新生大鼠下丘脑NOS免疫反应性神经元的体外发育

一氧化氮 (ＮＯ)和ＮＯ合酶 (ＮＯＳ)广泛存在于大鼠下丘脑神经内分泌神经元 ,在调节神经内分泌功能[1 ] 、参与体内多种生理和病理活动方面均起一定作用。由于这些神经元或以核团形式存在或以分散状态出现 ,加之下丘脑结构复杂 ,在体研究难度较大。目前国内已建立了下丘脑神经元分散培养技术[2 ] ,但有关ＮＯＳ神经元的体外发育尚未见报道。本实验应用免疫细胞化学和图像分析技术 ,对不同培养时间的ＮＯＳ免疫反应性 (ＩＲ)神经元的形态进行了观察 ,以探讨其体外生长、发育和功能变化的规律。1　材料与方法　1 .1　动物　选用当日出生的雄…     

培养中的下丘脑神经元的形态学研究

取新生大鼠下丘脑分散培养１、３、７、１４ｄ的细胞，应用免疫细胞化学、电镜和图像分析等技术研究下丘脑神经元。结果显示：培养的下丘脑神经元可表达神经丝蛋白和神经元特异性烯醇化酶；某些神经元突起可见串珠样膨体，突起末端有生长锥；电镜下，神经元胞质含丰富的蛋白质合成细胞器；神经元培养１～３ｄ生长最快；７ｄ，胞体面积和突起长度均达高峰值，１４ｄ时基本维持在７ｄ水平。     

生长激素对培养的下丘脑细胞发育及衰老的调控性影响

实验用不同浓度的生长激素（h-GH）作用于培养的下丘脑神经细胞，观察其对细胞发育和衰老的影响，发现h-GH能促进培养细胞存活、发育，增加突起长度和细胞平均面积，并促进网络的形成，较高浓度的h-GH（5～10mg／L）均导致发育期及成熟期中的培养细胞寿命明显缩短，较低浓度（1mg／L）h－GH对发育中的细胞寿命无明显作用，但能显著延长成熟期细胞的寿命。适量h-GH有延长细胞寿命的作用，而过量则促进细胞迅速出现衰老特征性变化；如大量脂褐素形成，神经元纤维增生及线粒体肿胀、变性，跑体中出现空泡，细胞器减少等细胞衰老常见的特征。这些病理性变化常为衰老神经元的特征性表现。因此h－GH等因子在细胞蛋白质代谢中的平衡失调，可能在细胞衰老发展过程中起一定作用。     

大鼠下丘脑室旁核大细胞自发电活动及对去甲肾上腺素反应的增龄性变化

应用神经垂体逆向电刺激,于下丘脑室旁核内用玻璃微电极细胞外记录的方法寻找室旁核神经内分泌大细胞,并观察了３ 月龄、１２ 月龄及２６ 月龄三组大鼠室旁核大细胞的自发放电及对脑室注射去甲肾上腺素（Ｎｏｒｅｐｉｎｅｐｈｒｉｎｅ ,ＮＥ）反应的增龄性变化。结果发现,不同月龄组室旁核大细胞中呈慢不规则、快连续及位相型放电的神经元的比例相似;随增龄室旁核大细胞的自发放电频率增加;室旁核中加压素与催产素神经元对脑室注射ＮＥ的反应发生增龄性变化。这些结果提示：下丘脑室旁核大细胞电生理特性发生增龄性变化,并可能因此导致其分泌功能的变化     

大鼠下丘脑培养中β-内啡肽神经元的免疫细胞化学研究

应用种经细胞培养、免疫细胞化学和图像分析技术，研究新生大鼠下丘脑β-内啡肽（β-END）神经元的形态及其体外发育规律。β-END神经元多为梭形双极，可见细胞间接触。培养1d,β-END神经元甚少，3～7d其生长迅速，细胞数量、胞体大小、染色强度和突起长度均达最高峰。培养14d，β-END神经元基本维持在7d时的水平。结果提示，下丘脑β-END神经元在体外培养的第1周内迅速发育趋于成熟，并可维持到第14天左右。     

大白鼠同神经与不同神经输入对脊髓背角神经元的会聚

实验用大白鼠。分级刺激腓肠神经和腓肠肌神经,对被激活的背角神经元进行观察,进而对皮肤、肌肉神经传入会聚神经元进行了分类,发现同一神经刺激被激活的背角神经元可分为A、A—C和C 3个类型,其中A—C型占多数(皮神经激活68%,肌神经激活50.4%)。实验中记录到125个皮,肌会聚神经元(CMCN),按对皮、肌A类和C类传入纤维的反应,分为A—A、A—AC、AC—A,AC—AC、C—C 5型,其中AC—AC和A—A型占多数(分别为46.27%和26.12%).结果提示,上述多种会聚形式,可能是皮、肌粗、细初级传入在脊髓水平对感觉传入(特别是痛觉)进行调制的基础,因此将在镇痛、痛过敏中起作用。     

神经毒对大鼠三叉神经节神经元的影响

本文用29只大鼠分别注射二硫化碳、苯、氯化高汞饱和液、醋酸铅饱和液、纯酒精于一侧眶下神经,在光镜和电镜下观察了三叉神经节细胞的变化。观察结果证明这些神经毒经神经节细胞周围突逆行作用于胞体,使胞体产生不同的病理变化。用同样的方法注射生理盐水和切断眶下神经,证明神经节细胞的变化不是张力和机械损伤所致而是中毒的结果。     

谷氨酸对大鼠海马神经元的神经毒性反应

目的 为明确谷氨酸作为一兴奋性氨基酸对中枢神经系统兼有兴奋性和毒性作用的机理。方法 实验选择具有较多ＮＭＤＡ受体的海马作为研究对象,选用ＳＤ种大鼠,给予ＭＳＧ（Ｍｏｎｏｓｏｄｉｕｍ Ｌ－ｇｌｕｔａｍａｔｅ剂量为１８ｍｍｏｌ／ｋｇ）皮下注射,在不同的时间内观察大鼠的行为表现和其海马神经组织受损的超微结构的变化。结果 大鼠的早期行为表现较为兴奋,而后随时间的延长表现为迟钝;神经网络早期为水肿,后期为水     

豚鼠分泌性中耳炎动物模型建立的研究

目的　研究建立分泌性中耳炎豚鼠动物模型的方法 ,为渗出性中耳炎的动物实验研究提供一种有用的动物模型。方法　采用灭活的肺炎链球菌悬液制备豚鼠分泌性中耳炎动物模型 ,了解渗出性中耳炎对听阈及中耳炎黏膜的病理改变。结果　听阈升高者 16耳 ,以低频为主 ,鼓膜呈浅黄色 ,病理改变主要在中耳腔 ,有不同程度的渗出 ,以浆液性为主。结论　细菌的分解产物———内毒素 ,导致中耳黏膜的炎症反应及中耳腔渗出 ,为进一步研究SOM提供动物模型     

人促甲状腺激素受体A亚单位蛋白在昆虫细胞体系中的分泌性表达

目的 拟构建昆虫细胞分泌表达体系,在草地夜蛾卵巢细胞分泌性促甲状腺激素受体(thyroid stimulating hormone receptor, TSHR) A亚单位蛋白。方法 将TSHR A亚单位蛋白(22-289)和绿色荧光蛋白(green fluorescence protein, GFP)基因连接到质粒,并通过转化、蓝白斑筛选获得重组杆粒,将其转染入sf9昆虫细胞收获重组杆状病毒,扩增并测定滴度。最终通过蛋白印迹实验鉴定重组蛋白的表达并优化表达条件。结果 在蛋白表达体系的构建过程中,PCR鉴定和测序均证实了重组质粒和重组杆粒序列的正确性。将重组杆粒转染入细胞后观察到病毒出芽迹象,空斑实验鉴定P1代病毒的滴度为2×10⁷pfu/m。蛋白印迹显示重组蛋白分子质量为55 ku,主要在培养基中。蛋白表达的最佳感染复数(multiplicity of infection, MOI)为1,最佳感染时程为72 h。结论 本研究构建了TSHR A亚单位的昆虫细胞杆状病毒表达体系,该体系能够外泌性表达分子质量为55 ku左右的蛋白TSHR 22-289,且蛋白能够成功...     

培养的大鼠下丘脑神经细胞衰老发展规律的初步观察

为研究下丘脑神经细胞衰老发展的规律，采用分散细胞培养法，以新生大鼠下丘脑细胞的胞体平均直径、突起长度、数目及电镜下所见的结构变化作为观察指标．把细胞培养期分为静止期、生长期、成熟期和衰老期四个阶段。其中第1周至第6周是培养细胞的主要生长阶段。这期间，细胞形态丰满，突起生长活跃，网络分枝丰富。电镜观察表明培养细胞在3周左右，各种细胞器发育渐趋成熟，并有突触样结构出现。第6周后，突起出现萎缩僵硬，常有串珠样变性，同时胞体进行性增大，线粒体肿胀变性，常有颗粒空泡及电子致密斑块出现，这时细胞进入衰老期。这种分期也同样适于培养的皮层及海马细胞的发育和衰老发展的规律。     

卡马西平对培养皮层神经细胞毒性的研究

在对体外新生大白鼠（0～1d）大脑皮层神经细胞进行原代培养的基础上，分别加入不同浓度卡马西平（Carbamazepine，CBZ），继续培养3d。检测乳酸脱氨酶（LDH）释出率双膜流动性。结果显示：高浓度的CBZ（24mg／L）可导致神经细胞LDH释出率明显升高（P<0．01）、膜流动性明显降低（P＜0．01）。提示高浓度卡马西平对神经细胞存在有毒性作用。     

COLOCALIZATION OF NITRIC OXIDE SYNTHASE IN GNRH NEURONS OF RAT FOREBRAIN AND HYPOTHALAMUS

Ｇｏｎａｄｏｔｒｏｐｉｎｒｅｌｅａｓｉｎｇｈｏｒｍｏｎｅ（ＧｎＲＨ）ｒｅｇｕｌａｔｅｓｔｈｅｆｕｎｃｔｉｏｎｏｆｇｏｎａｄｏｔｒｏｐｈｓｉｎｔｈｅａｎｔｅｒｉｏｒｐｉｔｕｉｔａｒｙａｎｄｆａｃｉｌｉｔａｔｅｓｔｈｅｓｅｘｂｅｈａｖｉｏｒ．ＮｅｕｒｏｎｓｒｅｌｅａｓｉｎｇＧｎＲＨｏｒｉｇｉｎａｔｅｉｎｔｈｅｏｌｆａｃｔｏｒｙｐｌａｃｏｄｅ,ａｎｄｍｉｇｒａｔｅｉｎｔｏｔｈｅｂｒａｉｎｄｕｒｉｎｇｔｈｅｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔａｎｄｄｉｓｔｒｉｂｕｔｅｉｎｓｅｐｔａｌ－ｐｒｅｏｐｔｉｃａｒｅａａｎｄｈ…     

大鼠下丘脑酪氨酸羟化酶免疫反应产物的衰老变化

本文运用光镜和电镜免疫组化技术,观察了幼年(3月龄)和老年(24月龄)大鼠下丘脑酪氨酸羟化酶(TH)免疫反应产物的衰老变化。与幼年相比,老年TH阳性细胞,尤其是位于下丘脑后部和背内侧核/未定带的阳性细胞,其染色强度明显降低。在数量方面,除视前区外,老年下丘脑的弓状核、室周核、背内侧核/未定带以及下丘脑后部的TH阳性神经细胞呈显著性减少。另外,老年正中隆起的TH阳性神经纤维明显比幼年者减少。电镜下,TH标记的轴突终未呈现退行性改变的迹象。上述衰老变化可能是导致老年下丘脑和垂体内分泌功能紊乱的重要原因。     

GUSTATORY RESPONSES OF NEURONS IN THE PARABRACHIAL NUCLEUS OF RATS

Ａｎｕｍｂｅｒｏｆａｎａｔｏｍｉｃａｌ,ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃａｌａｎｄｂｅｈａｖｉｏｒａｌｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔｓｈａｖｅｓｈｏｗｎｔｈａｔｇｕｓｔａｔｏｒｙｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎｉｎｔｈｅｎｕｃｌｅｕｓｏｆｔｈｅｓｏｌｉｔａｒｙｔｒａｃｔ(ＮＴＳ) ,ｗｈｉｃｈｉｓｃｏｎｖｅｙｅｄｆｒｏｍｔｏｎｇｕｅｖｉａｔｈｅｃｒａｎｉａｌｎｅｒｖｅｓ (ｆａｃｉａｌ,ｇｌｏｓｓｏｐｈａｒｙｎｇｅａｌ,ａｎｄｖａｇｕｓ) ,ｒｅａｃｈｅｓａｃｏｎｆｉｎｅｄ ｐａｒｔｏｆｔｈｅ ｐａｒａｂｒａｃｈｉａｌｎｕｃ…     

TYPES OF CONVERGENT NEURONS OF DORSAL HORN IN THE SPINAL CORD FROM SOMATIC AND VISCERAL INPUTS IN SPINAL RATS

ＴＹＰＥＳＯＦＣＯＮＶＥＲＧＥＮＴＮＥＵＲＯＮＳＯＦＤＯＲＳＡＬＨＯＲＮＩＮＴＨＥＳＰＩＮＡＬＣＯＲＤＦＲＯＭＳＯＭＡＴＩＣＡＮＤＶＩＳＣＥＲＡＬＩＮＰＵＴＳＩＮＳＰＩＮＡＬＲＡＴＳ￥ＺｈｕＺｈｏｎｇｌｉａｎｇ（李忠良）；ＪｉａｎｇＳａｉｎａｎ（江赛...