两种实时定量RT-PCR方法检测miRNAs表达的技术分析 |
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引用本文: | 闵自信,杜小云,宁启兰,钟楠楠,郑悦雯,韩燕,吕社民,张蕊.两种实时定量RT-PCR方法检测miRNAs表达的技术分析[J].西安交通大学学报(医学版),2013,34(2):258-262. |
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作者姓名: | 闵自信 杜小云 宁启兰 钟楠楠 郑悦雯 韩燕 吕社民 张蕊 |
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作者单位: | 西安交通大学医学院遗传学与分子生物学系 |
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基金项目: | 国家自然科学基金资助项目(No.81170017)~~ |
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摘 要: | 目的比较两种实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)方法检测microRNAs(miRNAs)表达含量的技术差异,优化不同实验目的和条件下研究miRNAs表达的技术方法。方法取21d和42d两个时间点的SD大鼠关节软骨组织,采用Trizol法提取总RNA备用。选取rno-miR-15b、rno-miR-16、rno-miR-195、rno-miR-497作为研究对象,分别用茎环引物和试剂公司提供的试剂盒方法反转录总RNA,并应用实时定量PCR方法检测这些miRNAs的表达量。提取人血浆中总RNA,用上述两种RT-qPCR方法实时定量检测has-miR-16的表达量。结果两种方法检测这些miRNAs表达量,在大鼠21d和42d这两个时间点其表达量变化趋势相同,都呈现增高的趋势,这与我们前期Solexa测序结果相同。在血浆中的结果显示,其中茎环引物反转录方法灵敏度相对较高。结论茎环引物法在少量几个重要的miRNAs检测中具有优势,而试剂盒方法适用于大量miRNAs的筛查。
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关 键 词: | miRNAs 茎环引物 实时定量反转录聚合酶链反应 软骨 血浆 |
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