| 应用抑制性消减杂交技术筛选HBxAg蛋白结合蛋白XBP1的上调基因 |
| |
| 引用本文： | 樊万虎,成军,刘小静,张树林,王琦.应用抑制性消减杂交技术筛选HBxAg蛋白结合蛋白XBP1的上调基因[J].西安交通大学学报(医学版),2012,33(6):671-675. |
| |
| 作者姓名： | 樊万虎 成军 刘小静 张树林 王琦 |
| |
| 作者单位： | 1. 西安交通大学医学院第一附属医院感染科,陕西西安,710061
2. 北京地坛医院传染病研究所,北京,100015 |
| |
| 基金项目： | 国家自然科学基金资助项目，国家重点基础研究项目(973计划) |
| |
| 摘 要： | 目的应用酵母双杂交及生物信息学(bioinformatics)技术获得HBxAg蛋白结合蛋白XBP1,为了解该基因的反式调节机制,利用抑制性消减杂交技术筛选并克隆XBP1蛋白反式激活的靶基因。方法以XBP1表达质粒pcD-NA3.1(-)-myc-his(A)-XBP1转染HepG2细胞,以空载体pcDNA3.1(-)-myc-his(A)为对照;制备转染后的细胞裂解液,提取mRNA并合成cDNA,经RsaⅠ酶切后将实验组cDNA分成两组,分别衔接两种不同接头,再与对照组cDNA进行两次消减杂交及两次PCR反应,产物与T/A克隆载体连接,构建cDNA消减文库,并转染大肠杆菌进行文库扩增,随机挑选克隆经PCR鉴定后进行测序及同源性分析。结果成功构建人XBP1蛋白反式激活相关基因差异表达的cDNA。扩增后得到80个200～1 000bp插入片段的克隆,随机挑选其中30个插入片段测序,并通过生物信息学分析获得其全长基因序列,结果共获得28个已知编码序列基因和2个未知的新基因。结论 XBP1在肝细胞内表达后能够上调HepG2细胞中许多不同基因表达的变化,这些基因与细胞信号转导、细胞增殖与分化、免疫应答、能量代谢、细胞凋亡、肿瘤发生等生物过程密切相关。
|
| 关 键 词： | XBP1基因 HepG2细胞 抑制性消减杂交技术 反式调节 |
Screening of the target genes transactivated by human gene XBP1 interacting with HBxAg using suppression subtractive hybridization technique |
| |
| FAN Wan-hu
,
CHENG Jun
,
LIU Xiao-jing
,
ZHANG Shu-lin
,
WANG Qi.Screening of the target genes transactivated by human gene XBP1 interacting with HBxAg using suppression subtractive hybridization technique[J].Journal of Xi‘an Jiaotong University:Medical Sciences,2012,33(6):671-675. |
| |
| Authors: | FAN Wan-hu CHENG Jun LIU Xiao-jing ZHANG Shu-lin WANG Qi |
| |
| Institution: | 1.Department of Infectious Diseases,the First Affiliated Hospital,Medical School of Xi’an Jiaotong University,Xi’an 710061;2.Institute of Infectious Diseases, Beijing Ditan Hospital,Beijing 100015,China) |
| |
| Abstract: | |
| |
| Keywords: | |
| 本文献已被 CNKI 万方数据 等数据库收录！ |
|
