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| 人PIF1及其截短体重组蛋白的真核表达及其细胞内定位 | |
| 引用本文： | 李珊珊,刘旭,张莹,王建校,刘晓丹,王豫,周平坤,顾永清.人PIF1及其截短体重组蛋白的真核表达及其细胞内定位[J].西安交通大学学报(医学版),2014,35(5). |
| 作者姓名： | 李珊珊 刘旭 张莹 王建校 刘晓丹 王豫 周平坤 顾永清 |
| 作者单位： | 1. 石河子大学医学院,新疆石河子,832003 2. 军事医学科学院放射与辐射医学研究所,北京,100850 3. 石河子大学医学院,新疆石河子832003;军事医学科学院放射与辐射医学研究所,北京100850 |
| 基金项目： | 国家自然科学基金资助项目，the National Natural Science Foundation of China |
| 摘 要： | 目的构建人PIF1及其C末端解螺旋酶模序(PIF1C)和N末端PINT结构域(PIF1N)截短体真核表达重组质粒,进行真核表达,并确定PIF1、PIF1C、PIF1N在细胞内定位。方法以HeLa cDNA为模板PCR获取PIF1、PIF1C、PIF1N编码区cDNA,将其插入pCMV-Tag 2B质粒中构建PIF1、PIF1C、PIF1N真核表达重组质粒;通过lipofectamine2000将重组质粒转染人293细胞中,Western blot方法检测其在真核细胞内的表达,用免疫荧光法检测其细胞内定位。结果成功构建了PIF1及其截短体真核表达重组体,并在真核细胞内成功表达。确定PIF1定位于核内,PIF1C定位于整个细胞,呈弥散分布,PIF1N主要定位于核内。结论在真核细胞中成功表达了PIF1、PIF1C、PIF1N,且发现PIF1N对PIF1的入核起重要作用,为进一步研究其PIF1及其各结构域奠定了实验基础。 |
| 关 键 词： | 解螺旋酶 PIF1 重组质粒 蛋白表达 免疫荧光 真核表达 |
The eukaryotic expression and intraceilular location of human PIF1 and its truncated recombinant protein |
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| Abstract: | |
| Keywords: | helicase PIF1 recombinant plasmid protein expression immunofluorescence eukaryotic expression |