| Cav1.3 L-型钙通道K228E突变体的构建及功能研究 |
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| 引用本文： | 强华,孙超峰,魏峰,张爱峰,史瑞明,马爱群,崔长琮.Cav1.3 L-型钙通道K228E突变体的构建及功能研究[J].西安交通大学学报(医学版),2009,30(4). |
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| 作者姓名： | 强华 孙超峰 魏峰 张爱峰 史瑞明 马爱群 崔长琮 |
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| 作者单位： | 西安交通大学医学院第一附属医院心内科,教育部环境与疾病相关基因重点实验室,陕西西安,710061 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金资助项目 |
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| 摘 要： | 目的 通过构建Cav1.3基因K228E突变,观察K228E突变对L-型钙通道电生理特性及蛋白表达和转运的影响.确定钙通道α1亚基结构域ⅠS4段上N-端带正电荷的氨基酸对该通道电生理学特性的作用,从而为创建钙通道起搏器奠定基础.方法 ①一步法快速定点诱变构建Cav1.3基因K228E突变体的真核表达载体;②膜片钳观察突变钙通道电流,激光共聚焦技术观察突变钙通道蛋白在细胞内的表达和定位.结果 ①检测表达于HEK293细胞上的L-型钙电流:转染野生型Cav1.3质粒和相关亚基质粒,可检出L-型钙电流,其半激活电压V1/2=(-36.56±2.08)mV、半失活电压V1/2 =(-42.93±0.14)mV(5mmol Ba2+);而转染K228E-Cav1.3质粒和相关亚基质粒的HEK293T细胞上未检测到钙电流;②检测K228E突变通道蛋白在细胞内的表达和定位:转染野生型和突变型Cav1.3质粒及相关亚基质粒,48h后观察到野生型与突变型钙通道蛋白在细胞膜上都有表达.结论 Cav1.3基因K228E突变虽不影响L-型钙通道蛋白质的表达与转运,但却不表达钙通道电流,是一种功能丧失性突变.
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| 关 键 词： | 生物起搏 L-型钙通道 定点诱变 膜片钳 |
Construction and function analysis of K228E mutation of Cav1.3 L-type calcium channel |
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| QIANG Hua,SUN Chao-feng,WEI Feng,ZHANG Ai-feng,SHI Rui-ming,MA Ai-qun,CUI Chang-cong.Construction and function analysis of K228E mutation of Cav1.3 L-type calcium channel[J].Journal of Xi‘an Jiaotong University:Medical Sciences,2009,30(4). |
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| Authors: | QIANG Hua SUN Chao-feng WEI Feng ZHANG Ai-feng SHI Rui-ming MA Ai-qun CUI Chang-cong |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Cav1 3 |
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