芳香硫酸酯酶定点饱和突变方案的比较

目的比较随机引物与精确引物PCR扩增实施绿脓杆菌芳香硫酸酯酶(Pseudomonas aeruginosa arylsulfatase, PAAS)定点饱和突变的整体效率及成本,以建立高效实用的定点饱和突变方案。方法以大肠杆菌碱性磷酸酶(Escherichia coli alkaline phosphatase, ECAP)与PAAS融合表达质粒为模板,分别用针对PAAS目的位点的随机引物、精确引物等量混合物及单个精确引物,进行全质粒PCR扩增构建定点饱和突变体库;碱裂解细胞后高通量测定PAAS突变体与ECAP活性比值进行筛选,比较3种定点饱和突变建库方案需筛选的单克隆数量、所获突变体种类、整体耗时、整体成本及影响因素。结果用随机引物PCR对M72位定点饱和突变有明显密码子偏好性,筛选超600个单克隆仅获得10种预期突变体,但对G138位定点饱和突变未见明显的密码子偏好性且筛选不到150个单克隆获得18种预期突变体;精确引物等量混合物对M72位实施定点饱和突变,筛选不超过190个克隆成功获得19种预期突变体;单个精确引物对M72位逐个PCR实施定点饱和突变,仅各筛选2个单克隆就获得19种预期突变体。单个精确引物逐个PCR实施定点突变所获饱和突变体库完整,需筛选的单克隆数最少,总耗时和总成本最低;相比之下,用随机引物和精确引物等量混合物实施定点饱和突变时,所需筛选的单克隆数、整体耗时及成本均显著增加。结论解析序列-活性关系时,用单个精确引物逐个PCR实施定点饱和突变有显著整体成本和效率优势;仅筛选阳性突变体时,用精确引物等量混合物进行PCR建库在成本和效率上更有优势。     

专业力量齐发力 复工复产有实招——北海航海保障中心抗疫情保复工侧记

疫情阻击战到了最关键的阶段,保复工、稳发展迫在眉睫。北海航海保障中心(简称“中心”)主动作为,有效履职,积极加强与属地海事、引航、气象、港口等单位的协调沟通,针对辖区LNG、煤炭能源运输提供定制化优先服务,保障各类导助航设施、系统平稳正常运行。新冠肺炎疫情期间,共计为辖区1.7万余艘次船舶航行和13.5万人次旅客安全运送提供了及时、高效的航海保障服务。     

基于能量重心定位的水下防护薄板结构撞击识别方法

为弥补传统能量重心定位方法的不足,综合考虑薄板结构上孔的非对称分布,创造性地提出一种基于加权能量重心定位的撞击识别方法.通过有限元模拟验证该方法的有效性和准确性,结果表明,该方法能快速而准确地对非对称、非连续薄板结构的撞击位置和撞击应力进行识别判定.研究成果可为结构撞击识别方法的改进优化提供理论支持,为工程中复杂结构的撞击监测和识别提供技术支撑.     

智能导引运输车（IGV）在自动化集装箱码头中的应用

采用磁钉导航定位技术的自动导引运输车（AGV）对堆场平行布置的集装箱码头存在应用局限性，本文以广州港南沙四期自动化集装箱码头工程为依托，在分析采用“卫惯导航+多传感器融合”定位技术的新型智能导引运输车（IGV）技术特点和优点的基础上，详细阐述了IGV定位导航、能源补充、维护保养等码头基础设施的设计要点，可为类似自动化集装箱码头工程的设计和建造提供一定的参考。     

水工固定设施的技术检查与质量评价

介绍水工固定设施维修时进行技术检查与质量评价的方法。     

上海世博交通理念--宜人畅达空间

上海世博会的主题“Bette city,better life”，需要更优美的城市，尤其需要与之匹配的“宜人畅达”的交通空间。     

城市中心区停车设施供应研究

随着城市化进程的加快，我国机动车拥有量及道路交通量急剧增加，停车问题已成为诸多城市的难题。本文在分析了城市中心区停车设施供应的影响因素的基础上，建立了停车设施供应与停车需求关系模型以及停车设施供应与路网容量平衡关系模型，对如何合理确定城市中心区停车泊位供应量进行了探讨，并在浙江省台州市滨海工业城启动区块的停车设施供应规划中得到应用，可为我国城市中心区静态交通设施规划提供借鉴。     

冲绳城市单轨运输系统

简要介绍了冲绳城市单轨运输系统的设施和车辆概况.