| 抗人γ-精浆蛋白VH单域抗体基因的构建、表达及空间构象分析 |
| |
| 作者单位： | 袁建林（第四军医大学西京医院泌尿外科，西安
710033）;王智（第四军医大学基础部生物化学与分子生物学教研室，西安
710032）;武国军（第四军医大学西京医院泌尿外科，西安 710033）;王禾（第四军医大学西京医院泌尿外科，西安 710033）;王栋（第四军医大学西京医院泌尿外科，西安 710033）;郝晓柯（第四军医大学唐都医院中心实验室，西安 710038） |
| |
| 基金项目： | 基金项目：国家自然科学基金资助(39900180) |
| |
| 摘 要： | 目的扩增出抗人γ-精浆蛋白(γ-Sm)单克隆抗体(mAb)的重链可变区(VH)单域抗体基因，并进行原核表达及空间构象分析。方法从分泌抗γ-SmmAb的杂交瘤细胞系E4B7中提取总RNA，经RT-PCR扩增VH单域抗体基因，将其克隆到融合蛋白表达载体pGEX-4T-1中进行表达，并利用计算机软件对表达产物进行空间构象分析。结果VH单域抗体基因全长363bp，含起始码和终止码。将其克隆到pGEX-4t-1内，转化大肠杆菌DH5α，获得高效表达，表达量占全菌总蛋白质的38％，以包涵体形式存在。经初步纯化和复性后，用谷胱甘肽(GST)亲和色谱纯化，再经凝血酶水解获得抗γ-SmVH单域抗体。竞争结合抑制实验证明，该表达产物具有前列腺癌细胞亲和活性。空间构象分析结果显示，该抗体具有完整的抗原结合位点。结论构建成功抗γ-Sm的VH单域抗体，为进一步临床应用奠定基础。
|
| 关 键 词： | 人γ-精浆蛋白 单域抗体 克隆 表达 |
| 文章编号： | 0258-0659(2001)03-0197-04 |
| 修稿时间： | 2001年2月20日 |
Construction, expression and space conformation analysis of anti-human |
| |
| Abstract: | |
| |
| Keywords: | |
|
