人群的血清蛋白多肽图谱,找出组间具有统计学意义的差异表达蛋白多肽,从而筛选出肺结核的标志蛋白多肽峰图(m/z)。方法应用2种液体蛋白芯片技术(MB-WCX和MB-IMAC-CU)结合飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)对14例病理确诊的肺结核患者和32例正常对照人群进行血清蛋白多肽图谱分析;采用ClinProTools软件分析肺结核患者和正常对照组的组间差异表达蛋白。结果 MB-WCX型液体蛋白芯片处理后共获得74个蛋白多肽峰图,其中42个蛋白多肽峰图呈组间极显著差异(P<0.001)表达。MB-IMAC-CU型液体蛋白芯片处理后共获得68个蛋白多肽峰图,有11个蛋白多肽呈组间极显著差异(P<0.001)表达,且其中的8个峰图与MB-WCX型液体芯片检出的组间极显著差异峰图完全相同。经MB-WCX处理所获的42个差异蛋白多肽峰图中有17个蛋白多肽在肺结核患者组中表达上调,其余25个蛋白多肽在肺结核患者组中表达下调。结论利用液体芯片-飞行时间质谱技术可以从肺结核患者的血清中获得稳定丰富的蛋白多肽图谱,并且能够筛选出潜在的疾病标志物。     

慢性阻塞性肺疾病患者的血清差异表达蛋白分析

目的应用液体芯片-飞行时间质谱技术从慢性阻塞性肺疾病(COPD)患者的血清中找出差异表达蛋白,筛选出其蛋白多肽(m/z)的疾病标志物。方法应用液体蛋白芯片(MB-WCX)结合飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)技术对16例病理确诊的COPD患者和32例正常对照人群进行血清蛋白组分析。采用ClinProTools软件进行蛋白多肽的组间差异对比,共获得115个蛋白多肽峰图,其中24个蛋白多肽峰图具有极显著差异(P<0.001),其中10个蛋白多肽在COPD患者中表达下调,其余14个蛋白多肽在COPD患者中表达上调。两组数据中最大差异的两个蛋白多肽峰分别是m/z:1 012.92和m/z:4 152.85。结论利用液体芯片-飞行时间质谱技术可以从COPD患者的血清中获得稳定丰富的蛋白多肽图谱,并且能够筛选出潜在的疾病标志物。     

应用液体芯片-飞行时间质谱技术筛选血清中肺癌标志蛋白

目的 应用液体芯片-飞行时间质谱系统分析肺癌与对照组血清差异表达蛋白,筛选肺癌标志蛋白.方法 将105例肺癌患者和90例对照者[44名正常人,46例良性肺疾病(BLDs)]的血清随机分成训练组(肺癌和对照各60例)和验证组[肺癌45例(早期13例,晚期32例),对照30例(正常及BLDs各15例)].应用ClinPro...     

五种血清肿瘤标志物单个或联合检测在肺癌诊断中作用的初步评价

目的初步评价细胞角蛋白19的片段(Cyfra21-1)等5种肿瘤标志物单个或联合检测在肺癌诊断,尤其是早期诊断中的作用。方法采用电化学发光免疫法检测了124例肺癌和41例非肿瘤肺病患者血清中Cyfra21-1、癌胚抗原(CEA)、神经元烯醇化酶(NSE)、糖链抗原19-9(CA19-9)及鳞状细胞抗原(SCCAg)等五种标志物的水平。结果CEA特异性最高,达97.56%,Cyfra21-1最低,为73.17%;CEA、Cyfra21-1及NSE的敏感性分别在腺癌、鳞癌、小细胞肺癌中最高(分别为68.29%、62.30%、66.47%);Cyfra21-1、NSE在早期和晚期肺癌中的敏感性无显著性差异(P>0.05)。联合检测Cyfra21-1+CEA诊断肺癌的特异性和敏感性分别为70.73%和66.13%;同时检测3或4个标志物可提高诊断的敏感性,但特异性却明显降低;Cyfra21-1+CEA、Cyfra21-1+CA19-9诊断早期和晚期肺癌的敏感性无显著性差异(P>0.05)。结论作为肺癌筛查指标,上述标志物均不理想;CEA>10μg/L对肺癌,尤其是腺癌的定性诊断有较大价值;Cyfra21-1和NSE分别是鳞癌和小细胞肺癌较好的标志物,两者在肺癌早期诊断中均可能有一定价值。Cyfra21-1+CEA可能是诊断肺癌(包括早期)的一个较佳组合。     

癌胚抗原放射免疫分析的临床应用

本文报告了663例住院病人之血清CEA及36例胸水CEA放射免疫测定结果。476例肺、胃、肠道、肝、食道癌肿之血清CEA阳性率分别为64.29％、47.27％、40.63％、33.33％、31.48％;187例良性病人(食道除外),假阳性率分别为4.76％、11.96％、7.7％、26.47％;36例胸水中有17例肺癌患者,阳性率为94.12％;17例良性病变中无1例假阳性。结果认为测定胸水CEA水平对鉴别肺良、恶性疾病有其独特的临床价值。血清CEA水平不能独立地作为某些肿瘤的诊断依据。但鉴别原发与继发肝癌、肿瘤的术后随访以及对慢性萎缩性胃炎患者进行动态观察尚有一定意义。     

利用血清蛋白质组差异分析多发性骨髓瘤的耐药机制

目的应用弱阳离子交换纳米磁珠(WCX-MB)分离血清蛋白并联合基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)技术,对比分析临床上难治复发与治疗敏感的多发性骨髓瘤(MM)患者血清蛋白质组的差异,以期为阐明多发性骨髓瘤的耐药机制提供线索。方法选择临床确诊的19例MM患者,按实际疗效分为难治复发组(11例)和治疗敏感组(8例),以WCX-MB捕获各自的血清蛋白质组分,MALDI-TOF-MS检测蛋白质谱,再利用ClinprotoolsTM 2.2软件进行数据分析,筛选出与耐药相关的差异蛋白质分子。结果在分子量0.7～10ku的范围内,共得到59个有统计学意义的差异多肽峰(P<0.05);与治疗敏感组相比,难治复发组MM患者的血清多肽峰有34个表达上调,有25个表达下调;将区分难治复发组与治疗敏感组MM患者能力最强的10个质谱峰建成了一个诊断GA模型,其灵敏度及特异性均为100%。结论利用CLINPROT系统筛选血清差异表达蛋白能够为研究多发性骨髓瘤的耐药机制和临床预后判定提供有价值的线索。     

小细胞肺癌及其配对的正常肺组织差异表达蛋白质的双相电泳-飞行时间质谱研究

目的应用比较蛋白质组学方法分析小细胞肺癌(SCLC)与其配对的正常肺组织差异表达蛋白质,为阐明SCLC发病机制、筛选其早期诊断标志物提供有益的思路。方法应用双相电泳(2-DE)分离6例SCLC及其配对的正常肺组织可溶性总蛋白;应用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)获得差异蛋白点的肽质量指纹图谱(PMF);通过Mascot软件查询NCBI或SWISS-PROT数据库鉴定蛋白质。结果每张图谱约检测到800多个蛋白质点。经匹配分析,肺癌组织之间和正常肺组织之间凝胶图像的匹配率分别为75.5%和78.2%;选择14个背景清晰、重复性及分辨率较好、蛋白表达差异明显的点进行质谱分析,结合表观分子量及等电点(pI),初步鉴定了11种(六类)蛋白质:①与蛋白质降解通路有关的蛋白质:蛋白酶体α亚单位3型、蛋白酶体β亚单位2型及β亚单位5型;②自由基/抗氧化剂类:锰-超氧化物歧化酶(Mn-SOD)、过氧化氢酶(CAT)和黄素还原酶(FR);③细胞骨架类:原肌球蛋白-3(Tpm-3);④与能量代谢有关的蛋白质:硫氧还蛋白过氧化物酶(TPX1);⑤分子伴侣:抑制素(PHB),内质网蛋白ER29(Erp29);⑥其他:可溶性NSF黏附蛋白(alpha SNAP)。结论应用2-DE及MALDI-TOF-MS方法分离并初步鉴定了11种(六类)蛋白质;这些蛋白质与SCLC发生发展密切相关,部分可能成为SCLC诊断及治疗的分子靶点。     

血清和支气管肺泡灌洗液中癌胚抗原及透明质酸测定对肺癌的诊断意义

应用放免法测定了７４例肺癌和７６例良性肺病患者血清（Ｓ）和支气管肺泡灌洗液（ＢＡＬＦ）中癌胚抗原（ＣＥＡ）及透明质酸（ＨＡ），同时测定了５８例健康人Ｓ－ＨＡ。结果显示：肺癌患者Ｓ－ＣＥＡ极显著高于良性肺病患者（Ｐ＜０．００１），肺癌患者Ｓ－ＨＡ极显著高于健康人和良性肺病患者（Ｐ均＜０．００１）。肺癌患侧ＢＡＬＦ－ＣＥＡ和ＢＡＬＦ－ＨＡ极显著高于肺癌健侧、良性肺病患侧和健侧（Ｐ＜０．００１或Ｐ＜０．００２）。根据各项指标在肺癌时的阳性率，选用Ｓ－ＣＥＡ、ＢＡＬＦ－ＣＥＡ和ＢＡＬＦ－ＨＡ作为诊断指标，当３项阳性时对肺癌诊断的敏感性为５３％，特异性为９７％、阳性预示值为９５％，用性预示值为７６％，准确性为７２％。     

体外非接触共培养诱导骨髓间充质干细胞向肺泡上皮细胞的分化

目的 建立体外非接触共培养模型,诱导小鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)向肺泡上皮细胞的分化.方法 分三组,每组6例.对照组:小鼠MSCs单独培养组;实验组A:正常肺组织单细胞悬液+MSCs;实验组B:损伤肺组织单细胞悬液+MSCs.共同培养8d,激光共聚焦和RT-PCR检测共培养体系下室中的SP-C和AQP5的表达情况.结果 对照组和实验组A都只检测到AQP5;而实验组B可同时检测到AQP5和SP-C.实验组B的AQP5 mRNA的表达量较对照组明显增多(P<0.01),而与实验组A比较,其AQP5 mRNA的表达量也有统计学差异(P<0.01).但是,实验组A与对照组比较则无明显统计学差异(P>0.05).结论 本实验室成功建立了体外非接触诱导小鼠MSCs分化为肺泡上皮细胞的实验模型.     

基于鸟枪法蛋白质组学和生物信息学技术对肺鳞癌表达蛋白质谱的分析

目的应用高通量蛋白质组学及生物信息学技术分析肺鳞癌表达蛋白质谱,筛选肺癌标志蛋白质,为肺鳞癌发病机制、早期诊断及治疗提供有价值的线索。方法 6例手术后新鲜肺鳞癌组织,通过激光捕获显微切割(laser capture microdissection,LCM)分离纯化肿瘤细胞并提取可溶性总蛋白;多维液相色谱-离子阱串联质谱技术(也称鸟枪法蛋白质组学,shot gun proteomics)对蛋白质进行分离、鉴定;进一步通过生物信息学工具预测肺鳞癌细胞表达蛋白质的理化性质、分子功能、生物通路及蛋白质相互作用,并筛选潜在的标志蛋白。结果 LCM共收集了60个帽(cap)的感兴趣细胞,平均每个LCM cap捕获感兴趣细胞数约12000个,其同质性大于95%。可溶性总蛋白经多维液相色谱-离子阱串联质谱共鉴定出860个非冗余蛋白质。蛋白质的理化性质包括分子量、等电点、平均疏水性、跨膜结构域、亚细胞定位、转录后修饰和组织分布等经过在线生物信息学工具分析,并通过统计图直观显示;蛋白质生物学功能基于Gene Ontologyc(GO)软件和Kyoto encyclopedia of genes and genomes(KEGG)生物学通路分析,根据其注解,筛选出3个有价值的蛋白质,即分裂素活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)、粘联素A1(annexin A1,ANXA1)、高移动组蛋白B1(high mobility group protein B1,HMGPB1)可以作为肺鳞癌候选的标志蛋白。结论鸟枪法蛋白质组学可大规模分离、鉴定肿瘤细胞表达蛋白质,基于生物信息学筛选的标志蛋白质可能成为肺癌诊断和治疗的分子靶点。     

肝细胞肝癌患者的血清蛋白质组学研究

目的分析肝细胞肝癌患者的血清蛋白质谱,寻找诊断肝癌和检测治疗的特异性标志物。方法收集了50例肝癌患者血清,在去除血清中6种高丰度蛋白后进行双向凝胶电泳分离及银染,将凝胶扫描图像与正常人血清比较分析,然后经质谱鉴定20个差异表达蛋白质点。结果共鉴定了11种差异表达蛋白质,其中7种蛋白质在肝癌患者血清中表达水平上调,其余4种蛋白质表达水平下调。有7个点被同时鉴定为α1-抗胰蛋白酶,均在肝癌患者血清中表达上调,提示α1-抗胰蛋白酶在肝癌中降解加快。Western blotting检测进一步证实多数肝癌血清中的α1-抗胰蛋白酶小片段增多。结论血清是诊断肝癌和检测治疗非常重要的临床标本,本实验中鉴定的蛋白质虽不能作为临床诊断标志物,但对分析肝癌血清蛋白谱的改变有一定的参考价值。     

INCREASED CONCENTRATION OF NITRITE IN SYNOVIAL FLUID AND SERUM SAMPLES IN STEROID INDUCED FEMORAL HEAD NECROSIS

Ｎｉｔｒｉｃｏｘｉｄｅ（ＮＯ）ｗａｓｓｈｏｗｎｔｏｂｅｔｈｅｅｎｄｏｔｈｅｌｉｕｍｄｅｒｉｖｅｄｒｅｌａｘｉｎｇｆａｃｔｏｒｉｎ１９８７．ＳｉｎｃｅｔｈｅｎＮＯｈａｓｂｅｅｎｉｄｅｎｔｉｆｉｅｄａｓａｎｉｎｔｅｒｃｅｌｕｌａｒｍｅｓｓｅｎｇｅｒａｎｄ...     

低硒、氧化应激及CVB感染在克山病发病机制中的作用

目的　研究低硒、氧化应激和柯萨奇B组病毒 (CoxsackievirusB ,CVB)感染在克山病发病中的作用。方法　检测了陕西省黄陵县 30例潜在型、慢型克山病患者血清CVB IgM抗体、硒水平、总抗氧化能力以及脂质过氧化物 (LipidPeroxide,LPO)。健康对照选自黄陵县克山病病区和非病区西安市。结果　①克山病患者组CVB IgM阳性率显著高于病区和非病区健康组 ,分别为 43.3%vs 1 5 %和 43.3%vs 1 0 % ,P <0 .0 1 ;②克山病患者和病区健康居民血清硒水平和总抗氧化能力显著低于非病区西安人群 (P <0 .0 5 ) ,但克山病患者血清LPO水平显著高于两健康组 (P <0 .0 5 ) ;③克山病患者CVB IgM( + )者血清Se水平、总抗氧化能力显著低于CVB IgM( - )患者和病区健康组CVB IgM ( + )和CVB IgM ( - )者 (P <0 .0 5 ) ;克山病患者CVB IgM( + )血清LPO水平显著高于其他各组 (P <0 .0 5 )。结论　低硒、氧化应激与柯萨奇病毒感染可能与克山病的发生及发展有一定关系     

肺结核、慢性支气管炎、肺心病及肺癌患者血清铜、锌、镁、铁含量的测定

测定２９例肺结核，１７例慢性支气管炎，２０例慢性肺原性心脏病和７３例支气管肺癌患者的血清铜、锌、镁、铁含量。结果表明，血清锌、铁降低，血清铜升高，提示支气管肺部有感染存在。铜／锌比值的显著升高，对诊断支气管肺癌有一定价值，并可作为原发性肺癌高危人群普查的检测方法之一。对感染过程中血清金属元素含量改变的机理进行了讨论。     

白术挥发油治疗癌性恶病质的实验研究

目的研究白术挥发油治疗癌性恶病质的效果并探讨其可能机制。方法通过C57BL6小鼠接种Lewis(小鼠肺腺癌)建立癌性恶病质动物模型。实验动物分5组:模型对照组、正常对照组、白术水煎剂组(DA)、白术挥发油组(VOA)、康莱特组(KLT)。观察癌性恶病质鼠治疗后的生理状况(体重、摄食量等)并采用RIA检测血清TNF-α及IL-6水平。结果①各治疗组小鼠生理状况明显改善、摄食量增加,体重增加仅见于KLT组,但均未恢复到正常水平。②VOA组与DA组小鼠血清TNF-α、IL-6水平均较模型组明显降低,VOA优于DA组。KLT虽然能使TNF-α水平降低,但却明显提高了IL-6水平。结论白术挥发油具有明显的抗癌性恶病质的作用,其机制可能与其能抑制肿瘤生长、调节血清细胞因子TNF-α、IL-6的异常升高有关。     

Application of Principle Component Analysis and Logistic Regression in Analyzing miRNA Markers of Brain Arteriovenous Malformation

Brain arteriovenous malformation（BAVM） is frequently described as vascular malformation. Although computer tomography（CT）, magnetic resonance imaging（MRI） and angiography can clearly detect lesions, there are no diagnostic biological markers of BAVM available. Current study demonstrated that micro RNA（mi RNA）showed a feasible marker for vascular disease. To find key correlations between these mi RNAs and the onset of BAVM, we carried out chip analysis of serum mi RNAs by identifying 18 potential markers of BAVM. We then constructed a principle component analysis and logistic regression（PCA-LR） model to analyze the 18 mi RNAs collected from 77 patients. Another 9 independent samples were used to test the resulting model. The results showed that mi RNAs hsa-mir-126-3p and hsa-mir-140 are important protective factors, while hsa-mir-338 is a dominating risk factor, all of which have stronger correlation with BAVM than others. We also compared the testing results using PCA-LR model with those using LR model. The comparison revealed that PCA-LR model is better in predicting the disease.     

EHF血尿SIL-2R受体的动态检测

应用双抗体夹心ELISA法测定了30例流行性出血热患者血清及尿液可溶性白细胞介素2受体（SIL-2R）水平。结果表明:流行性出血热患者血清及尿液SIL-2R均明显高于正常人（P<0.01）;且与临床病程密切相关。尿液SIL-2R与尿蛋白变化呈正相关关系（P<0.01）,可间接反映肾功能损害程度。尿液SIL-2R与血清SIL-2R具良好的相关性（r=0.542,P<0.001）;且尿液具有取材方便,易于检测的优点。对流行性出血热患者的临床病情估计和治疗具有一定的意义。     

肺癌患者放疗前后LSA、TNF水平的变化及其临床意义

对57例肺癌患者放疗前后血清脂质结合唾液酸（Lipid－boundstalicAcid．LSA）、肿瘤坏死因子（TumourNecrosisFactor，TNF）水平进行了检测,并与20例正常对照进行比较。结果显示：肺癌患者放疗前血清LSA、TNF水平均明显高于正常对照（P均＜0．001），阳性率分别为77．19％、84．47％；放疗后LSA及TNF水平均较放疗前明显下降，且与疗效有关；TNF水平还与临床分期有关。两项指标联合检测的阳性率为94．74％。     

小儿铁缺乏症血清促甲状腺素含量及尿17—酮类固醇排量的研究

作者观察了47名铁缺乏症儿童血清促甲状腺素含量及64名尿17—酮类固醇排量在肌注右旋糖酐铁治疗前后的动态变化,并分别与32名及28名正常对照组者作了比较。结果显示:铁缺乏症各期儿童上述两项指标均值均高于对照组者,治疗后恢复正常,治疗前后数值统计学上有显著差异;各期间改变程度无差异。结果说明,铁缺乏时出现促甲状腺素及肾上腺皮质激素的代谢紊乱,这种紊乱与缺铁本身有关,与因缺铁而引起的贫血无关。     

癌胚抗原测定对宫体恶性肿瘤诊断及预后的意义

用放射免疫法测定了子宫体恶性肿瘤组３６例，子宫体良性病变组４６例，正常组５０例的子宫内膜、晨尿、血清的ＣＥＡ含量。结果示子宫体恶性肿瘤组３种标本的ＣＥＡ含量均值高于２对照组，而子宫体良性病变组与正常组间无显著差异。血标本ＣＥＡ升高的阳性率于良恶性病变组间无差异。子宫内膜ＣＥＡ含量与子宫体恶性肿瘤的临床分期呈正相关。子宫内膜ＣＥＡ含量可能与恶性肿瘤的预后有关。同时测定３种标本ＣＥＡ值有助于区别子宫体良、恶性病变。