芳香硫酸酯酶定点饱和突变方案的比较

目的比较随机引物与精确引物PCR扩增实施绿脓杆菌芳香硫酸酯酶(Pseudomonas aeruginosa arylsulfatase, PAAS)定点饱和突变的整体效率及成本,以建立高效实用的定点饱和突变方案。方法以大肠杆菌碱性磷酸酶(Escherichia coli alkaline phosphatase, ECAP)与PAAS融合表达质粒为模板,分别用针对PAAS目的位点的随机引物、精确引物等量混合物及单个精确引物,进行全质粒PCR扩增构建定点饱和突变体库;碱裂解细胞后高通量测定PAAS突变体与ECAP活性比值进行筛选,比较3种定点饱和突变建库方案需筛选的单克隆数量、所获突变体种类、整体耗时、整体成本及影响因素。结果用随机引物PCR对M72位定点饱和突变有明显密码子偏好性,筛选超600个单克隆仅获得10种预期突变体,但对G138位定点饱和突变未见明显的密码子偏好性且筛选不到150个单克隆获得18种预期突变体;精确引物等量混合物对M72位实施定点饱和突变,筛选不超过190个克隆成功获得19种预期突变体;单个精确引物对M72位逐个PCR实施定点饱和突变,仅各筛选2个单克隆就获得19种预期突变体。单个精确引物逐个PCR实施定点突变所获饱和突变体库完整,需筛选的单克隆数最少,总耗时和总成本最低;相比之下,用随机引物和精确引物等量混合物实施定点饱和突变时,所需筛选的单克隆数、整体耗时及成本均显著增加。结论解析序列-活性关系时,用单个精确引物逐个PCR实施定点饱和突变有显著整体成本和效率优势;仅筛选阳性突变体时,用精确引物等量混合物进行PCR建库在成本和效率上更有优势。     

降雨入渗下裂土边坡水分运移时空特征与失稳机理

为探究降雨入渗下裂土边坡水分运移时空特征与失稳机理, 自主研制了足尺模型试验系统和光纤布拉格光栅(FBG)深部柔性位移系统, 对边坡渐进破坏进行了全过程、多物理量联合监测, 揭示了降雨入渗作用下裂土边坡的渐进变形和破坏演化模式; 基于裂土边坡的渐进破坏模式, 提出了土体饱和比概念, 将裂隙深度范围滑体分为饱和层和非饱和层; 以土体饱和度变化描述了含随机分布裂隙的边坡水分运移规律, 并结合刚体极限平衡法探讨了由裂隙控制的边坡失稳机制。研究结果表明: 对于未形成裂隙的边坡, 连续降小雨时浅层变形受表层基质吸力控制; 裂隙形成后, 雨水沿裂隙快速入渗形成暂态饱和区, 导致基质吸力降幅达82.50%~87.14%, 而由其贡献的抗剪强度迅速损失, 从而形成初期溜滑、片蚀等浅层变形, 降雨停止后坡体仍处于蠕变过程, 坡脚与坡顶位移增幅分别为23.40%和19.39%;蒸发后裂隙规模发展增大了雨水对渗流场的影响范围和边坡破坏规模; 土体经历胀缩、蠕变而变得松散, 裂缝区深部土体体积含水率较初始状态的增幅为205.7%;同一降雨条件下, 初始裂隙深度愈深, 稳定系数愈低, 破坏愈快; 对具有同一裂隙深度的边坡, 其稳定系数随土体饱和比的增加逐渐降低, 土体饱和比增长愈快, 表征边坡内部出现大面积连通型饱和区, 这是裂土边坡出现整体失稳的主要原因。      

奥迪200轿车加速无力、撮车

故障现象 一辆奥迪200轿车行驶中换挡加速时有撮车现象,而且提速缓慢,整车动力性能下降。检查与修理 首先验证故障现象。路试中有明显的撮车现象,而且提速困难。发动机怠速运转时,清晰地听到燃油箱中燃油泵运转的“吱、吱”噪音。发动机空载加速时其转速达不到4000r/min。通过测试初步判断,该车动力性能下降的主要原因是燃油泵严重磨损、燃油压力不足而造成的。     

水冷大鲨摩托车润滑油乳化变质故障判断和排除

目前国内125m L排量水冷大鲨款摩托车均配装水冷152M I发动机(150m L排量水冷车则配装157M J发动机),当摩托车行驶数万公里后,其水泵的水封机构(主要是动、静环配研密封处)和旋在汽缸盖水道腔螺纹孔内的工艺闷塞,会在多种因素的影响下产生不同程度的渗漏现象。再加上摩托车行驶     

CA7200E3型轿车为何行驶中会耸车熄火

故障现象：一辆CA7200E3型轿车，高速行车时，达不到最高车速；低速行驶时，有耸车现象，耸车严重时，发动机甚至熄火。     

兰鸟轿车不着车原因在哪

故障现象:1辆日产兰鸟轿车,起动发动机时起动机转动正常,但发动机不能起动。     

制动跑偏故障特例

故障现象:一辆依维柯汽车,在更换了2前轮制动摩擦片和右前轮制动分泵后,便出现了制动向左跑偏的现象,特别是紧急制动时,跑偏现象更为明显。故障检查:对右前轮制动分泵进行排气检查,分泵内无气体排出;测量2前轮制动摩擦片的厚度,其数值均符合技术要求,用手触摸制动盘摩擦面,有轻     

异常波及其对海上结构铃振现象的影响

海上结构物的铃振(Ringing)现象是新近发现的一种高频共振响应现象,对结构物有显著的破坏作用。从实测资料中发现,在恶劣海况下发生的具有强非线性和非对称性的异常波(Freakwave)有可能引起海上结构物的铃振响应。文中综述了可能引起铃振响应的异常波的研究现状及成果,分析了其能量分布,并指出异常波是海上结构物产生铃振现象的机理之一。     

电动车故障排除实例

实例一 故障现象：一辆上海产36V电动车，在使用近两年后出现行车一冲一顿现象，继而无法电动行车。