| pEGFP-N1-TNFα表达载体的构建与鉴定 |
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| 作者姓名： | 任艳鑫 赵留芳 杨洁 孙瑞梅 王虎 李晓江 隋军 |
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| 作者单位： | 昆明医科大学第三附属医院头颈肿瘤研究中心 |
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| 基金项目： | 云南省社会发展科技计划(应用基础研究项目,No.2009ZC119M);云南省社会发展科技计划(应用基础研究重点项目,No.2009CC026);云南省卫生科技内设研究机构资助项目(No.2011WS0068) |
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| 摘 要： | 目的构建pEGFP-N1-TNFα重组质粒并鉴定,为转导CIK细胞并定位表达奠定基础。方法以pMD19Sim-ple T-TNFα为模板,PCR扩增TNFαCDS区片段,将PCR产物进行15g/L琼脂糖凝胶电泳,并回收TNFα条带,用BglⅡ和HindⅢ将TNFα的PCR片段及目的载体pEGFP-N1双酶切,然后进行连接。连接产物转化至DH5α中。挑取克隆,提质粒,进行鉴定。结果 PCR扩增片段、双酶切出现722bp大小的目的基因条带与预期结果相符;插入片断测序结果与合成的寡核苷酸序列一致。结论成功构建了重组质粒pEGFP-N1-TNFα,为下一步用纳米材料转染CIK细胞的研究奠定了基础。
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| 关 键 词： | 肿瘤坏死因子 真核表达载体 质粒pEGFP-N1 基因疗法 CIK细胞 |
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