子宫颈癌患者组织HPV16 E_6、E_7基因及其血清抗体检测

用多聚酶链反应检测子宫颈癌组织HPV16E6、E7基因，同时用基因工程方法制备E6、E7抗原，以免疫酶联吸附法检测其血清抗体。结果表明，宫颈癌组织中HPV16E6、E7DNA检出总阳性率为71．8％，E6、E7基因检出率分别为37．5％（12／32）和65．6％（21／32）。HPV16E6、E7血清抗体反应阳性率为68．18％（30／44）和56．18％（25／44）。结果同时显示HPV16E6、E7DNA分布并不均一，存在E 6、E 7、E 6E 7和E6-E-74种模式，并且其血清抗体反应和DNA存在情况也不一致，E6抗体阳性的24例患者中，仅9例可检出其DNA，E，同样如此。这些似…     

子宫颈癌患者HPV16 E6,E7血清抗体检测

通过基因工程技术制备HPV16 E6,E7抗原,用免疫酶联吸附法检测了44例子宫颈癌病人和20例健康献血员血清HPV16 E6,E7抗体。结果表明,健康人血清HPV16 E6和HPV16 E7抗体阳性者分别占35％(7/20)和20％(4/20)。病人血清中,HPV16 E6抗体阳性率68.18％(30/44),但其反应滴度均值与健康人无显著差异。HPV16 E7抗体阳性率为58.18％(25/44),其阳性率及反应滴度均明显高于健康人。这提示,HPV16 E6抗体可能并非HPV16的型特异性抗体,而HPV16 E7抗体则有可能成为子宫颈癌发生的预报信号。     

真核表达人乳头瘤病毒16型L_1蛋白在检测宫颈癌患者相应抗体的应用

用真核表达HPV16L1蛋白为抗原，酶联免疫吸附测定64例宫颈癌患者血清和阴道分泌物的相应抗体，并用型特异性聚合酶键反应检测宫颈癌组织HPV16L1基因。结果：宫颈癌组血清HPV16L1抗体阳性年64．1％，对照组20．8％；宫颈癌组阴道分泌物HPV16L1抗体阳性率64.1％，对照组25％；宫颈癌组HPV16L1基因检出率为42．2％，对照组10％。有显著差异（P＜0．01）。结论：高危型HPV感染，宫颈癌患者有明显免疫反应，全身和局部无明显差异，真核表达HPV16L1蛋白可用于宫颈癌患者的抗体测定。     

用HPV L_1区共有引物及PCR技术检查人尖锐湿疣和子宫颈癌中的HPV

根据HPV6、11、16、18、31、33型L1ORF高度保守区的基因序列设计合成了一对HPVL1区共有引物。该引物除与上述六型有很高的同源性外还可覆盖其它已知的20多型与女性肛生殖区感染有关的HPV。用该引物及PCR技术对一组计144例活检标本进行检测，结果显示：病理确诊的尖锐湿疣、子宫颈癌及外阴癌组织、正常宫颈标本中HPVDNA序列检出率分别为100％（55／55）、70％（28／40）和13．3％（2／15）。另外，34例临床诊断而未被病理证实的尖锐湿疣HPV－DNA亦呈阳性，说明在对这类病变进行病理诊断时有必要进行病原学检测。     

人子宫颈癌中的HPV_(16)E_6mRNA、p~(53)、P~(21)~(ras)和c-myc蛋白表达

为进一步探讨子宫颈癌的分子发病机制，采用PCR、ISH和IHC方法对51例子宫颈癌组织的HPV16感染、HPV16E6mRNA、p53、p21ras和c－myc蛋白表达分布进行了研究。结果表明51例中有HPV16感染者38例，HPV16E6mRNA表达者35例，其阳性细胞主要分布在高分化癌巢之周边部或中、低分化癌之整个癌巢；p53、p21ras和c－myc蛋白阳性检出率分别为33．3％、60．8％和76．5％，其阳性细胞是弥漫或灶状分布。统计分析表明HPV16感染与P53、P21ras、c－myc蛋白积累间无关，但后三者间则显著相关。这提示癌基因活化或抗癌基因的失活及HPV16感染等因素之协同在子宫颈癌的发生发展中起重要作用。     

应用PCR技术克隆人乳头瘤病毒16型E6基因

为进一步研究与宫颈癌发生密切相关的人乳头瘤病毒16型E6基因的转化作用,我们运用PCR技术扩增HPV16 E6 DNA,以pUC—19为载体,大肠杆菌了JM103为宿主菌,组建了质粒pRCE6经限制性核酸内切酶和Southern转印杂交证实,其插入片段约为0.5Kb,含有全部HPV16 E6序列。该质粒的组建为检测HPV感染中mRNA转录提供了特异性的早期基因探针。同时为进一步研究HPV16 E6基因的转化作用及转化蛋白打下基础。     

DIG－DNA探针检测宫颈癌组织中HPV－16的E_7转化基因

应用地高辛配基（Ｄｉｇ－１１－ｄＵＴＰ）标记人乳头瘤病毒１６型（ＨＰＶ－１６）Ｅ７转化基因作探针，分别检测了宫颈癌活检组织、宫颈炎及正常宫颈脱落细胞ＤＮＡ。其检出率为：宫颈癌中４２．１％（２４／５７）、宫颈炎中２．５％（１／３９）、正常宫颈中５．５％（１／１８）。宫颈组织中ＨＰＶ－１６Ｅ７转化基因的检出率较高，提示该转化基因与宫颈癌的发生可能密切相关。本研究也证实ＤＩＧ配基标记的Ｅ７基因探针具有特异、敏感、安全、稳定和能反复使用的优点，适合基层使用。     

人乳头瘤病毒16型转化基因的筛选及次级克隆

人乳头瘤病毒16型转化作用在宫颈癌发生中可能起重要作用,其转化基因主要位于基因组早期区域E6、E7开放阅读框架内。为了进一步研究HPV16转化作用,我们以Pstl+ECoRI酶解HPV16DNA,以pUC-19为载体,大肠杆菌JM103细胞为宿主菌,经两次定向次级克隆,组建了质粒pEP-8。经限制性核酸內切酶和Southem转印杂交证实,其插入片段为-1.43Kb带有E6、E7 ORF的DNA片段。在E6区上游序列还含有两个TATA盒,1个Cat盒和1个细胞特异性增强子。该质粒的组建为检测HPV感染细胞中mRNA转录提供了特异性的早期基因探针,同时为进一步研究HPV转化作用及转化蛋白打下了基础。     

人类乳头瘤病毒16型早期基因178位(T→G)突变分析

目的检测宫颈癌患者高危型人类乳头瘤病毒(human papillomavirus,HPV)16型阳性标本中早期基因(E6基因)178位(T→G)点突变情况。方法应用模板指导的染料终止子掺入-荧光偏振检测技术(TDI-FP)方法检测宫颈癌患者高危HPV16型E6基因178位点突变情况,以进一步明确此基因位点突变与宫颈癌变的相关性。结果应用TDI-FP法检测宫颈癌组织中高危HPV16型E6基因178位突变率为32.5%,与癌前病变及慢性宫颈炎患者相比,差异具有统计学意义(χ2=20.623,P<0.01)。结论宫颈癌患者HPV16型E6基因178位(T→G)突变率较高,可能是HPV致癌的一个高危因素。     

宫颈癌患者人乳头瘤病毒16型E6基因的克隆及序列分析

目的　分析中国陕西地区宫颈癌患者人乳头瘤病毒 16型 (HPV16型 )E6基因的结构特点。方法　采用PCR技术扩增了 1例HPV16阳性宫颈癌患者癌组织中HPV16E6基因 ,并对其进行了克隆及全序列分析。结果　成功地克隆了HPV16E6基因 ,与GenBank收录的原型相比 ,E6基因中有 2个碱基发生突变 ,推导其编码的氨基酸有 1个发生了变化。结论　中国人宫颈癌HPV16E6基因结构有一定的变异     

应用PCR方法检测人乳头瘤病毒的E_7转化基因

应用聚合酶链反应技术（ＰＣＲ）检测５４份子宫颈癌活检标本中人乳头瘤病毒１６型（ＨＰＶ－１６）Ｅ７转化基因的存在情况，结果显示阳性率为７２．２％（３９／５４）。ＨＰＶ－１６Ｅ７转化基因在人子宫颈癌组织中的高检出率，证实该转化基因与其发生关系密切。本研究同时证明，ＰＣＲ方法具有敏感、特异、快速和实用特点，值得推广。     

HPV-6/11 L1/E6、HPV-6/11 L1/E7嵌合DNA疫苗质粒的构建

目的　构建HPV 6 / 11L1/E6、HPV 6 / 11L1/E7预防、治疗性DNA疫苗质粒。方法　运用PCR扩增HPV 6 /11L1、E6、E7序列 ,PCR产物连接至pGEMT Easy质粒 ,测序鉴定正确后 ,分别连接至真核表达载体pVAX ,再用酶切、连接而构建成HPV 6 / 11L1 E6 /E7 pVAX质粒。运用电穿孔法将所获得质粒转染COS 7细胞 ,免疫组化检测蛋白表达情况。结果　所构建质粒的插入目的片段测序正确 ;免疫组化检测在胞浆胞核可见棕黄色点状阳性产物沉积。结论　所构建的HPV 6 / 11L1 E6 /E7 pVAX融合蛋白表达质粒可在体外表达L1 E6 /L1 E7蛋白 ,为今后进行DNA疫苗的动物实验及临床实验研究做好准备     

免疫抑制鼠肾包膜下法检测口腔颌面部恶性肿瘤联合化疗敏感性的实验研究

将18例口腔颌面部恶性肿瘤做原代移植物，移植到CTX免疫抑制鼠SRC，检测了联合化疗敏感性，结合病理学观察，结果：①以对照组△TS≥－0．5omu标准，获可评价率88％（16／18）；SRC移植瘤阳性生长81．2％（69／85），零生长7％（6／85），负性生长11．8％（10／85）。②以对照组与实验组△TS（P＜0．05），移植瘤消退率≥15％为标准，68．8％（11／16）可评价药物敏感性，对PM、PVF、CVP敏感率分别为54．5％（6／11）、60％（6／10）、63.6％（7／11）。病理学证实，对照组移植瘤名存良好，实验组移植瘤有不同程度的退行性改变。③Ag－NOR计数和DNA含量测定结果，化疗敏感组与对照组之间存在显著差异。证实CTX免疫抑制既SRCA对口腔颌面部部分恶性肿瘤实现个体化疗是一简便快速方法。     

用聚合酶链反应检测口腔癌组织中人乳头状瘤病毒的E_6转化基因

作者采用聚合酶链反应（ＰＣＲ），并对照核酸斑点杂交法对１０例口腔恶性肿瘤组织中ＨＰＶ１６Ｅ６转化基因进行了检测。这些肿瘤包括６例口腔粘膜鳞癌（ＳＣＣ），２例涎腺腺样囊性癌（ＡＣＣ），１例涎腺恶性多形性腺瘤（ＭＰＡ）和１例腭部软组织胚胎性横纹肌肉瘤（ＥＲ）。对照组为１０例非肿瘤组织，包括唇裂、腭裂粘膜组织标本各５例。结果表明两种方法检测结果基本一致，肿瘤组阳性６例（６／１０），包括４例ＳＳＣ，１例ＡＣＣ和１例ＥＲ（除外１例ＡＣＣ用核酸杂交法检测为弱阳性），其余为阴性；对照组用核酸杂交法检测４例，除１例唇裂标本为弱阳性以外，均为阴性（０／４）；用ＰＣＲ法检测１０例均为阴性结果（０／１０）。两组间ＨＰＶ１６Ｅ６转化基因的检出率有明显差异（Ｐ＜０．０５）。这一结果为开展口腔癌的ＨＰＶ病因学研究提供了参考资料。     

尖锐湿疣患者人乳头瘤病毒亚临床感染及潜伏感染的研究

用多聚酶链反应方法（PCR）检测30例生殖器尖锐湿疣（CA）患者临床皮损、醋酸白试验阳性及阴性的非皮损区刮屑及尿道拭子中人乳头瘤病毒（HPV）。结果：CA临床皮损HPV29例阳性，阳性率96．60％，醋酸白试验阳性的非皮损区HPV22例阳性，阳性率73.3％，醋酸白试验阴性的非皮损区HPV21例阳性，阳性率70％，尿道拭子HPV18例阳性,阳性率60％。结果表明CA患者非皮损区及尿道内均存在HPV潜伏感染，HPV潜伏感染在CA复发中起着很重要的作用。     

肾综合征出血热患者血清汉滩病毒核蛋白和糖蛋白G_2抗体检测及其临床意义

用汉瘫病毒单克隆抗体L133、L13F3、LV48A和LV28B为包被抗体，以其酶标物为指示抗体，建立了分别检测汉滩病毒核蛋白抗体（NPAb）和包膜糖蛋白G2抗体（G2Ab）的抗体阻断酶联免疫吸附试验，用该法对65例肾综合征出血热（HFRS）患者的291份血清标本进行了检测．NPAb的阳性率在2～3病日和8～9病日分别为90％和100％。NPAb的滴度在HFRS的发热期升高，低血压和少尿期达高峰。提示NPAb可能是与HFRS的免疫病理损伤有关的重要成份，而且检测NPAb可能有助于HFRS的早期诊断。G2Ab的阳性率和滴度在前三期，即发热、低血压和少原期均…     

构建及鉴定携带角蛋白启动子和人乳头瘤病毒16E6/E7基因的重组腺病毒

目的利用AdEasy系统构建携带人角蛋白启动子的人乳头瘤病毒-16(HPV-16)E6/E7基因重组腺病毒,并通过RT-PCR方法检测E6/E7基因的表达。方法应用PCR方法从含有HPV-16全基因序列的质粒上扩增E6/E7基因,构建pCDNA3.1(-)-K14-E6/E7-polA载体,扩增、酶切获得K14-E6/E7-polA片段插入腺病毒穿梭载体质粒pAdTrack上,构建重组穿梭载体pAdTrack-K14-E6/E7-polA,线性化后与骨架载体AdEasy-1在细菌BJ5183内同源重组得到腺病毒质粒pAd-K14-E6/E7-polA,经人胚肾293细胞包装后得到重组腺病毒pAd-K14-E6/E7-polA。氢化铯(CsCl)梯度离心纯化病毒,提取病毒再感染后的293细胞总RNA,通过RT-PCR方法检测E6/E7基因的表达。结果通过同源重组的方法构建了腺病毒pAd-K14-E6/E7-polA载体,经酶切和测序鉴定该质粒构建成功。293细胞包装3d后观察到绿色荧光蛋白(GFP)表达,CsCl梯度离心纯化最终获得7.2×1010pfu/mL滴度的重组病毒;用该滴度病毒重新感染293细胞3d后,提取细胞总RNA,RT-PCR检测E6/E7有表达。结论利用新型腺病毒载体AdEasy系统可在短期内制备同时表达GFP和E6/E7的重组腺病毒pAd-K14-E6/E7-polA。这将为进一步研究HPV-16E6/E7基因功能及利用基因治疗女性宫颈癌奠定了基础。     

BCL-2和PCNA蛋白在增生性子宫内膜和子宫内膜癌组织中的表达

用免疫组化法对20例正常子宫内膜、22例增生性内膜及41例子宫内膜癌标本进行凋亡抑制基因（B－Celllymphoma／leukemia－2，BCL－2）、增殖细胞核抗原（Prolifer－atingcellnuclearantigen，PCNA）蛋白检测，以探讨其在子宫内膜病变发生、发展中的作用。结果两者表达率（20．0％、90．9％、31．7％；40．0％、72．7％、97．6％）均存在显著差异。子宫内膜癌组织中，BCL－2染色强度与组织学分级无相关性，PCNA染色则有相关性，且1级与3级间存在差异。两种蛋白表达间无相关性。提示BCL－2蛋白在正常内膜周期性变化及增生性病变的发生、发展中发挥作用，并可能为进一步基因异常改变提供有利条件，而在子宫内膜癌中其表达可能与细胞分化有关。PCNA有助于了解内膜病变的生物学行为，有可能成为判定子宫内膜癌恶性程度及预后的客观指标之一。     

用PCR-SSCP方法研究子宫颈癌组织中人乳头瘤病毒E_7基因的变异

运用核酸杂交和聚合酶链式反应（ＰＣＲ）对临床确诊的６１份子宫颈癌Ⅱ～Ⅲ期标本进行了人乳头瘤病毒（ＨＰＶ）１６型Ｅ７基因的检测。非同位素地高辛标记探针斑点杂交阳性检出率为４５．９％，ＰＣＲ检测阳性率为５４．１％，两种检测结果证实ＨＰＶ－１６型感染与子宫颈癌的发生密切相关。进一步用灵敏的单链构象多态性分析法（ＳＳＣＰ）对３３例阳性标本进行分析，发现有２７例单链ＤＮＡ迁移率与正常对照有不同，推测均发生了ＤＮＡ序列的改变，提示ＨＰＶ－１６Ｅ７基因的变异在子宫颈癌组织中是较常见的现象，其与子宫颈癌的发生有一定的关系。     

急性散发性戊型肝炎患者血清抗体的动态检测

动态检测了34例1993年6月～1994年5月在我校附属医院住院确诊的急性散发性戊型肝炎患者血清IgM、IgG抗-HEV变化。15例患者IgM和IgG同时阳性。16例平均随访观察303d（6个月～15个月）。结果：IgM、IgG抗-HEV阳性最早出现在黄症后第3天；黄疸后10d阳性率分别达86．7％和100％。两抗体在病初1周时滴度最高，以后缓慢下降，IgM下降较快，病程2月时所检患者均降至不能检出水平；IgG抗体除1例外均在1年左右阴转。ALT在抗体出现后很快下降，6周降至近正常水平。IgM抗-HEV检出率仅44．1％，故不宜仅以此作为急性戊型肝炎诊断标准，应结合IgGJ立体动态变化，综合判断。