重组质粒pEGFP-N1-Twist的构建、表达及其对SKOV3细胞克隆形成能力的影响

目的构建含有Twist基因的重组质粒pEGFP-N1-Twist,为进一步研究上皮性卵巢癌的发生及转移机制奠定基础。方法生物合成Twist cDNA基因序列,定向克隆至pEGFP-N1表达载体内,将pEGFP-N1-Twist转染入SKOV3细胞系,用Real-time PCR和Western blot检测Twist基因的表达情况;通过克隆形成实验检测pEGFP-N1-Twist对SKOV3细胞的作用。结果 Twist基因的cDNA已克隆到真核细胞表达载体pEGFP-N1中,将pEGFP-N1-Twist转染入SKOV3细胞后,Twist基因/蛋白的表达明显上调,转染组较对照组克隆形成明显增加(P<0.05)。结论成功构建了Twist基因的真核表达载体并能在细胞内稳定表达,Twist基因能增强SKOV3细胞的克隆形成能力。     

miR-1246对人宫颈癌SiHa细胞增殖、侵袭、迁移能力的影响及其靶基因的初步研究

目的探讨miR-1246对人宫颈癌SiHa细胞增殖、侵袭、迁移能力的影响。方法将SiHa细胞分成3组,分别转染miR-1246mimics(模拟物)、miR-1246inhibitor(抑制物)、空白质粒,并测定转染效率。采用MTT法对比转染后SiHa细胞增殖能力的区别;Transwell小室、划痕实验对比转染后SiHa细胞侵袭、迁移能力的区别;Western blot对比转染后SiHa细胞表达THBS2(血小板反应蛋白2)的区别。构建THBS2的3UTR双荧光素酶质粒,与miR-1246共转染入SiHa细胞,检测荧光素酶的相对活性。结果转染miR-1246mimics的SiHa细胞,MTT试验显示其增殖能力较另外两组强;划痕实验显示细胞的迁移能力较另两组强;迁移、侵袭实验显示该组细胞穿膜数量较另外两组多(P<0.01);WB实验显示其THBS2蛋白低表达(灰度值6.28±10.22,与空白对照组相比P=0.013)。转染miR-1246inhibitor的SiHa细胞,MTT试验显示其生长速度较另外两组慢;划痕实验显示细胞的迁移能力较另两组弱;迁移、侵袭实验显示该组细胞穿膜数量较另外两组少(P<0.01);WB实验显示其THBS2蛋白表达稍高(灰度值12.90±19.81,与空白对照组相比P=0.037)。共转染miR-1246mimics和包含THBS2的3UTR端双萤光素酶质粒后,SiHa细胞荧光素酶表达降低。结论 miR-1246对人宫颈癌SiHa细胞的增殖、侵袭、迁移能力有促进作用,THBS2是其靶基因,降调靶蛋白THBS2的表达,可能是miR-1246促进宫颈癌发生发展的其中一个机制。     

相关蛋白在携带载脂蛋白-J基因大鼠BMSCs中的表达及意义

目的检测重组质粒pEGFP-N1-apoJ在不同量、不同时间条件下转染大鼠骨髓间充质干细胞的瞬时转染效率,并测定载脂蛋白-J(ApoJ)在靶细胞中能否高表达。方法贴壁培养细胞,并用脂质体LipofectaminTM2000分别介导0.8、1.2、1.6、2.0μg重组质粒pEGFP-N1-apoJ转染,置荧光显微镜下观察转染结果,测定在24、48、72h时间点的瞬时转染效率。蛋白免疫印迹法分别检测pEGFP-N1-apoJ质粒转染组、空pEGFP-N1质粒转染组、空白对照组ApoJ的表达情况。结果不同的质粒量中1.6μg pEGFP-N1-apoJ质粒与3.0μL脂质体制备的复合物瞬时转染效率最高,分别作用24、48、72h可达27.8%、34.3%、28.2%。蛋白免疫印迹法检测到pEGFP-N1-apoJ质粒组大量ApoJ表达,空质粒及空白对照组见微量ApoJ表达;并且pEGFP-N1-apoJ质粒组Apo-J的表达明显高于空载体及空白对照组(P<0.05)。结论利用脂质体介导可将重组质粒pEGFP-N1-apoJ成功转染入大鼠骨髓间充质干细胞,ApoJ在大鼠骨髓间充质干细胞中得到大量表达。     

miR-498通过下调FOXM1抑制肺腺癌细胞系A549的迁移侵袭

目的探索微小RNA498(miR-498)是否通过下调FOXM1抑制肺癌细胞系(A549)细胞的迁移和侵袭。方法转染miR-498mimic和miR-NC至培养的A549细胞中,Western blot检测A549细胞中COL1A1、COL1A5、FOXM1的表达情况,划痕试验和Transwell法观察细胞迁移侵袭情况,荧光素酶试验验证FOXM1是miR-498的靶基因;再通过转染过表达FOXM1的质粒至已成功转染miR-498的A549细胞中,检测A549细胞中COL1A1、COL1A5、FOXM1的表达情况,划痕试验和Transwell法观察细胞迁移侵袭情况。结果与空质粒组比较,转染miR-498mimic的A549细胞中COL1A1、COL1A5、FOXM1的表达减少(P<0.05),A549细胞的迁移侵袭减少(P<0.01);荧光素酶实验结果显示,miR-498能够显著降低FOXM1-3′-UTR质粒的荧光素活性(P<0.05);与miR-498+空质粒组比较,转染过表达FOXM1质粒的A549细胞中COL1A1、COL1A5表达增加(P<0.05),细胞的迁移侵袭增加(P<0.01)。结论miR-498可以通过下调FOXM1而抑制A549的迁移和侵袭。     

EGFR对血管生成拟态的诱导作用及其相关机制

目的探讨表皮生长因子受体(epithelial growth factor receptor,EGFR)对血管生成拟态的促进作用。方法应用CD34-PAS双重染色法检测不同级别胶质瘤中血管生成拟态的存在情况,应用免疫组织化学法检测不同级别胶质瘤中EGFR蛋白的表达,应用化学缺氧法诱导人脑星形细胞瘤U87细胞在三维培养体系中形成血管生成拟态,Transwell法检测细胞的迁移及侵袭能力,甲基噻唑基四唑法(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)检测细胞的增殖能力,蛋白质印迹法(Western blot)检测EGFR、丝氨酸苏氨酸蛋白激酶AKT和磷脂酰肌醇3激酶(phosphatidylinositol3kinase,PI3K)蛋白的表达,探讨EGFR/AKT/PI3K通路对血管生成拟态的诱导作用。结果血管拟态阳性的患者EGFR阳性率为94.4%(17/18),血管拟态阴性的患者EGFR阳性率为71.8%(56/78),两者差异具有统计学意义(P<0.05)。U87细胞三维培养后,缺氧组平均每个视野网状结构数量、迁移能力,侵袭能力和增殖能力均显著高于常氧组(P<0.01)。Western blot显示缺氧组中EGFR、AKT、PI3K蛋白的表达显著高于常氧组。结论缺氧可诱导EGFR/AKT/PI3K信号通路活化,进而诱导血管生成拟态的形成,EGFR在血管生成拟态的形成过程中起着十分重要的作用。     

沉默IFITM1基因对卵巢癌CP70细胞增殖和侵袭能力的影响

目的探讨siRNA沉默IFITM1基因表达对卵巢癌CP70细胞增殖和侵袭的影响。方法利用脂质体转染法将靶向IFITM1的小干扰RNA(siRNA)转染卵巢癌细胞株CP70;qRT-PCR和Western blot观察转染后CP70细胞IFITM1mRNA和蛋白表达的变化;平板克隆形成实验和Transwell小室分别检测各组细胞增殖和侵袭能力的变化。结果转染组CP70细胞的IFITM1mRNA和蛋白表达明显受抑制;转染组、阴性对照组及转染试剂对照组形成克隆数分别为84、181、178,克隆形成率分别为42%、90.5%、89%,迁移出的细胞分别约为59个、121个、126个,转染组结果与其他两组之间有统计学差异,说明转染IFITM1siRNA抑制了卵巢癌CP70细胞增殖和侵袭能力。结论沉默IFITM1可以降低卵巢癌细胞的增殖和侵袭能力,IFITM1可能成为卵巢癌治疗的潜在新靶点。     

高迁移率族蛋白1对人肝癌细胞增殖及转移能力的影响

目的观察高迁移率族蛋白1(HMGB1)对人肝癌细胞株HepG2体外增殖及转移能力的影响,并阐明其可能的作用机制。方法 MTT法检测细胞增殖能力及细胞对Matrigel基质胶的黏附能力;Transwell小室模型测定细胞侵袭及迁移能力;Western blot和逆转录PCR(RT-PCR)分别检测基质金属蛋白酶2(MMP-2)、基质金属蛋白酶9(MMP-9)和血管内皮生长因子(VEGF)的蛋白及mRNA表达情况。结果 HepG2经不同质量浓度(10、100、1 000ng/mL)的重组人HMGB1(rHMGB1)干预,24、48、72h细胞增殖能力均明显高于对照组(P<0.01);随着时间和浓度的增加,细胞增殖能力逐渐增强。100ng/mL的rHMGB1干预HepG2 48h,细胞对Matrigel基质胶的黏附能力较对照组明显增高(P<0.01),侵袭和迁移实验中穿膜细胞数均明显多于对照组(P<0.01)。此外,rHMGB1可明显上调MMP-9和VEGF的蛋白及mRNA表达水平(P<0.01),但MMP-2蛋白及mRNA表达与对照组相比差异无统计学意义(P>0.05)。结论 HMGB1可促进人肝癌细胞的增殖、黏附、侵袭及迁移能力,这可能与上调MMP-9和VEGF蛋白及mRNA表达水平有关。     

siRNA沉默EZH2基因对人宫颈癌细胞侵袭转移的影响

目的探讨靶向沉默EZH2基因对宫颈癌细胞侵袭转移的影响及其分子机制。方法采用化学合成siRNA瞬时转染人宫颈癌C33A细胞,沉默EZH2基因的表达。通过细胞划痕实验、Transwell小室侵袭实验、软琼脂克隆形成实验,观察沉默EZH2对宫颈癌细胞迁移、侵袭及体外成瘤能力的影响,Western blot法检测MMP2的表达变化。结果 EZH2siRNA转染C33A细胞后,细胞划痕及Transwell小室侵袭实验结果均显示宫颈癌细胞的迁移、侵袭能力明显减低,差异具有统计学意义;软琼脂克隆形成实验表明,EZH2沉默后克隆形成数目明显减少,差异具有统计学意义;Western blot结果显示MMP2表达水平下调。结论沉默EZH2基因表达能显著抑制宫颈癌C33A细胞的侵袭转移能力,其作用机制可能通过下调MMP2来实现。     

人CAP1蛋白真核表达及细胞定位与功能

目的构建CAP1蛋白真核表达质粒并使之在细胞内得以表达,确定CAP1蛋白在细胞中的定位及其对细胞迁移的影响。方法以HeLa细胞cDNA为模板,经PCR获取CAP1编码区cDNA,将该编码区cDNA序列插入pCMV-Myc质粒中,构建带Myc标签的真核表达重组质粒。重组质粒转染至293细胞中,Western blot方法检测其在真核细胞内的表达;重组质粒转染HeLa细胞,免疫荧光法检测其细胞内的定位,划痕实验观察其对细胞迁移的影响。结果成功构建了CAP1真核表达重组质粒,并在真核细胞内成功表达,确定CAP1定位于细胞质中,划痕实验证明CAP1过表达的细胞迁移能力明显下降。结论在真核细胞中成功表达了CAP1重组质粒且CAP1定位于细胞质,其过表达对细胞迁移有抑制作用,为研究CAP1的生理功能奠定实验基础。     

LncRNA LOC90024对肺癌细胞生长、迁移和侵袭的影响

目的探索新长链非编码RNA(LncRNA)LOC90024对肺癌A549细胞生长、迁移和侵袭的影响。方法 RTqPCR检测LOC90024在人肺癌细胞和人正常肺上皮细胞的表达水平。构建LOC90024过表达质粒并在A549细胞内表达,RT-qPCR检测LOC90024表达效果,MTT、划痕实验和Transwell小室法分别检测LOC90024对A549细胞生长、迁移和侵袭的影响。结果成功构建LOC90024过表达质粒,RT-qPCR结果证实实现过表达;RT-qPCR结果显示LOC90024在肺癌细胞的表达高于人正常肺上皮细胞;MTT检测结果显示在A549细胞中过表达组较空载体组吸光值显著增加;划痕实验结果显示过表达组与空载体组相比,细胞划痕愈合能力明显增加;Transwell小室实验结果显示过表达组细胞穿膜数较空载体组明显增加,A620的吸光度值增高。结论过表达LOC90024可促进肺癌细胞A549的生长、迁移和侵袭能力,提示LncRNA LOC90024可能在肺癌发生发展中发挥癌基因的作用,有望成为肺癌治疗的新靶点。     

做好筑养路机械设备的管、用、保、修、租

随着我国公路建设的蓬勃发展。现代化的筑养路机械设备已广泛被施工企业所使用，并在工作中积累了丰富的经验。为了促进企业设备技术创新、设备管理创新．中国公路建设行业协会筑养路机械分会于2005年4月21日在古城西安召开了”全国公路建设行业设备管理与技术经验交流会”，目的是将企业在设备管理、使用、保养、维修、租赁方面所取得的成功经验进行交流．进一步提高筑养路机械行业的整体水平。     

简易的校园多媒体调频自动播放系统

介绍了以多媒体电脑软硬件构成的电脑数码音频录制及调频广播节目自动播放系统。该系统简单、实用、方便、可靠，为实现广播节目制作数码化和播放自动化提供了可能。     

伪科学、科学作伪与伪科学思潮

本文简要分析了伪科学、科学作伪与伪科学思潮这三个概念之间的差别和联系 ,并进一步分析了由科学作伪演变成伪科学思潮的本质特征     

Zgv上（gv，，g，3，λ）-Mendelsohn差族的存在谱

差族是组合设计理论中一类十分重要的设计，利用差族可以有效地构做其他各类设计．给出了Zgv上（gv，g，3，λ）-Mendelsohn差族存在的充分必要条件．     

中华工程教育学会

中华工程教育学会（Institute of Engineering Education, Taiwan, R. O. C. , IEET）成立于2003年。 IEET为依法设立、非以营利为目的之社会团体,其宗旨在于研究、推广工程及科技教育,培育专业人才,服务社会,促进经济发展。     

����VISSIM��Excel VBA��MATLAB�ķ���ƽ̨�о�

本文提出了利用Excel VBA作为主控程序将VISSIM与MATLAB进行集成构建仿真平台的方法,解决了直接对VISSIM二次开发编程难度大、耗时长的问题.该方法综合Excel VBA与VISSIM、MATLAB的接口编程容易,且MATLAB具有强大的工具箱、库函数和擅长处理矩阵的优点,其中VISSIM和MATLAB作为Excel VBA的调用对象,利用MATLAB编制新建交通控制模型的代码,利用VISSIM模拟车流运行和提取各种交通运行性能指标.具体地,VISSIM与Excel之间采用COM数据通讯接口进行集成,Excel与MATLAB之间采用Excel Link扩展接口进行集成.采用这种方法建立的交通控制仿真平台为研究验证新型的交通控制模型提供了有效途径,最后给出了一个基于该控制仿真平台建立的Q学习配时优化模型的实例.     

法国里昂的交通——安全&#183;绿色&#183;智能

欧洲公路隧道在不到三年时间内(1999年3月～2001年10月)发生三起重大火灾事故。分别为：勃朗峰隧道、陶恩隧道．圣哥达隧道，均在阿尔卑斯山脉之中。里昂作为通往法意边境的阿尔卑斯山脉的主要城市，深受1999年3月勃朗峰隧道恐怖火灾的影响。火灾使勃朗峰隧道关闭三年，之后，法国运输部对公路网中80％的隧道做了技术改造。     

现行公路工程法律法规、标准、规范、规程

随着我国公路建设的迅猛发展，新材料、新技术和新工艺不断涌现，公路工程的法律法规、标准规范都在不断发展，从而满足了日益增长的公路建设需求。本文梳理了我国现行公路工程法律法规、标准规范，以便于广大从业人员查阅。     

构建“产学研用资政”一体化智能制造公共研发平台

根据我国智能制造产业现状,以研究和开发促进产业技术进步和结构调整的关键共性技术为目的,探索以"用"为中心的"产学研用资政"协同创新机制下智能制造公共研发平台的建设思路和运行机制。