| 大鼠PER2基因RNAi慢病毒载体的构建及干扰效率的测定 |
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| 引用本文： | 王翔凌,孙宁玲,马丽萍,等. 大鼠PER2基因RNAi慢病毒载体的构建及干扰效率的测定[J]. 西安交通大学学报(医学版), 2014, 0(1): 16-21 |
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| 作者姓名： | 王翔凌 孙宁玲 马丽萍 等 |
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| 作者单位： | ;1.北京大学人民医院心内科;2.卫生部北京医院心内科;3.北京大学人民医院中心实验室 |
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| 摘 要： | 目的构建及筛选有效干扰大鼠血管平滑肌细胞PER2基因的shRNA慢病毒载体,并测定其干扰效率。方法设计大鼠PER2的siRNA靶序列,插入慢病毒载体质粒pGLV-U6-EGFP中,构建pLentivirus-per2-rat表达重组体并转染至A7r5大鼠胸主动脉血管平滑肌细胞内,利用Real-time PCR方法检测PER2基因的mRNA表达水平,筛选有效沉默钟基因PER2表达的RNAi慢病毒载体。结果经电泳、基因测序证实插入的目的序列正确,有PER2表达,成功构建了pLentivirus-per2-rat表达重组体;转染慢病毒载体pLentivirus-per2-rat至A7r5大鼠胸血管平滑肌细胞,测定转染效率达70%;Real-time PCR检测PER2基因的mRNA相对表达量,筛选出有效干扰大鼠血管平滑肌细胞钟基因Per2表达的siRNA片段,使PER2mRNA表达量下调约84%。结论成功构建了大鼠PER2的RNAi慢病毒载体,为进一步研究时钟基因的功能奠定了基础。
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| 关 键 词： | PER2基因 RNA干扰 慢病毒载体 血管平滑肌细胞 时钟基因 |
Construction of lentivial RNA interference vectors of rat PER2 gene and determination of its interference efficiency |
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