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| 缺氧调控表达的NT-3逆转录病毒载体的构建及鉴定 | |
| 作者单位： | ;1.西安医学院人体解剖学教研室;2.西安交通大学医学部神经生物学研究所;3.青海大学医学院基础医学部解剖学教研室 |
| 摘 要： | 目的构建与鉴定含有5个拷贝缺氧反应元件(five copies of hypoxia responsive elements,5HRE)的缺氧调控表达的神经营养因子-3(neurotrophin-3,NT-3)的逆转录病毒载体。方法用PCR、酶切和连接等分子克隆技术将5HRE和人来源NT-3片段克隆入逆转录病毒载体pLNCX中,构建重组逆转录病毒穿梭质粒pLNCX-5HRE-SV40-NT3-IRES-EGFP。经PT67包装细胞包装、高速离心纯化和浓缩等方法,获得逆转录病毒RV-5HRE-NT3;用逆转录病毒感染NIH 3T3细胞48h后,流式细胞仪检测并计算出病毒滴度。结果成功构建了重组逆转录病毒载体质粒pLNCX-5HRE-SV40-NT3-IRES-EGFP,并获得相应的逆转录病毒RV-5HRE-NT3,经过高速离心纯化和浓缩后,其滴度可达9.1×10~6 cfu/mL。结论成功构建了缺氧调控表达的NT-3逆转录病毒载体,为研究外源基因的缺氧调控特异性表达奠定了工作基础。 |
| 关 键 词： | 逆转录病毒载体 缺氧调控表达 神经营养因子-3 |
Construction and identification of the recombinant retroviral vector to carry out hypoxia-regulated expression of neurotrophin-3 |
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