胃癌组织来源的突变型DNA聚合酶β的碱基切除修复功能 |
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引用本文: | 张成娟,赵四敏,赵国强,董子明.胃癌组织来源的突变型DNA聚合酶β的碱基切除修复功能[J].西安交通大学学报(医学版),2011,32(6):672-676. |
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作者姓名: | 张成娟 赵四敏 赵国强 董子明 |
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作者单位: | 1. 河南省肿瘤医院病理科,河南郑州450003;郑州大学基础医学院病理生理学教研室,河南郑州450001 2. 郑州大学基础医学院病理生理学教研室,河南郑州,450001 3. 郑州大学基础医学院微生物学与免疫学教研室,河南郑州,450001 |
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摘 要: | 目的研究胃癌组织中野生型和突变型DNA聚合酶β在DNA修复过程中的作用,为进一步探讨肿瘤的病因发病学奠定基础。方法采用聚合酶链反应(PCR)和分子克隆技术,以野生型和突变型DNA聚合酶β基因为模板,扩增后构建pGEM-T-polβ克隆载体,经PCR筛选,亚克隆于pET28a(+)表达载体中,并转化至大肠杆菌BL21(DE3)感受态细菌,经诱导剂异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达后,通过镍柱亲和层析法纯化蛋白。设计3条单链DNA引物,退火合成含有单碱基缺失的DNA底物,与纯化蛋白共做碱基切除修复(BER)实验,最后琼脂糖凝胶电泳鉴定。结果成功构建了pET28a(+-)polβ重组表达载体;在BER实验中,野生型DNA聚合酶β能够在DNA底物的酶切位点处将其切开,突变型DNA聚合酶β不能或部分将其切开。结论野生型DNA聚合酶β能够修复单碱基缺失的DNA底物,而突变型DNA聚合酶β在碱基缺失修复过程中的作用丧失或减弱。
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关 键 词: | 胃癌 DNA聚合酶β IPTG诱导 镍柱亲和层析 碱基切除修复 |
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