抗人γ-精浆蛋白V_H单域抗体基因的构建、表达及空间构象分析 |
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引用本文: | 袁建林,王智,武国军,王禾,王栋,郝晓柯.抗人γ-精浆蛋白V_H单域抗体基因的构建、表达及空间构象分析[J].西安交通大学学报(医学版),2001(3). |
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作者姓名: | 袁建林 王智 武国军 王禾 王栋 郝晓柯 |
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作者单位: | 第四军医大学西京医院泌尿外科!西安710033(袁建林,武国军,王禾,王栋),第四军医大学基础部生物化学与分子生物学教研室!西安710032(王智),第四军医大学唐都医院中心实验室!西安7100(郝晓柯) |
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基金项目: | 国家自然科学基金资助 ( 3990 0 180 ) |
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摘 要: | 目的 扩增出抗人γ 精浆蛋白 (γ Sm)单克隆抗体 (mAb)的重链可变区 (VH)单域抗体基因 ,并进行原核表达及空间构象分析。方法 从分泌抗γ SmmAb的杂交瘤细胞系E4B7中提取总RNA ,经RT PCR扩增VH 单域抗体基因 ,将其克隆到融合蛋白表达载体 pGEX 4T 1中进行表达 ,并利用计算机软件对表达产物进行空间构象分析。结果 VH 单域抗体基因全长 363bp ,含起始码和终止码。将其克隆到 pGEX 4T 1内 ,转化大肠杆菌DH5α ,获得高效表达 ,表达量占全菌总蛋白质的 38% ,以包涵体形式存在。经初步纯化和复性后 ,用谷胱甘肽 (GST)亲和色谱纯化 ,再经凝血酶水解获得抗γ SmVH 单域抗体。竞争结合抑制实验证明 ,该表达产物具有前列腺癌细胞亲和活性。空间构象分析结果显示 ,该抗体具有完整的抗原结合位点。结论 构建成功抗γ Sm的VH 单域抗体 ,为进一步临床应用奠定基础。
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关 键 词: | 人γ-精浆蛋白 单域抗体 克隆 表达 |
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