芳香硫酸酯酶定点饱和突变方案的比较

目的比较随机引物与精确引物PCR扩增实施绿脓杆菌芳香硫酸酯酶(Pseudomonas aeruginosa arylsulfatase, PAAS)定点饱和突变的整体效率及成本,以建立高效实用的定点饱和突变方案。方法以大肠杆菌碱性磷酸酶(Escherichia coli alkaline phosphatase, ECAP)与PAAS融合表达质粒为模板,分别用针对PAAS目的位点的随机引物、精确引物等量混合物及单个精确引物,进行全质粒PCR扩增构建定点饱和突变体库;碱裂解细胞后高通量测定PAAS突变体与ECAP活性比值进行筛选,比较3种定点饱和突变建库方案需筛选的单克隆数量、所获突变体种类、整体耗时、整体成本及影响因素。结果用随机引物PCR对M72位定点饱和突变有明显密码子偏好性,筛选超600个单克隆仅获得10种预期突变体,但对G138位定点饱和突变未见明显的密码子偏好性且筛选不到150个单克隆获得18种预期突变体;精确引物等量混合物对M72位实施定点饱和突变,筛选不超过190个克隆成功获得19种预期突变体;单个精确引物对M72位逐个PCR实施定点饱和突变,仅各筛选2个单克隆就获得19种预期突变体。单个精确引物逐个PCR实施定点突变所获饱和突变体库完整,需筛选的单克隆数最少,总耗时和总成本最低;相比之下,用随机引物和精确引物等量混合物实施定点饱和突变时,所需筛选的单克隆数、整体耗时及成本均显著增加。结论解析序列-活性关系时,用单个精确引物逐个PCR实施定点饱和突变有显著整体成本和效率优势;仅筛选阳性突变体时,用精确引物等量混合物进行PCR建库在成本和效率上更有优势。     

夏利车高速摘档熄火故障的排除

故障现象一辆2005年生产的夏利TJ7101型轿车,采用的是TJ376QE型3缸电控多点燃油喷射汽油发动机,行驶里程7万km。在发动机正常工作温度下,高速行驶中摘档熄火,重新起动发动机,燃烧正常。低速行驶中摘档熄火的现象也时有发生。故障诊断与排除经过路试发现,该车发动机怠速为800～9     

当前形势不宜出台燃油税

日前，财政部部长金人庆在接受中外记者采访时说，实行燃油税有利于减少汽油和柴油的消耗，也有利于对空气和环境的保护。前几年，国家已经研究决定出台燃油税，来取代现在的公路养路费，整个税收设计方案，包括税票都准备好了，但是为什么没有出台呢？     

小议『摩托化』步兵

"摩托化"步兵是指搭乘车辆实施机动、徒步进行作战的兵种.其标志是步兵以车代行,运力为汽油发动机、胶轮车,装备全部由车载:特点是战斗开始前运动速度快,适应各种地形条件,机动灵活.