芳香硫酸酯酶定点饱和突变方案的比较

目的比较随机引物与精确引物PCR扩增实施绿脓杆菌芳香硫酸酯酶(Pseudomonas aeruginosa arylsulfatase, PAAS)定点饱和突变的整体效率及成本,以建立高效实用的定点饱和突变方案。方法以大肠杆菌碱性磷酸酶(Escherichia coli alkaline phosphatase, ECAP)与PAAS融合表达质粒为模板,分别用针对PAAS目的位点的随机引物、精确引物等量混合物及单个精确引物,进行全质粒PCR扩增构建定点饱和突变体库;碱裂解细胞后高通量测定PAAS突变体与ECAP活性比值进行筛选,比较3种定点饱和突变建库方案需筛选的单克隆数量、所获突变体种类、整体耗时、整体成本及影响因素。结果用随机引物PCR对M72位定点饱和突变有明显密码子偏好性,筛选超600个单克隆仅获得10种预期突变体,但对G138位定点饱和突变未见明显的密码子偏好性且筛选不到150个单克隆获得18种预期突变体;精确引物等量混合物对M72位实施定点饱和突变,筛选不超过190个克隆成功获得19种预期突变体;单个精确引物对M72位逐个PCR实施定点饱和突变,仅各筛选2个单克隆就获得19种预期突变体。单个精确引物逐个PCR实施定点突变所获饱和突变体库完整,需筛选的单克隆数最少,总耗时和总成本最低;相比之下,用随机引物和精确引物等量混合物实施定点饱和突变时,所需筛选的单克隆数、整体耗时及成本均显著增加。结论解析序列-活性关系时,用单个精确引物逐个PCR实施定点饱和突变有显著整体成本和效率优势;仅筛选阳性突变体时,用精确引物等量混合物进行PCR建库在成本和效率上更有优势。     

深部引水隧洞交岔口稳定性仿真计算分析

深部隧洞交岔口稳定性受围岩性质、隧洞断面等诸多因素影响,围岩的力学特性复杂。依托山西省中部引黄工程,基于ABAQUS有限元软件对隧洞交岔口进行仿真分析,研究了断面突变交岔口的三角区围岩应力场与位移场的演变规律。结果表明,交岔口三角区侧围岩存在明显的应力集中,易受挤压破裂,需提高支护参数;交岔口断面突变处的衬砌连接处是薄弱部位,局部混凝土会出现拉裂现象,在施工过程中可采取控制弯曲变形措施,尽量修圆衬砌避免倒角。     

故障诊断“三大宝”——油门、阻风、电流表

在汽车故障的直观诊断中，维修人员主要利用油门、阻风及电流表来诊断排除故障，文章介绍利用这三大法宝进行故障诊断的方法。     

静风荷载作用下大跨高墩T构悬灌施工稳定性分析

随着公路交通事业的迅速发展，大跨高墩连续刚构桥已经在桥梁工程领域得到了推广和应用。黄延高速公路第六合同段老庄河特大桥为预应力混凝土连续刚构桥，该桥上部结构采用悬臂灌注。本文重点分析该桥悬臂灌注过程中T构在静风荷载作用下的空间结构行为及静风稳定性，为工程施工提供了理论依据。     

建立中国沿海海域波浪信息系统的构想

文章提出了建立中国沿海海域波浪信息系统，为港口，海岸及海洋工程设计以及海洋环境保护，防灾减灾等提供可靠的依据，并介绍了波浪测量与模拟的发展现状，重点论述了建立波浪信息系统的可行性和具体做法。     

青藏铁路大风天气运输组织方法

青藏高原大风天气多,空气密度小,大风对铁路运输安全的影响与低海拔地区差异较大。利用车辆动力学原理建立列车临界翻车风速模型,分别计算青藏铁路海拔3 000 m和4 000 m冻土和非冻土地区的临界翻车风速和危险翻车风速,以及给定风速条件下车辆限制速度。计算结果表明,青藏铁路临界翻车风速随海拔升高而增大,随冻土路基病害出现而降低。参考英、日等国大风标准,结合青藏铁路的特点,根据危险翻车风速和临界翻车风速,初步提出青藏铁路海拔4 000 m地区安全行车标准及特定运行条件、冻土地区线路出现病害情况下的安全行车标准及特定运行条件。提出列车限速运行、增加车辆载重、提高列车编组水平、提高司机操作水平、改善棚车顶部外形、加强货运检查、注意车辆防溜和风沙地区线路检查等大风天气运输组织措施。     

采用喷风冷却工艺提高淬火钢轨性能的研究

钢轨喷风淬火工艺采用单一的冷却介质压缩空气,使淬火冷却均匀性得到提高,而且不受钢轨表面状态对淬火质量的影响,便于生产管理。由于在冷却装置中加入侧面喷风冷却,淬火硬度分布更合理,有利于提高淬火钢轨抗侧磨能力。线路铺设使用也表明,喷风淬火钢轨比喷雾淬火钢轨具有更好的抗剥离性。根据目前国内淬火线生产状况,提出调整钢轨的成分和采用喷风冷却工艺是当前迫切需要解决的问题。     

采用折风板导流方式降低驾驶室后布置发动机温度

多田野７５２汽车起重机发动机型号为８ＤＣ８，近几年来一直存在发动机温度升高速度快，并持续不下的问题，致使发动机不能连续运行１～２小时，甚至经常需要停车降温，影响生产分析认为产生此问题的主要原因是：驾驶室阻挡减少了自然风，在现在的条件下，采用折风板，将驾驶室下部原来流失的自然风导入水箱前，迫使其通过水箱和发动机两侧，从而起的辅助冷却发动机的作用。     

安全汽车＆汽车安全

从去年秋天到今年春天，有两大“碰撞”引起我国汽车界的关注。一个是2005年9月，法兰克福车展期间发生的全德汽车俱乐部对陆风汽车进行碰撞试验的“陆风事件”，一个是今年2月17日，在天津中国汽车技术研究中心碰撞试验室进行的丰田锐志正面偏重碰撞试验。当然．此试验非彼试验．此碰撞非彼碰撞，其内容，意义各不相同。但除去各自的特征因素，有一点应该是相同的，那就是——都是为了证明汽车的安全性。