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| 靶向巨噬细胞膜蛋白Vsig4特异性纳米抗体的构建和筛选 | |
| 作者单位： | ;1.西安交通大学医学部基础医学院;2.西安交通大学环境与疾病相关基因教育部重点实验室;3.西安交通大学生命科学与技术学院 |
| 摘 要： | 目的构建V-set and immunoglobulin domain containing 4(Vsig4)特异性纳米抗体,以期作为巨噬细胞的分子探针。方法用Vsig4重组蛋白对羊驼进行免疫,分离血液中的淋巴细胞,利用噬菌体展示技术,构建噬菌体展示文库,经过连续3次生物淘筛获得与Vsig4蛋白结合的噬菌体,经测序和基因比对所得VHH序列,用ELISA法筛选出抗Vsig4的高亲和力纳米抗体,并用Vsig4稳定表达细胞系验证纳米抗体的结合能力。结果成功构建了插入率为70%、库容量为7.27×107的噬菌体表达文库,经过克隆筛选获得136个Vsig4阳性单克隆,经测序获得15个不同的VHH基因,将这些基因克隆至原核表达体系,表达和纯化后获得了高纯度的Vsig4纳米抗体,其中Nb119的亲和力最高,并且可以与Vsig4稳定表达细胞系结合。结论成功构建并筛选了特异性、高亲和力的Vsig4纳米抗体,以期用于检测巨噬细胞表面Vsig4的表达和构建特异性分子探针。 |
| 关 键 词： | Vsig4 纳米抗体 噬菌体展示文库 生物淘筛 亲和力鉴定 |
Construction and screening of nanobody targeting macrophage membrane receptor Vsig4 |
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