得力生通过调节血管蛋白抑制肝癌SMMC-7721细胞增殖并促凋亡

目的探讨得力生注射液对肝癌SMMC-7721细胞的作用机制。方法用不同浓度的得力生作用肝癌SMMC-7721细胞后,MTT方法检测肝癌SMMC-7721细胞不同时间(24、48、72h)的增殖情况,流式细胞技术检测细胞凋亡及细胞周期,免疫细胞化学方法检测肝癌SMMC-7721细胞中血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)、骨桥蛋白(osteopontin,OPN)和内皮抑素(endostadin,ENS)的表达。结果得力生作用于肝癌SMMC-7721细胞后,随着作用时间的延长和药物浓度的增加,细胞增殖逐渐减少,细胞凋亡逐渐增加,而对正常肝细胞HL-7702的作用很轻微。得力生将肝癌SMMC-7721细胞主要阻滞在G1期,且VEGF和OPN表达下调,ENS表达上调。结论得力生抑制肝癌SMMC-7721细胞增殖及诱导凋亡,呈现时间和浓度依赖效应,并可能通过调节血管蛋白而实现,这为得力生治疗肝癌提供了理论依据。     

盐酸青藤碱诱导人肝癌细胞凋亡及其对IL-1β,TNF及C/EBPβ水平的影响

目的观察盐酸青藤碱对人肝癌细胞SMMC-7721凋亡的影响,及其IL-1β、TNF-α及C/EBPβ水平的变化,探讨防治肝癌作用的可能机制。方法体外培养人肝癌细胞SMMC-7721,经不同浓度盐酸青藤碱作用后,采用MTT法检测细胞增殖;Annexin V-FITC/PI双标结合流式细胞术检测细胞的凋亡;ELISA法检测培养液中IL-1β、TNF-α的水平;Western blot技术检测盐酸青藤碱作用于人肝癌细胞后C/EBPβ的表达水平。结果盐酸青藤碱对人肝癌细胞的生长有明显的抑制作用,并呈剂量、时间依赖性,不同浓度组之间差异均有统计学意义(P<0.05);不同浓度(0、0.5、1和2mmol/L)的盐酸青藤碱处理肝癌细胞48h后,各组中凋亡细胞率分别为(8.31±0.81)%、(12.62±1.13)%;(27.43±0.97)%;(51.74±0.85)%,实验组与对照组之间差异有统计学意义(P<0.05);同时发现,与阴性对照组比较,盐酸青藤碱作用组SMMC-7721细胞上清液中IL-1β,TNF-α水平均明显下降,而C/EBPβ的表达水平显著增加(P<0.05)。结论盐酸青藤碱可抑制人肝癌细胞SMMC-7721的细胞增殖,促进其凋亡,此作用可能与其抑制转录因子C/EBPβ,炎症因子如TNF-α、IL-1β的表达,进而通过破坏肿瘤微环境作用有关。     

柴胡皂甙d对肝癌SMMC-7721细胞增殖的抑制作用

目的观察柴胡皂甙d(SSd)对肝癌SMMC-7721细胞增殖的影响及其作用机制。方法肝癌SMMC-7721细胞株经内毒素(脂多糖,LPS)诱导,加入不同质量浓度的SSd作用后,MTT比色法检测细胞增殖抑制率,光学、电子显微镜和流式细胞仪观察细胞凋亡,放免法检测细胞前列腺素E2(PGE2)产生量。结果SSd对肝癌细胞增殖有明显的抑制作用,并呈剂量和时间依赖性。镜下观察,SSd作用组细胞可见典型凋亡小体形成,细胞凋亡率达17.5%。肿瘤细胞前列腺素E2的产生量,SSd作用组明显下降,接近环氧合酶2(COX-2)抑制剂尼美舒利(Nimesulide)作用组水平。结论SSd可能通过下调COX-2的表达,抑制PGE2产生而发挥抗癌作用。     

氯化两面针碱诱导人肝癌细胞SMMC-7721凋亡的研究

目的 研究氯化两面针碱诱导人肝癌细胞SMMC-7721凋亡的作用.方法 采用噻唑蓝(MTT)比色法检测人肝癌细胞SMMC-7721生长活力;Hoechst33258核染色,观察细胞形态学变化;流式细胞仪检测细胞周期及细胞凋亡率.结果 氯化两面针碱作用于细胞后,在体外呈浓度、时间依赖性显著抑制SMMC-7721细胞的生长,作用24、48、72h的半数抑制浓度(IC50)分别为(19.5±1.8)、(3.8±0.2)、(2.8±0.1)mg/L;Hoechst33258染色后,可见核染色质凝集,凋亡细胞呈致密浓染,与对照组相比,氯化两面针碱处理后凋亡细胞比例增加;流式细胞仪检测到G2/M细胞比例增加,G0/G1、S期细胞比例下降.药物作用于SMMC-7721细胞后,随浓度增加细胞凋亡率增加.结论 氯化两面针碱对SMMC-7721细胞有明显的生长抑制作用,可能与改变细胞周期并诱导细胞凋亡有关.     

柴胡皂甙d对人肝癌细胞BECN1表达及自噬功能的影响

目的观察柴胡皂甙d(SSd)对肝癌细胞SMMC-7721生长增殖及自噬作用的影响,初步探讨其可能的机制。方法肝癌SMMC-7721细胞株经不同终浓度SSd(5.0、7.5、10.0、12.5、15.0、和17.5mg/L)作用24、48、72h,MTT法检测细胞增殖,筛选最适作用浓度及时间,RT-PCR测定自噬基因BECN1 mRNA表达水平,Western blot检测BECN1蛋白表达水平。结果 SMMC-7721细胞增殖的抑制率随着SSd浓度的增大而增大,浓度达12.5mg/L时,抑制率最高(60%);SSd作用后BECN1在基因和蛋白水平的相对表达量比对照组明显升高(P<0.05),3-甲基腺嘌呤(3-MA)可降低BECN1基因和蛋白的表达,并可降低SSd作用后的BECN1的表达。结论 SSd对肝癌细胞SMMC-7721增殖的抑制作用呈现浓度和时间的依赖性,基本符合药物剂量-效应关系。SSd可能通过上调自噬基因BECN1的表达诱导自噬性死亡的发生,从而达到抑制肝癌细胞SMMC-7721增殖的作用。     

丹参酮IIA对肝癌细胞血管内皮生长因子表达的影响

目的 观察丹参酮IIA对人肝癌SMMC-7721细胞的增殖抑制和凋亡诱导作用,及对血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响,探讨其可能的抗肿瘤作用机制.方法 体外培养人肝癌SMMC-7721细胞株,MTT比色法观察细胞增殖抑制情况;荧光显微镜检测细胞凋亡;免疫细胞化学法和ELISA法分别检测细胞及细胞培养液中VEGF的表达情况.结果 丹参酮IIA对肝癌细胞的生长有明显的抑制作用,并呈剂量依赖性,以0.5mg/L终质量浓度的抑制作用最明显,其48h的抑制率为72.5%,与未加药对照组相比差异具有统计学意义(P＜0.01);荧光显微镜下经丹参酮IIA作用后的肝癌细胞可见凋亡小体形成;免疫细胞化学染色及ELISA法检测发现,丹参酮IIA作用组肝癌细胞VEGF表达和培养液中VEGF分泌量明显减少,与未加药对照组相比差异有统计学意义(P＜0.01).结论 丹参酮IIA可下调细胞VEGF的表达,这可能是其抗肿瘤作用的机制之一.     

siRNA沉默MAPK p42对肝癌SMMC7721增殖和凋亡的影响

目的应用siRNA沉默SMMC7721细胞MAPK p42,并观察其对增殖和凋亡的影响。方法应用SilencerTMsiRNA构建试剂盒合成2条MAPK p42siRNAs和一条随机对照siRNAs,用脂质体LipofectaminTM 2000将其转染入肝癌SMMC-7721细胞株。应用Western blot检测MAPK p42表达,MTT法检测细胞增殖情况,流式细胞仪分析细胞周期及其细胞凋亡。结果与对照相比,MAPK p42siRNA明显抑制MAPK p42表达。MAPK p42siRNA抑制了SMMC-7721细胞的生长,将细胞阻滞于细胞周期S期,进而诱导了细胞凋亡的发生。结论 MAPK p42靶向siRNA可能为肝癌基因治疗的重要手段。     

SIRT4在肝癌中的表达及其对肝癌细胞增殖和侵袭迁移的影响

目的检测原发性肝癌组织及配对癌旁组织中沉默调节蛋白SIRT4的表达,及其与原发性肝癌临床病理因素的关系;探索SIRT4对肝癌细胞增殖、侵袭、迁移和对上皮间质转化能力的影响。方法 qRT-PCR检测SIRT4在肝癌组织和癌旁组织中的表达;卡方检验(χ~2)分析SIRT4表达与肝癌临床病理因素之间的关系;利用慢病毒转染技术构建SIRT4表达上调的SMMC-7721肝癌细胞系;MTT和Transwell小室观察SIRT4表达对SMMC-7721细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响;Western blot检测SIRT4对细胞转化生长因子-β(transforming growth factor-β, TGF-β)和上皮间质转化相关蛋白表达的调控作用。结果原发性肝癌组织中的SIRT4表达明显低于癌旁组织(P<0.01),SIRT4低表达与肝癌的临床病理因素密切相关;过表达SIRT4抑制SMMC-7721肝癌细胞增殖、迁移、侵袭和上皮间质转化能力。结论 SIRT4在原发性肝癌中可能扮演抑癌基因角色,并可成为肝癌的潜在生物标记物和治疗靶点。     

化合物OCAM的体外抗肿瘤活性

目的 研究化合物OCAM的体外抗肿瘤活性并初步探讨其作用机制.方法 采用MTT法、台盼蓝染色法和集落形成实验检测OCAM对体外培养的SMMC-7721及H22肿瘤细胞的杀伤作用;用MTT法检测OCAM对HL-7702人正常肝细胞的毒性作用;流式细胞仪检测OCAM对SMMC-7721细胞的诱导凋亡作用和细胞周期变化.结果 与空白对照组相比较,OCAM从12.5mg/L到200mg/L剂量范围内对SMMC-7721肝癌细胞均有不同程度的杀伤作用,最高抑制率达到70.99%.OCAM浓度为100mg/L时,即对H22肿瘤细胞产生杀伤作用,抑制率为47.49%.OCAM剂量为500mg/L时,集落形成抑制率达到100%.OCAM组的肿瘤细胞凋亡率和G0/G1期比例均高于空白对照组.结论 通过体外细胞试验证实OCAM具备较好的抗肿瘤活性和较低的毒性.     

姜黄素联合顺铂对人卵巢癌SKOV-3细胞增殖的抑制作用

目的 探讨姜黄素及其联合顺铂对体外培养人卵巢癌SKOV-3细胞增殖的抑制作用.方法 将SKOV-3细胞培养并分别单独加入不同浓度姜黄素(5、10、20、40、80 μ mol/L)、顺铂(10 μmol/L)及联合作用后,用MTT法检测SKOV3细胞增殖情况.流式细胞术检测细胞凋亡率和细胞周期分布.结果 MTT法检测结果显示,不同浓度姜黄素组,随着药物浓度增加,作用时间延长,细胞的增殖抑制率上升(P＜0.05);联合用药组明显高于单一用药组(P＜0.05).流式细胞术结果显示,姜黄素能使卵巢癌SKOV-3细胞发生G2/M期阻滞,诱导细胞凋亡;随着姜黄素用药浓度增加,细胞凋亡率增高.结论 姜黄素对卵巢癌SKOV-3细胞增殖具有抑制作用,在一定范围内,这种抑制作用呈剂量-时间依赖性;姜黄素、顺铂联合应用具有协同作用.     

丹参酮ⅡA对人肝癌细胞Ang-2及其受体Tie-2表达的影响

目的观察丹参酮ⅡA对人肝癌SMMC-7721细胞株Ang-2及其受体Tie-2表达的影响,探讨其抗癌的作用机制。方法体外培养肝癌SMMC-7721细胞株,经不同浓度丹参酮ⅡA作用后,MTT方法测定细胞增殖,免疫细胞化学法测定Ang-2及其受体Tie-2表达,ELISA法检测细胞培养液中Ang-2和VEGF水平。结果丹参酮ⅡA对肝癌细胞的生长有明显抑制作用,并呈剂量依赖性。免疫细胞化学检测显示,随着丹参酮ⅡA作用浓度的增大,Ang-2及其受体Tie-2表达下调,其在1.0μg/mL组作用48h的高表达率分别为33.33%、40.00%,灰度值分别为167.43±12.44和169.05±15.59,与空白对照组相比差异有统计学意义(P<0.05);ELISA法检测显示,丹参酮ⅡA作用组细胞培养上清液中Ang-2和VEGF含量明显下降。结论抑制Ang-2及其受体Tie-2表达可能是丹参酮ⅡA抗肝癌作用的机制之一。     

华蟾素联合吉西他滨对肝癌HepG2细胞的抑制作用及对骨桥蛋白表达的影响

目的 探讨华蟾素、吉西他滨及华蟾素与吉西他滨联合对肝癌HepG2细胞增殖和凋亡情况的影响,研究华蟾素作用HepG2细胞后骨桥蛋白(OPN)表达的变化.方法 采用MTT法及流式细胞技术检测HepG2细胞对华蟾素、吉西他滨及华蟾素+吉西他滨的药物敏感性差异;采用免疫细胞化学法检测HepG2细胞中OPN的表达.结果 华蟾素和吉西他滨单药或联合用药对HepG2细胞的增殖呈抑制作用且呈现时间与浓度的依赖性,并能诱导HepG2细胞凋亡,联合组凋亡诱导作用强于单药组(P<0.05);华蟾素能下调HepG2细胞中OPN的表达.结论 华蟾素与吉西他滨联合对肝癌HepG2细胞具有协同抑制作用,可能通过抑制OPN的表达发挥抗癌作用.     

尼美舒利对肝癌细胞增殖及Smad4表达的影响

目的观察选择性环氧化酶-2抑制剂尼美舒利对人肝癌细胞(HepG2)生长及Smad4蛋白表达的影响。方法 MTS法检测不同浓度尼美舒利(25、50、100、200、400μmol/L)作用于HepG2后,对照组和实验组HepG2细胞增殖的变化;TUNEL法检测尼美舒利对HepG2凋亡的影响;荧光显微镜观察尼美舒利干预后,肝癌细胞Smad4蛋白表达的变化。结果尼美舒利对肝癌细胞HepG2的增殖有抑制作用,且随着尼美舒利浓度的增高,其对HepG2增殖的抑制作用逐渐增强;同时可以促进肝癌细胞核固缩、碎裂,诱导其凋亡;尼美舒利干预组肝癌细胞Smad4蛋白的荧光标记量明显高于对照组。结论尼美舒利可以通过上调肝癌细胞Smad4蛋白的表达来抑制肝癌细胞的增殖、促进其凋亡。     

粉防己碱诱导宫颈癌细胞凋亡的定性定量研究

目的 从定性定量角度探讨粉防己碱诱导宫颈癌HeLa细胞凋亡的作用.方法 采用MTT法检测不同浓度粉防己碱作用不同时间对人宫颈癌HeLa细胞株的增殖抑制作用.通过流式细胞仪和激光共聚焦显微镜检测细胞凋亡情况.结果 粉防己碱对宫颈癌HeLa细胞具有增殖抑制作用,且呈时间、浓度依赖性.应用流式细胞仪检测到15μmol/L粉防己碱诱导HeLa细胞产生的凋亡率为(51.8±0.97)%,显著高于对照组凋亡率(24.3±1.23)%(P<0.05).通过激光共聚焦显微镜观察,与对照组比较,粉防己碱作用后HeLa细胞具有明显的凋亡形态.结论 粉防己碱能够抑制HeLa细胞的增殖并诱导其凋亡.     

5-氮杂-2’-脱氧胞苷对HepG2中抑癌基因MIA2表达的影响

目的应用甲基化酶抑制剂5-氮杂-2’-脱氧胞苷(5-Aza-2’-deoxycytidine,5-Aza-CdR)作用肝癌细胞株HepG2,观察其对细胞增殖和凋亡的影响,并观察用药后肝癌细胞中黑色素瘤抑制蛋白2(melanoma inhibitory activity 2,MIA2)表达的变化情况。方法分别以浓度0、1、2、4、8、10、20、40μmol/L的5-Aza-CdR作用HepG2细胞,MTT法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡。再以0μmol/L和10μmol/L的5-Aza-CdR作用HepG2细胞,细胞免疫组化和Western blot检测细胞中MIA2蛋白表达。结果 5-Aza-CdR作用HepG2后,MTT结果显示细胞增殖受到抑制,在一定药物浓度范围内,细胞增殖抑制率和药物浓度呈正相关;流式细胞术结果显示细胞早期凋亡增加,在一定药物浓度范围内,早期凋亡率和药物浓度呈正相关;细胞免疫组化和Western blot结果显示与对照组(0μmol/L)比较,10μmol/L组中MIA2蛋白表达增强。结论 5-Aza-CdR作用HepG2细胞后,MIA2蛋白表达明显增强,细胞增殖受到抑制,早期凋亡增加。     

散癖平胃方剂对人胃癌细胞株增殖和凋亡的影响

目的探讨中药散癖平胃方剂(SPPW)对人胃癌细胞株增殖和凋亡的影响。方法体外培养人胃癌细胞株SGC-7901和BGC-823,设立3个SPPW质量浓度组(10、100、1 000μg/mL)、阴性对照组和5-FU阳性对照组进行干预,MTT比色法检测干预不同时间后各组吸光度(A)值;流式细胞仪检测肿瘤细胞凋亡;透射电镜观察细胞超微结构的改变;Western blot法检测β-连环素蛋白(β-catenin)表达变化。结果与阴性对照组相比,SPPW作用于胃癌细胞株SGC-7901及BGC-823 12⁷2h后,对细胞增殖均有抑制作用(P<0.01);SPPW干预胃癌细胞株SGC-7901 48h后能促进细胞凋亡,透射电镜下表现出明显的凋亡形态学改变;Western blot法检测β-catenin蛋白表达呈浓度依赖性下降,差异具有统计学意义(P<0.01)。结论 SPPW可以明显抑制人胃癌细胞株的增殖和促进细胞凋亡,为SPPW的临床应用提供了可靠的理论基础。     

姜黄素对CD34~+CD38~-KG1a细胞增殖和凋亡的影响及其与白消安的协同效应

目的探讨姜黄素对CD34+CD38-KG1a细胞增殖和凋亡的影响以及姜黄素联合白消安对CD34+CD38-KG1a细胞的协同效应。方法流式细胞术检测细胞CD34、CD38表面抗原的表达情况、姜黄素诱导CD34+CD38-KG1a细胞的凋亡情况及其对CD34+CD38-KG1a细胞周期的影响。MTT法检测姜黄素对CD34+CD38-KG1a的增殖抑制作用及其与白消安联合作用的效应。甲基纤维素克隆形成实验检测细胞克隆形成能力。倒置光学显微镜观察细胞凋亡形态。Western blot检测Bcl-2蛋白表达水平。结果 KG1a细胞株中CD34+CD38-KG1a细胞占(98.2±3.2)%。姜黄素对CD34+CD38-KG1a细胞具有增殖抑制作用,呈时间-剂量依赖性,并能降低CD34+CD38-KG1a细胞的克隆形成能力。姜黄素与白消安相互作用系数(CDI)<1。CD34+CD38-KG1a细胞被姜黄素阻滞于G0/G1期,S期细胞明显减少,并能诱导CD34+CD38-KG1a细胞凋亡。凋亡细胞体积变大,细胞结构不清,胞膜边缘粗糙。姜黄素能下调CD34+CD38-KG1a细胞Bcl-2蛋白表达水平。结论姜黄素通过降低细胞克隆形成能力、阻滞细胞于G0/G1期和诱导细胞凋亡,抑制CD34+CD38-KG1a细胞的增殖,姜黄素与白消安具有协同作用。Bcl-2蛋白表达水平下调可能促使姜黄素诱导CD34+CD38-KG1a细胞凋亡。     

饱和脂肪酸对胰岛β细胞凋亡和细胞周期进程的影响

目的 探讨饱和脂肪酸棕榈酸(palmitate acids, PA)对MIN6胰岛β细胞生长、增殖及凋亡的影响,研究诱导MIN6细胞凋亡,抑制细胞周期进程的可能细胞分子机制.方法 采用MTT法检测细胞活力,流式细胞仪测定细胞周期,Annexin-Ⅴ/FITC/PI双标记流式细胞术检测细胞凋亡.应用Western blot检测细胞周期相关蛋白cyclin D1和CDK4的表达水平,以及抗凋亡蛋白家族(IAP)XIAP和cIAP-2的表达水平.结果 和对照组相比:①不同浓度PA显著抑制MIN6细胞增殖(P<0.01);②不同浓度PA作用均呈时间与剂量依赖性诱导MIN6细胞凋亡(P<0.01);③PA亦能显著抑制细胞周期进程,使MIN6细胞周期更多滞留在G0/G1期(P<0.01),G2/M期与S期细胞比例降低(P<0.01);④用Western blot检测发现:和对照组相比,PA降低磷酸化AKT、XIAP和cIAP-2的表达水平(P<0.01),以及降低细胞周期蛋白CDK4、cyclin D1(P<0.01)的表达水平.结论 PA能抑制胰岛β细胞的生长、增殖和诱导凋亡,可能是通过降低cyclin D1和CDK4活性,使细胞滞留在G0/G1期,抑制细胞周期进程,影响其复制;同时降低抗凋亡蛋白XIAP和cIAP-2的活性,促使细胞的凋亡.     

高压静电场对丝裂霉素C抗癌作用的协同效应

以体外培养的人肝癌细胞SMMC7721和小鼠Lewis肺癌细胞为靶细胞,采用MTT比色法分别检测HVEF和MMC单独使用及联合应用对癌细胞增殖的抑制效果,并根据抑制率判定协同效应,从而探讨高压静电场(HVEF)与丝裂霉素C(MMC)联合应用对癌细胞生长是否具有协同抑制作用.结果表明:经HVEF与MMC联合作用后,两种癌细胞的增殖活性均低于单独使用MMC组,人肝癌细胞SMMC7721下降了20%～38%(P＜0.01),小鼠Lgwis肺癌细胞下降了7%～15%(P＜0.01),且两种方法具有协同效应,说明一定强度的高压静电场能够增强丝裂霉素C的抗癌作用.     

苦参碱对人卵巢癌细胞增殖的影响及其机制

目的 研究苦参碱(matrine)体外培养的人卵巢癌细胞OV2008增殖的影响及相关机制.方法 采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测不同浓度(0、0.125、0.25、0.5、1.0,2.0、4.0 mg/mL)的苦参碱在不同的时间点(24、48、72 h)对OV2008细胞增殖的影响;采用流式细胞术(FCM)检测不同浓度的苦参碱作用于OV2008细胞48 h后细胞周期分布、凋亡率及Fas、Bcl-2蛋白的表达水平.结果 苦参碱对OV2008细胞的增殖具有明显的抑制作用,与对照组相比具有显著性差异(P<0.05或P<0.01),并呈现时间和剂量依赖性;细胞周期分析显示,随着苦参碱浓度的增高,G0/G1期细胞比例逐渐增加,S期细胞比例减小,G2/M期细胞比例无明显变化;苦参碱能够诱导细胞凋亡,且凋亡率随着苦参碱浓度的增高而升高(P<0.01);苦参碱能够上调Fas蛋白的表达(P<0.05或P<0.01),下调Bcl-2蛋白的表达(P<0.01).结论 苦参碱可显著抑制OV2008细胞的增殖,且抑制作用晕剂量和时间依赖性.苦参碱对OV2008细胞的增殖抑制作用可能与其诱导细胞周期阻滞及凋亡有关,而苦参碱诱导凋亡可能与其上调Fas蛋白表达、下调Bcl-2蛋白表达有关.