| 幽门螺杆菌尿素通道蛋白基因UreI载体的构建、融合表达及纯化 |
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| 引用本文： | 杨丽娟,姜政,向廷秀,陶小红,王丕龙.幽门螺杆菌尿素通道蛋白基因UreI载体的构建、融合表达及纯化[J].西安交通大学学报(医学版),2008,29(5). |
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| 作者姓名： | 杨丽娟 姜政 向廷秀 陶小红 王丕龙 |
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| 作者单位： | 重庆医科大学附属第一医院消化内科,重庆,400016 |
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| 摘 要： | 目的构建幽门螺杆菌(H.pylori,Hp)尿素通道蛋白基因UreI的融合表达载体,并在E.coliBL21中表达,为进一步研究UreI的功能奠定基础。方法利用分子克隆技术以Hp DNA染色体为模板,扩增Hp UreI基因片段,将目的基因UreI与载体pET32a( )分别经kpnⅠ和HindⅢ双酶切,纯化,连接。筛选阳性重组载体,转化大肠杆菌BL21,以IPTG诱导表达pET32a( )/UreI融合蛋白。表达产物经Ni-NTA琼脂糖树脂纯化后,用SDS-PAGE及Western blot分析。结果经酶切、测序分析表明,插入的基因片段为Hp UreI编码基因,由585 bp组成,与GenBank相应菌株HP AM417 609序列完全一致,无碱基突变。经SDS-PAGE分析显示重组质粒pET32a( )/UreI在原核细胞中得到了高效融合表达,其重组融合蛋白分子量为130 ku,经Ni-NTA琼脂糖树脂纯化后,其纯度达95%以上,Western blot分析显示,该重组融合蛋白可被6-His鼠抗单克隆抗体所识别,具有良好的反应原性。结论成功地克隆和构建了原核表达载体pET32a( )/UreI,并在原核细胞中得到了高效融合表达。
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| 关 键 词： | 幽门螺杆菌 尿素通道蛋白(UreI) 原核表达 |
Construction urea channel protein (UreI) of human Helicobacter pylori and expression in E.coli |
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| Yang Lijuan,Jiang Zheng,Xiang Tingxiu,Tao Xiaohong,Wang Pilong.Construction urea channel protein (UreI) of human Helicobacter pylori and expression in E.coli[J].Journal of Xi‘an Jiaotong University:Medical Sciences,2008,29(5). |
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| Authors: | Yang Lijuan Jiang Zheng Xiang Tingxiu Tao Xiaohong Wang Pilong |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Helicobacter pylori urea channel protein gene(UreI) prokaryotic expression |
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