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| 重组人细胞角蛋白9 cDNA的原核表达及纯化 | |
| 作者单位： | ;1.西安交通大学第一附属医院转化医学中心;2.西安交通大学医学部基础医学院生物化学与分子生物学系;3.陕西省肿瘤精准医学重点实验室;4.西安交通大学第一附属医院皮肤科 |
| 摘 要： | 目的克隆人细胞角蛋白CK9的cDNA,通过原核表达系统表达融合蛋白并进行纯化和鉴定。方法从人角质形成细胞系(HaCaT)中提取RNA,以RT-PCR反转录cDNA,使用特异性引物PCR扩增出人CK9编码区全长并克隆到pET-28a载体上,再用IPTG诱导融合蛋白his-CK9的表达。表达的融合蛋白通过Ni 2+亲和层析纯化后,进行SDS-PAGE和Western blot鉴定。结果测序鉴定构建表达载体中CK9的cDNA序列正确;融合蛋白his-CK9可在大肠杆菌中诱导表达;纯化的融合蛋白his-CK9纯度较高;纯化的融合蛋白his-CK9可与商品化CK9抗体特异性结合。结论成功构建原核表达载体pET-28a-CK9,并成功诱导及纯化融合蛋白his-CK9。 |
| 关 键 词： | 原核表达系统 细胞角蛋白9 融合蛋白 细胞骨架 |
Prokaryotic expression and purification of the cDNA of recombinant human cytokeratin 9 |
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| Keywords: | |