| hGPx-1-198Leu真核表达载体的构建与鉴定及在H9C2细胞中的表达 |
| |
| 引用本文： | 王素琴,牛小麟,朱延河,等. hGPx-1-198Leu真核表达载体的构建与鉴定及在H9C2细胞中的表达[J]. 西安交通大学学报(医学版), 2014, 0(2): 152-156 |
| |
| 作者姓名： | 王素琴 牛小麟 朱延河 等 |
| |
| 作者单位： | ;1.西安交通大学医学院第二附属医院心内科;2.西安交通大学医学院地方病研究所 |
| |
| 摘 要： | 目的构建含有人GPx-1基因Pro198Leu多态的真核表达载体,为深入研究GPx-1基因Pro198Leu多态在相关疾病中的作用与机制提供依据。方法采用全基因合成的方法合成含多态位点的人GPx-1基因cDNA片段,同时在基因5′端和3′端分别引入BamHⅠ和NotⅠ酶切位点,通过限制性内切酶酶切目的片段和真核表达载体pEGFPN3,再用T4DNA连接酶将含有目的基因的片段定向插入到载体pEGFP-N3真核人巨细胞病毒启动子下游。连接产物转化至DH5α中。挑取克隆、提取质粒进行鉴定。将hGPx-1-198Leu真核表达载体转染HEK293细胞,观察转染效率,并采用RT-PCR检测转染重组载体后细胞中GPx-1的mRNA表达水平。重组载体转染H9C2细胞,观察补硒之后的GPx-1表达情况。结果获得目的基因cDNA片段全长869bp,PCR和测序鉴定载体中含有人GPx-1-198Leu基因cDNA。重组载体转染HEK293细胞后检测到GPx-1的mRNA水平比未转染组及空质粒转染组明显升高,为深入研究GPx-1基因Pro198Leu多态在相关疾病中的作用与机制奠定了基础。H9C2细胞在转染后GPx-1蛋白水平升高并且随着硒浓度的升高而升高。结论成功构建了含Pro198Leu多态位点的hGPx-1真核表达载体,并且也插入了保证该基因有效表达的硒代半胱氨酸插入序列。
|
| 关 键 词： | GPx-1基因 Pro198Leu多态 真核表达载体 转染 H9C2细胞 硒 |
Construction and identification of hGPx-1-198Leu expression vector and its expression in rat H9C2cells |
| |
| Abstract: | |
| |
| Keywords: | |
| 本文献已被 CNKI 等数据库收录！ |
|
