龙葵素通过ROS/p38信号通路诱导人前列腺癌细胞凋亡

目的探讨龙葵素对前列腺癌细胞Du145和LNCaP凋亡的分子机制。方法应用MTT法检测龙葵素对Du145和LNCaP细胞活力的影响,流式细胞术检测龙葵素对Du145和LNCaP细胞中活性氧的生成及细胞凋亡的影响,Western印迹法检测龙葵素对细胞内p38和p-p38蛋白水平的影响。结果龙葵素能显著抑制Du145和LNCaP细胞的细胞活力,且呈现剂量依赖性(P<0.01),ROS清除剂NAC能显著抑制龙葵素对细胞活力的抑制作用。40μmol/L龙葵素作用细胞24h能诱导细胞ROS生成和细胞凋亡,并促进p38磷酸化,NAC能显著抑制龙葵素诱导的细胞凋亡和p38的磷酸化,p38磷酸化抑制剂能够显著抑制龙葵素诱导的细胞凋亡。结论龙葵素诱导ROS的产生,通过激活p38通路诱导人前列腺癌细胞凋亡。     

小剂量顺铂增加人宫颈癌Hela和Siha细胞对光动力治疗敏感性的研究

目的 探讨小剂量顺铂增加入宫颈癌Hela和Siha细胞系对光动力治疗的敏感性及细胞凋亡的机理.方法 将Hela和Siha细胞分为空白对照组、单纯光动力治疗组、单纯顺铂治疗组和光动力加顺铂治疗组,MTT法检测各组入宫颈癌细胞株Hela和Siha的增殖情况.采用免疫细胞化学法检测各组Hela和Siha细胞受作用后P185c-erbB-2蛋白的表达情况.结果 顺铂和光动力治疗联合应用导致细胞凋亡的程度均明显强于单一顺铂作用或光动力作用,细胞中P185c-exbB-2蛋白的表达下降程度也与之相一致.但是先顺铂后光动力治疗和先光动力治疗后顺铂相比,作用效果差异不明显.结论 顺铂和光动力联合治疗在体外对人宫颈癌Hela和Siha细胞有明显增殖抑制作用,强于单独一种方法治疗,其机理可能与抑制P185c-erbB-2表达有关.     

外源磷脂酰乙醇胺诱导人宫颈癌HeLa细胞凋亡的研究

目的 磷脂酰乙醇胺(phosphatidylethanolamine, PE)在细胞凋亡的早期由细胞膜内侧翻转到外侧,与磷脂酰丝氨酸共同成为细胞凋亡的早期信号,但是其在凋亡中的作用尚不清楚.本研究探讨了PE对HeLa细胞凋亡的影响.方法 实验以人宫颈癌HeLa细胞系为材料,分别设置了空白对照组、0.125、0.25、0.5和1 mmol/L PE处理组.以MTT检测细胞生长情况,PI-流式细胞仪法检测细胞周期,Annexin V-PI法检测细胞凋亡.结果 与对照组相比,PE各处理组对HeLa细胞生长的抑制作用呈剂量与时间依赖性,并诱导细胞凋亡发生,但不影响细胞周期.结论 PE通过诱导细胞凋亡而抑制HeLa细胞的生长.     

miR-106b对鼻咽癌细胞凋亡的促进和对增殖的抑制作用

目的探讨miR-106b对鼻咽癌细胞凋亡和增殖的影响。方法应用miRNA芯片分析获得鼻咽癌组织和癌旁正常组织表达差异的miRNA,TaqMan miRNA检测试剂盒和实时荧光定量PCR分别检测miR-106和RhoC mRNA在鼻咽癌和癌旁组织中的表达,用miRnada预测miR-106b和靶基因的结合位点,采用双荧光素酶验证靶基因,Western blot检测miR-106b调控靶基因RhoC的表达水平。用Annexin V-PI和TUNEL检测miR-106b对鼻咽癌细胞凋亡的影响,用MTT检测miR-106b对鼻咽癌细胞增殖的影响。结果 miRNA芯片分析发现鼻咽癌组织中miR-106b的表达较癌旁正常组织低。RT-PCR结果显示miR-106b在鼻咽癌组织中表达减少(P<0.05),RhoC在鼻咽癌组织中表达增加(P<0.05),miR-106b和RhoC在鼻咽癌组织中表达呈负相关(r=―0.586 6,P<0.001)。荧光素酶报告基因实验结果显示miR-106b组荧光素酶活性低于空质粒组(P<0.05),Western blot结果显示miR-106b组鼻咽癌细胞中RhoC的表达较空质粒组降低(P<0.05)。Annexin V-PI和TUNEL结果显示,miR-106b组鼻咽癌细胞凋亡较空质粒组增加(P<0.05);MTT结果显示miR-106b组鼻咽癌细胞增殖能力较空质粒组降低(P<0.05)。结论 miR-106b可能通过下调RhoC的表达诱导鼻咽癌细胞凋亡并抑制鼻咽癌细胞增殖。     

青蒿琥酯抑制人子宫内膜癌HEC-1B细胞增殖及诱导其凋亡的机制

目的研究青蒿琥酯对人子宫内膜癌HEC-1B细胞的作用及其抗癌机制。方法 MTT法观察细胞毒作用,流式细胞术测定细胞凋亡率并进行细胞周期分析,RT-PCR法检测人子宫内膜癌HEC-1B细胞用药组与对照组Livin、Caspase-3mRNA表达。结果 MTT检测显示青蒿琥酯抑制HEC-1B细胞生长且生长抑制作用呈剂量-时间依赖性;流式细胞仪检测示青蒿琥酯作用使G0/G1期细胞比例上升(P<0.05),G2/M期细胞比例下降(P<0.05);对照组、5、20、80mg/L青蒿琥酯组细胞48h凋亡率(%)分别为6.64±0.19、6.92±0.28、36.42±0.77和11.77±0.58。实验组与对照组相比,5mg/L青蒿琥酯组凋亡率无统计学差异,20、80mg/L青蒿琥酯组凋亡率均有统计学差异(P<0.05);RT-PCR结果显示,青蒿琥酯组Livin mRNA表达下调,Caspase-3mRNA表达上调。结论青蒿琥酯体外抑制人子宫内膜癌细胞HEC-1B的生长;青蒿琥酯可能通过抑制Livin mRNA表达、进而增加Caspase-3mRNA表达,诱导子宫内膜癌HEC-1B细胞发生细胞周期阻滞,促进其凋亡,抑制肿瘤细胞增殖。     

5-氨基乙酰丙酸光动力疗法对人卵巢癌细胞的杀伤作用

目的 探讨5-氨基乙酰丙酸(5-aminolevulinic acid,5-ALA)介导的光动力疗法(photodynamic therapy,PDT)对体外培养的人卵巢癌3AO细胞的杀伤效应.方法 显微镜观察细胞形态;MTT法检测5-ALA介导的PDT(5-ALA-PDT)对3AO细胞增殖的抑制作用;PI染色及Annexin V-PI双染结合流式细胞术分析5-ALA-PDT对3AO细胞的细胞周期及死亡方式的影响.结果 5-ALA-PDT后3AO细胞出现典型的凋亡形态学改变;细胞抑制率随着5-ALA浓度及激光能量密度的升高而升高(P<0.01),当光敏剂浓度达到一定水平时,抑制率不再相应升高,该作用存在浓度饱和现象;流式细胞术显示PDT后细胞发生了G0/G1期生长停顿(P<0.05),有明显的晚期凋亡和继发性坏死(P<0.01).结论 5-ALA对卵巢癌3AO细胞有杀伤作用;凋亡是5-ALA-PDT杀伤卵巢癌细胞的一种机制.     

紫杉醇脂质体对乳腺癌细胞SK-BR-3的放疗增敏作用及其机制

目的探索紫杉醇脂质体(力扑素)对乳腺癌细胞株SK-BR-3是否具有放疗增敏作用及其放疗增敏机制。方法利用MTT法检测放疗组、单药紫杉醇脂质体(以下简称单药组)及紫杉醇脂质体联合放疗(以下简称联合组)在不同时间对乳腺癌细胞SK-BR-3的生长抑制作用。利用流式细胞仪检测放疗组、单药组及联合组对细胞周期及凋亡的影响。利用Western blot检测凋亡相关蛋白Caspase-3、Bcl-2及Bax在不同处理组中的表达,探索紫杉醇脂质体放疗增敏作用的机制。结果 MTT结果显示放疗组、单药组及联合组均具有细胞生长抑制作用,与细胞对照组相比差异具有统计学意义(P<0.05),而且联合组较单药及放疗组具有更显著的细胞生长抑制作用,差异具有统计学意义(P<0.05);细胞凋亡结果显示放疗组、单药组及联合组凋亡细胞均明显增加,与对照组相比差异具有统计学意义(P<0.05),并且联合组在细胞周期中均出现了明显的凋亡峰;Western blot结果显示,促凋亡蛋白Caspase-3和Bax的表达在放疗组、单药组和联合组中均升高,与对照组相比差异具有统计学意义(P<0.05),并且联合组升高较放疗组及单药组更为显著,差异具有统计学意义(P<0.05),而抗凋亡蛋白Bcl-2的表达在放疗组、单药组及联合组均减低,与对照组相比差异具有统计学意义(P<0.05),而联合组较放疗组及单药组降低更明显,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论紫杉醇脂质体具有明显的放疗增敏作用,并且可能通过调控凋亡相关蛋白的表达引起细胞凋亡来发挥其放疗增敏作用。     

羟基红花黄色素A对MPP~+诱导的SH-SY5Y细胞凋亡的保护作用

目的观察羟基红花黄色素A(HSYA)对MPP+诱导的SH-SY5Y细胞凋亡的保护作用,并探讨其作用机制。方法采用MTT法检测细胞存活率,流式细胞术检测细胞凋亡率;二乙酸二氯荧光素盐(DCFH-DA)法检测细胞内活性氧(ROS)含量;罗丹明123(Rhodamine123)染色法检测细胞线粒体膜电位;Western blot法检测Cyt-C、Bcl-2、Bax、Caspase-3和Caspase-9的表达。结果 1mmol/L MPP+处理SH-SY5Y细胞48h后,细胞存活率显著降低,并诱导细胞产生凋亡,凋亡率达(38.6±1.8)%。而HSYA(15、60、120μmol/L)预处理1h,可明显增加SH-SY5Y细胞存活率(P<0.001),并能有效抑制MPP+诱导的细胞调亡(P<0.01);可明显抑制MPP+诱导的细胞内ROS的增加(P<0.001);也能有效抑制MPP+诱导的细胞线粒体膜电位的降低(P<0.01)。120μmol/L HSYA预处理能显著性增加Bcl-2/Bax比值(P<0.01);能够明显抑制MPP+诱导的胞质Cyt-C的释放(P<0.05)和Caspase-3、Caspase-9的高表达(P<0.05,P<0.05)。结论 HSYA预处理能明显提高MPP+诱导的SH-SY5Y细胞损伤的细胞存活率,可有效抑制细胞调亡的发生,其机制可能与抑制细胞线粒体凋亡途径有关。     

Sp2对宫颈癌HeLa细胞增殖的影响及Cyclin D1的表达变化

目的研究Sp2对宫颈癌Hela细胞增殖的影响及其分子机制。方法应用Real-time PCR和Western blot分析宫颈癌组织中Sp2表达变化及其Sp2siRNA对Sp2和Cyclin D1mRNA及蛋白表达的影响;MTT比色法分析Sp2对宫颈癌Hela细胞增殖活力的影响;采用流式细胞仪分析对细胞周期和细胞凋亡的影响。结果 Sp2在宫颈癌组织中表达显著上调;Sp2siRNA抑制宫颈癌Hela细胞增殖;Sp2siRNA组与对照组相比,S期与G2/M期细胞数量显著减少(P<0.01),G1/G0期细胞数量显著增加(P<0.01),而且Sp2与Cyclin D1在mRNA和蛋白水平的表达均显著下调(P<0.01)。结论 Sp2通过上调Cyclin D1的表达促进宫颈癌Hela细胞增殖。     

虾青素预处理对体外氧化应激诱导内皮祖细胞凋亡的保护作用

目的探讨虾青素对体外氧化应激诱导的人外周血内皮祖细胞凋亡的影响及机制。方法体外培养人外周血单核细胞源的内皮祖细胞,分为正常对照组、模型组(叔丁基过氧化氢100μmol/L)、虾青素+叔丁基过氧化氢(虾青素0.1、1、10nmol/L预处理24h后,再加终浓度为100μmol/L的叔丁基过氧化氢溶液继续培养6h)组。MTT法检测细胞存活率;DAPI染细胞检测细胞凋亡率;DCFH-DA法检测细胞内活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平;比色法检测半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(Caspase-3)活性;JC-1法测定线粒体膜电位。结果与正常对照组比较,叔丁基过氧化氢(100μmol/L)能明显造成内皮祖细胞凋亡(P<0.05)。虾青素可降低叔丁基过氧化氢引起的内皮祖细胞凋亡,表现为细胞凋亡率减少(P<0.05),线粒体膜电位增加,Caspase3表达减弱。结论虾青素对叔丁基过氧化氢诱导的内皮祖细胞凋亡具有保护作用,其机制可能与保护线粒体功能有关。