微囊化软骨细胞诱导间充质干细胞定向分化治疗兔椎间盘退变的实验研究

目的探讨经微囊化软骨细胞诱导分化的间充质干细胞对兔椎间盘退变的治疗效果。方法将微囊化软骨细胞与间充质干细胞进行共培养,干细胞诱导分化。观察分化后干细胞的免疫学特征、增殖曲线、蛋白多糖及Ⅱ型胶原蛋白合成能力。建立兔椎间盘退变模型,并观察分化后的间充质干细胞对兔椎间盘退变的修复能力。结果经微囊化软骨细胞分化诱导7d后的间充质干细胞,增殖能力未受到明显影响,同时具备了软骨细胞的部分表面特征,能够合成蛋白多糖及Ⅱ型胶原蛋白,且能力优于Transwell对照组。将干细胞植入兔椎间盘退变模型中,在术后16周内,椎间盘的力学性能得到修复,形态及结构也得到了明显改善。结论与传统的Transwell诱导体系相比,微囊诱导体系具有更高的诱导效率;经微囊化软骨细胞诱导的MSCs,植入椎间盘退变模型动物体内后,能更好地维持椎间盘的形态、结构及力学特征。     

体外诱导软骨细胞形成的实验方法研究

本文用19日～21日胎龄的SD种胎鼠的后肢肌肉与同种大鼠骨基质明胶一起做体外诱导培养,培非液为含3 700 mg/L NaHCO_3的DMEM。培养10日时,8个培养物中有7个出现诱导性软骨细胞。培养15、20、25日时,30个培养物(每个时间点10个培养物)中都出现了诱导性软骨细胞。结果表明,本实验所采用的组织培养方法和含3 700 mg/L NaHCO_3的DMEM培养液完全适用于体外诱导软骨细胞形成。     

软骨细胞-骨基质明胶复合物修复兔关节软骨缺损的初步观察

目的　初步观察骨基质明胶 (bonematrixgelatin ,BMG)复合软骨细胞移植修复关节软骨缺损的可行性。方法　BMG复合软骨细胞体外培养 ,并将培养复合物植入同种异体兔膝关节软骨缺损处 ,术后行大体及组织学观察。结果　BMG复合软骨细胞体外培养后能形成软骨组织 ,此“工程软骨”植入兔膝关节软骨缺损处能继续生长发育。结论　BMG复合软骨细胞体外培养及体内移植均能形成软骨组织 ,有可能修复关节软骨缺损     

T-2毒素对胎儿软骨细胞凋亡、Bcl-2和Bax表达的影响及硒的保护作用

目的　探讨T 2毒素对软骨细胞凋亡的作用,和对凋亡调控蛋白Bcl 2 与Bax表达的影响,以及微量元素硒对软骨细胞的保护作用。方法　采用电镜,Annexin V/PI法检测T 2 毒素致人软骨细胞凋亡的情况,采用流式细胞仪检测凋亡相关蛋白Bcl 2和Bax的表达。结果　T 2 毒素可引起软骨细胞发生凋亡的典型电镜形态改变;不同浓度(1~20μg/L)的T 2毒素均可以引起软骨细胞早期凋亡率和晚期凋亡率明显增加,且在一定范围内呈浓度依赖性,T 2毒素浓度为20μg/L时早期凋亡率最高达5.60%,晚期凋亡率最高达8.61%。生理浓度的微量元素硒可部分减弱T 2毒素引起的凋亡;不同浓度(1~20μg/L)的T 2毒素都能引起Bcl 2和Bax表达水平提高,浓度为10~20μg/L时,Bax/Bcl 2比值升高;硒能部分对抗T 2 毒素引起的Bcl 2 和Bax 表达的提高,使Bax/Bcl 2 比值下降,以降低凋亡率。结论　T 2毒素在浓度为1 ~ 20μg/L 时,可以引起软骨细胞凋亡; T 2 毒素引起的软骨细胞凋亡与软骨细胞内Bax/Bcl 2比值升高有关,硒对T 2毒素引起的软骨细胞凋亡有一定保护作用。     

氟对培养的软骨细胞生长的影响

本文报道了氟对培养的软骨细胞生长的影响。传代兔关节软骨细胞在不同氟浓度培养液中培养192 h,结果显示:细胞生长和基质产生量均与氟浓度呈负相关。光镜形态观察各组间未见明显差异。     

PDLLA-CPP复合材料的安全性和生物相容性评价

目的　评价新型可吸收性高强度骨折内固定复合材料PDLLA CPP的生物安全性。方法　采用PDLLA CPP复合材料萃出液腹腔注射最大允许剂量的方法,测定该材料最大耐受量,进行小鼠骨髓细胞微核试验、小鼠精子畸变试验、小鼠骨髓细胞染色体畸变试验及致畸试验等毒理学试验,评价其安全性。同时采用该复合材料与体外培养软骨细胞直接接触法,观察其对软骨细胞生长和增殖的影响,评价其生物相容性。结果　最大耐受量的PDLLA CPP复合材料不影响小鼠骨髓细胞微核率、小鼠骨髓细胞染色体畸变率和小鼠精子畸变率,致畸试验阴性,也不影响软骨细胞生长和增殖。结论　PDLLA CPP复合材料是一种安全的可吸收性生物医用材料,有良好的细胞生物相容性。     

硒、维生素E对自由基损伤培养兔软骨细胞的保护作用

采用细胞培养方法,以黄嘌岭-黄嘌岭氧化酶(XXO)系统产生自由基,造成软骨细胞的自由基损伤;软骨细胞DNA及蛋白多糖的合成受到明显抑制;膜流动性降低;电镜下观察到细胞表面有大小形态各异的囊泡状突起,胞内可见线粒体肿胀或呈固缩样改变、溶酶体增多等超微病理损害。向培养基中提前1d加入硒及维生素E能对抗自由基所致的氧化性损伤。     

氧自由基对人胚软骨细胞DNA基质成分及超微结构的影响

本实验采用体外软骨细胞培养方法,观察由黄嘌呤—黄嘌呤氧化酶产生的自由基对人胚软骨细胞DNA、基质蛋白多糖、胶原合成功能及超微结构的影响。结果表明该酶系产生的自由基抑制人胚软骨细胞DNA、蛋白多糖、胶原的合成,对软骨细胞膜及细胞器具有明显的损伤作用,从而间接说明某些炎性关节疾病时活化中性粒细胞、巨噬细胞释放的氧自由基是引起关节软骨损伤的重要因素。     

雪腐镰刀菌烯醇对培养软骨细胞DNA影响及硒的保护作用

目的　探索雪腐镰刀菌烯醇 (NIV)对培养软骨细胞DNA损伤作用及硒的保护作用。方法　应用软骨细胞单层培养、碱性单细胞微量凝胶电泳、琼脂糖电泳和生化方法检测软骨细胞DNA量及损伤情况。结果　在实验设定的NIV浓度范围内 ,随NIV浓度增加DNA含量减少、DNA受损细胞增多和DNA损伤加重 ,同浓度NIV加硒组损伤情况好于未加硒组。结论　NIV对培养软骨细胞有明显损伤作用 ,加硒有保护作用。