大麻素受体2通过调节巨噬细胞极化改善小鼠溃疡性结肠炎

摘要：目的 ; 探讨大麻素受体CB2通过调节巨噬细胞极化改善溃疡性结肠炎(UC)的免疫学机制,为新药的研发和疾病的治疗提供新的思路。;方法   ;人UC标本用CD68免疫组织化学染色标记巨噬细胞;雄性ICR小鼠使用葡聚糖硫酸钠DSS制备成UC模型,用CB2受体激动剂JWH133干预后,观察小鼠体质量、记录UC活动指数DAI(腹泻和便血程度)并收集肠道组织,应用HE染色、Real-time PCR等技术,分析炎症程度并测定肠道巨噬细胞的极性;体外培养外周血来源的巨噬细胞(PBM),用LPS和IL-4分别诱导为M1和M2型PBM,JWH133干预后,用Real-time PCR测定PBM的极性变化。;结果   ;UC患者的结肠组织中存在大量PBM;JWH133使UC小鼠结肠中PBM的极性从M1型向M2型转化,同时改善小鼠体质量下降和DAI指数,肠道炎症程度明显减轻;体外,JWH133使M1-PBM的M1标志物水平下降(TNF-α、IL-1β和IL-12),并提高M2-PBM的Arg1、Mrc2和Mgl1的水平。;结论;   CB2受体通过调节PBM向M2型转化来改善UC。     

姜黄素促进RAW264.7源性M1巨噬细胞向替代激活M2表型极化

摘要：目的 ;观察姜黄素对LPS和IFNγ诱导的RAW264.7巨噬细胞(M1)极化的影响及机制。;方法 ;不同浓度姜黄素(6.25、12.5、25μmol/L)干预LPS和IFNγ诱导的RAW264.7巨噬细胞(M1)12h,同时再加入20μmol/L GW9662与25μmol/L姜黄素共同干预LPS和IFNγ诱导的RAW264.7巨噬细胞(M1)12h,采用Real-time PCR、ELISA及Western blot方法检测IL-1β、IL-6和M2表型标志分子KLF4、FIZZ1、MGL1、PPARγ的表达,及阻断PPARγ后KLF4和FIZZ1的表达。;结果 ;不同浓度姜黄素均能上调LPS和IFNγ诱导的RAW264.7巨噬细胞(M1)的M2标志分子的表达,并且抑制炎症因子IL-1β和IL-6的分泌;阻断PPARγ后,RAW264.7巨噬细胞源性M1表型巨噬细胞表达M2标志分子下调。;结论 ;姜黄素通过活化PPARγ促进LPS和IFNγ诱导的RAW264.7巨噬细胞(M1)向M2表型极化。     

盐酸青藤碱通过线粒体凋亡途径诱导胃癌细胞死亡

摘要：目的 ;探讨盐酸青藤碱诱导人胃癌BGC-823细胞死亡的作用及其可能机制。;方法 ;将胃癌BGC-823细胞分为对照组(未给药)和4个盐酸青藤碱(0.5、1、2、4mmol/L)处理组,MTT法检测细胞活力;Annexin V-FITC/PI双标记后采用流式细胞仪定量检测凋亡细胞的比例;分光光度法检测半胱天冬酶-3(caspase-3)凋亡蛋白酶活力;JC-1染色标记后采用流式细胞仪检测线粒体膜电位水平;Western blotting检测细胞质中细胞色素C蛋白的表达。;结果; MTT结果显示,盐酸青藤碱可浓度和时间依赖性抑制人胃癌BGC-823细胞活力;流式细胞术检测结果显示,盐酸青藤碱浓度依赖性促进BGC-823细胞凋亡;盐酸青藤碱可激活caspase-3,促进细胞色素C从线粒体向细胞质中释放,导致细胞线粒体膜电位崩溃;总caspase抑制剂Z-VAD-FMK预处理能有效抑制盐酸青藤碱诱导的caspase-3活化和细胞凋亡。;结论; 盐酸青藤碱可通过激活线粒体凋亡通路显著诱导人胃癌BGC-823细胞凋亡。     

进展期胃癌脾脏巨噬细胞表型变化及其共培养对胃癌细胞增殖侵袭迁移的影响

摘要：目的;   探讨进展期胃癌脾脏巨噬细胞表型变化及体外诱导培养的M1型和M2型巨噬细胞与胃癌细胞共培养对癌细胞增殖侵袭迁移的影响,以期了解脾脏在胃癌发展中的作用。;方法   ;收集福建医科大学附属第一医院2015年3月至2017年5月期间15例行进展期近端胃癌根治术联合脾脏切除术患者的新鲜手术切除脾脏组织,分离巨噬细胞,流式细胞仪检测各型巨噬细胞表型变化;全自动磁珠提取系统从健康志愿者新鲜血液中分离单核细胞,分别给予10ng/mL的GM-CSF和M-CSF诱导成M1型、M2型巨噬细胞,并用CD16和CD163进行鉴定;利用Transwell共培养法将胃癌细胞SGC-7901和AGS与M1、M2型巨噬细胞和单核细胞共培养,锥虫蓝(台盼蓝)染色进行计数来检测细胞增殖、侵袭迁移能力变化。;结果; 进展期胃癌患者脾脏中M2型巨噬细胞比例增加,M1型巨噬细胞比例降低;单核细胞经GM-CSF和M-CSF体外培养,可分别诱导为M1型、M2型巨噬细胞,其阳性率分别为(95.46±4.21)%和(94.67±4.97)%;M2型巨噬细胞和单核细胞可促进胃癌细胞增殖侵袭迁移,M1型巨噬细胞则抑制胃癌细胞增殖侵袭迁移。;结论  ;本研究鉴定出进展期胃癌患者脾脏组织中不同巨噬细胞的比例,证实了不同类型巨噬细胞对胃癌细胞的影响不同,M2型巨噬细胞起促进胃癌细胞进展,而M1型巨噬细胞则对胃癌细胞起抑制作用,进一步揭示了脾脏在胃癌进展中的作用,为临床制订进展期胃癌的治疗方案提供了研究基础。     

青藤碱对家兔血管平滑肌细胞增殖的影响

目的　研究青藤碱对血管平滑肌细胞增殖作用及 DNA合成的影响。方法　采用内皮素刺激的离体家兔血管平滑肌细胞增殖模型 ,细胞计数 ,氚 -胸腺嘧啶核苷掺入方法。结果　青藤碱明显抑制血管平滑肌细胞增殖反应及 DNA合成 ,呈剂量依赖关系。结论　表明青藤碱具有抗血管平滑肌细胞增殖作用     

AG490抑制M2样巨噬细胞JAK2/STAT3通路影响胃癌细胞增殖和凋亡

目的 探讨JAK2/STAT3信号通路抑制剂AG490对M2样巨噬细胞功能表型的调控作用,以及对胃癌细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响。方法 采用佛波酯(PMA)体外诱导人单核细胞系THP-1分化为M0型巨噬细胞,分别用脂多糖(LPS)和干扰素-γ(IFN-γ)诱导为M1样表型,IL-4和IL-13诱导为M2样表型,并应用免疫荧光标记CD68、CD86和CD206鉴定。RT-qPCR检测巨噬细胞的CD163、Arg1、CCL22、PPARγ、IL-10、IL-20和TNF-α的mRNA表达。Western blotting检测JAK2/STAT3信号通路关键蛋白表达。JAK2/STAT3抑制剂AG490处理M2样巨噬细胞,检测M2表型的标志基因。分别将巨噬细胞与胃癌细胞共培养,通过CCK-8法、划痕实验、Transwell小室基质胶侵袭实验及流式细胞术检测巨噬细胞对胃癌细胞增殖、迁移、侵袭和凋亡的影响。制备裸鼠MKN45胃癌异种皮下移植瘤模型,造模后连续20 d观察肿瘤大小及质量。结果 AG490处理的M2样巨噬细胞时,P38MAPK、JAK2、p-STAT3/STAT3蛋白表达显著降低...     

Cystatin M抑制胃癌SGC-7901细胞的增殖和迁移

摘要：目的   ;CST6基因编码cystatin M蛋白,体外构建CST6过表达载体,转染胃癌SGC-7901细胞株,观察cystatin M对其增殖和迁移能力的影响。;方法   ;实验分3组：pcDNA3.1(+)-CST6组、pcDNA3.1(+)组与未转染组;RT-PCR验证稳转系SGC-7901/CST6细胞CST6 RNA水平的表达;Western blot验证稳转系SGC-7901/CST6细胞CST6蛋白水平的表达;MTT实验检测实验组与对照组细胞的增殖能力;划痕实验检测实验组与对照组细胞的迁移能力。;结果   ;稳转系SGC-7901/CST6细胞稳定表达CST6基因mRNA和cystatin M蛋白;pcDNA3.1(+)-CST6组细胞增殖能力和迁移能力均较pcDNA3.1(+)组和未转染组细胞降低(;P;<;0.05)。;结论 ;Cystatin M能够抑制胃癌SGC-7901细胞株增殖和迁移能力。     

急性肾小球肾炎患儿IL—2产生及IL—2R表达的研究

为进一步明确急性肾小球肾炎(AGN)的发病机理,我们检测了AGN患儿外周血淋巴细胞白细胞介素-2(IL-2)活性及白细胞介素2受体(IL-2R)表达能力。结果表明AGN患儿外周血淋巴细胞IL-2活性低于对照组(P<0.05);经PHA刺激激活后的淋巴细胞IL-2R表达能力低于对照组(P<0.005);而未经PHA刺激的淋巴细胞IL-2R表达能力高于对照组(P<0.01)。提示该病的发生是由于患儿T淋巴细胞功能不足,免疫应答能力下降:T—B淋巴细胞功能失调,机体免疫调节功能紊乱的结果。     

针灸对IL2-IFN-NKC调节网与其相关网络MΦ-IL1-Th的效应——针灸并施对荷瘤(S_(37))小鼠相关网络的效应

目的　以荷瘤 (S37)小鼠为模型 ,进一步验证针灸并施的抗肿瘤和对IL2 IFN NKC调节网的相关网络MΦ IL1 Th的效应。方法　针灸荷瘤 (S37)小鼠的大椎、后海二穴后 ,取样 ,以吞噬中性红比色分析法 ,MTT比色分析法和单抗SPA Ig花环法等观察针灸对MΦ、IL1、Th及S37肉瘤的影响。结果　荷瘤针灸并施组、荷瘤艾灸组、荷瘤针刺组的小鼠腹腔MΦ吞噬功能、IL1含量及Th细胞 (L3T4)百分率均较荷瘤对照组显著增高 ;除针刺组外 ,其余两实验组均对S37肉瘤有明显抑制作用。另外 ,针灸组和艾灸组IL1含量均较针刺组显著增高 ;针灸组Th细胞(L3T4)较针刺组显著增高。结论　针灸荷瘤小鼠大椎、后海二穴 ,具有正向调节IL2 IFN NKC网的相关网络MΦ IL1 Th和抑瘤 (S37)作用。艾灸也显示出相似的效果。     

针灸对IL2-IF N-NKC调节网与其相关网络MΦ-IL1-Th的效应——针刺对荷瘤(S_(180))小鼠相关网络的实验观察

针刺对与 IL2 - IFN- NKC调节网相关 MΦ- IL1 - Th免疫调节网的研究 ,对该网络及针刺作用机理的阐明 ,具有十分重要的意义。作者采用针刺荷瘤 ( S1 80 )小鼠足三里、大椎、筑宾穴 ,分别以 MTT法、单抗 SPA- Ig花环法同步观察针刺对 MΦ、白细胞介素 1 ( IL1 )、辅助性 T细胞 ( Th)及 S1 80 肉瘤的影响。发现针刺后 ,小鼠腹腔 MΦ吞噬功能、IL 1含量及 Th细胞 L3T4百分率显著增高 ,并对 S1 80 肉瘤有一定程度的抑制效应。说明作者在以往证实针刺对 IL2 - IFN- NKC调节网具有正向调节作用的基础上 ,又证明了对其相关 MΦ - IL 1 - Th免疫调节网具有正向调节作用。认为 IL 2 - IFN-NKC与其相关网络 MΦ- IL1 - Th发挥了机体完整的正向免疫调节作用。     

针灸对IL2-IFN-NKC调节网与其相关网络MΦ-IL1-Th的效应—针灸并施对荷瘤(S37)小鼠相关网络的效应

目的　以荷瘤(S     

强化胎盘因子对细胞因子产生的影响

在观察了强化胎盘因子对淋巴细胞增殖试验影响的基础上,应用CTLL-2和7TD_1两种细胞株对强化胎盘因子刺激后的小鼠脾脏细胞分泌白细胞介素-2(IL-2)和白细胞介素-6(IL-6)水平分别进行了实验研究。结果表明,强化胎盘因子促进T淋巴细胞增殖,使小鼠脾脏细胞分泌IL-2和IL-6水牛均明显提高,有增强机体免疫功能的作用。     

白细胞介素-2协同白细胞介素-18活化自然杀伤细胞活性的作用

目的研究白细胞介素-2(IL-2)和白细胞介素-18(IL-18)诱导自然杀伤(NK)细胞活化和抗骨髓瘤细胞活性的协同作用.方法流式细胞仪方法检测NK细胞表面CD69的表达;阴性细胞纯化法用于获得高纯度的NK细胞;ELISA测定NK细胞培养上清液中干扰素(IFN-γ)的浓度;标准铬51释放试验评估NK细胞杀伤骨髓瘤细胞的能力.结果与单一应用IL-18相比,低浓度IL-2和IL-18联合应用显著提高了NK细胞的活性、分泌干扰素(IFN-γ)的水平和杀伤骨髓瘤细胞的作用.结论低浓度IL-2具有协同IL-18活化NK细胞抗骨髓瘤细胞的作用,此结果为IL-2和IL-18联合应用治疗骨髓瘤奠定了一定的理论基础.     

恶性肿瘤患者胸腹水中巨噬细胞的功能观察——细胞毒性作用、白细胞介素1产生的能力

为探讨人肿瘤相关巨噬细胞(TAM)在肿瘤发展中的作用,在体外研究了20例癌性胸、腹水中巨噬细胞(Mφ)的功能,包括 IL-1的产生和对人肺癌细胞系PGT 的细胞毒作用,用12例结核性胸水中之 Mφ作为对照。实验表明:TAM 的IL-1产生能力及细胞毒作用均较结核性胸水 Mφ为低;LPS、IFN 或消炎痛可增强 TAM 的此等功能;患者自身胸、腹水于高浓度时(≥12.5%)抑制而于低浓度时(6.35%)增强此等 TAM 功能。实验提示 TAM 中抑制性 Mφ增多、一些 TAM 处于未活化状态和癌性积液中存在的某些其它抑制因子均可能与 TAM 功能降低有关.     

多发性骨髓瘤患者T细胞亚群及白细胞介素-2水平变化的研究

为了进一步了解多发性骨髓瘤患者细胞免疫状态,应用SPA-Ig直接花环法检测了25例MM患者外周血T细胞亚群,用小鼠胸腺细胞增殖法检测患者外周血淋巴细胞白细胞介素—2的产生能力。结果表明MM患者外周血OKT_3~+、OKT_4~+细胞减少,OKT_8~+细胞升高,OKT_4/OKT_8比值下降;外周血淋巴细胞IL-2水平升高,活动期与缓解期之间有差异,缓解期有所下降。但仍高于正常组。提示患者T细胞亚群失衡,IL-2的产生异常,说明患者在疾病过程中存在细胞免疫紊乱状态。     

超滤膜提取当归补血汤对荷瘤小鼠脾细胞IL-2和IFN-γ的诱生作用

目的 观察超滤膜提取当归补血汤对荷瘤小鼠脾细胞白细胞介素-2(IL-2)和γ-干扰素(IFN-7)的诱生作用,探讨其对荷瘤小鼠免疫系统的调节机制.方法 采用超滤膜分离技术提取当归补血汤,用双抗体夹心ELISA法检测培养脾淋巴细胞上清液中IL-2和IFN-γ的含量,用反转录一聚合酶链式反应(RT-PCR)法测定脾淋巴细胞IL-2和IFN-γmRNA的表达水平.结果 超滤膜提取当归补血汤各剂量组小鼠脾淋巴细胞培养上清液中IL-2和IFN一γ的含量均较模型组增高,大剂量组与模型组比较有显著性差异(P＜O.05).各剂量组小鼠脾淋巴细胞IL-2和IFN一γ mRNA的表达水平均增高,中剂量组和大剂量组与模型组比较,均有显著性差异(P＜O.05).结论 超滤膜提取当归补血汤能够促进荷瘤小鼠脾淋巴细胞细胞因子IL-2和IFN-γ的分泌及其mRNA的表达,从而发挥免疫调节作用.     

盐酸青藤碱诱导人肝癌细胞凋亡及其对IL-1β，TNF及C/EBPβ水平的影响

摘要：目的  ;观察盐酸青藤碱对人肝癌细胞SMMC-7721凋亡的影响,及其IL-1β、TNF-α及C/EBPβ水平的变化,探讨防治肝癌作用的可能机制。;方法   ;体外培养人肝癌细胞SMMC-7721,经不同浓度盐酸青藤碱作用后,采用MTT法检测细胞增殖;Annexin V-FITC/PI双标结合流式细胞术检测细胞的凋亡;ELISA法检测培养液中IL-1β、TNF-α的水平;Western blot技术检测盐酸青藤碱作用于人肝癌细胞后C/EBPβ的表达水平。;结果   ;盐酸青藤碱对人肝癌细胞的生长有明显的抑制作用,并呈剂量、时间依赖性,不同浓度组之间差异均有统计学意义(P;<;0.05);不同浓度(0、0.5、1和2mmol/L)的盐酸青藤碱处理肝癌细胞48h后,各组中凋亡细胞率分别为(8.31±0.81)%、(12.62±1.13)%;(27.43±0.97)%;(51.74±0.85)%,实验组与对照组之间差异有统计学意义(P;<;0.05);同时发现,与阴性对照组比较,盐酸青藤碱作用组SMMC-7721细胞上清液中IL-1β,TNF-α水平均明显下降,而C/EBPβ的表达水平显著增加(P;<;0.05)。;结论   ;盐酸青藤碱可抑制人肝癌细胞SMMC-7721的细胞增殖,促进其凋亡,此作用可能与其抑制转录因子C/EBPβ,炎症因子如TNF-α、IL-1β的表达,进而通过破坏肿瘤微环境作用有关。     

人类宫颈癌中白细胞介素-6与髓样细胞白血病-1表达的相关性及临床意义

目的研究白细胞介素-6(IL-6)、髓样细胞白血病-1(MCL-1)蛋白及MCL-1mRNA在宫颈癌、癌前病变及正常宫颈组织中的表达情况及其相关性。方法采用免疫组化法检测30例宫颈鳞癌、10例宫颈上皮内瘤变(CIN)及10例正常宫颈组织中IL-6和MCL-1蛋白表达情况,采用逆转录PCR法检测组织中MCL-1 mRNA的表达情况。结果IL-6和MCL-1蛋白在宫颈癌组织中的表达高于正常宫颈组织及CIN组织(P<0.01),且IL-6和MCL-1蛋白的表达呈正相关性(r=0.566,P<0.01);MCL-1蛋白与MCL-1mRNA表达呈正相关性(r=0.772,P<0.01)。结论IL-6和MCL-1的表达在宫颈癌的发生、发展过程中起着共同调节作用,这一发现有助于对早期癌前病变的筛查,并为宫颈癌的治疗提供了一个细胞因子靶点。     

恶性淋巴瘤T细胞亚群及白介素2活性的观察

应用免疫碱性磷酸酶桥联（ＡＰＡＡＰ）法及３Ｈ－ＴＤＲ掺入法检测了３０例非何杰金淋巴瘤（ＮＨＬ）外周血Ｔ淋巴细胞亚群及１４例ＮＨＬ患者白介素２（ＩＬ－２）活性。结果表明：ＮＨＬ患者外周血全Ｔ细胞、ＯＫＴ４细胞的均显著减少（Ｐ＜０．０５），ＯＫＴ８细胞显著增多（Ｐ＜０．０５），ＯＫＴ４／ＯＫＴ８比值明显低于对照（Ｐ＜０．０１），ＩＬ－２活性明显低于对照（Ｐ＜０．０１），ＩＬ－２活性与ＯＫＴ４／ＯＫＴ８比值呈正相关。     

人类宫颈癌中白细胞介素-6与髓样细胞白血病-1表达的相关性及临床意义

目的 研究白细胞介素-6(IL-6)、髓样细胞白血病-1(MCL-1)蛋白及MCL-1mRNA在宫颈癌、癌前病变及正常宫颈组织中的表达情况及其相关性.方法 采用免疫组化法检测30例宫颈鳞癌、10例宫颈上皮内瘤变(CIN)及10例正常宫颈组织中IL-6和MCL-1蛋白表达情况,采用逆转录PCR法检测组织中MCL-1 mRNA的表达情况.结果 IL-6和MCL-1蛋白在宫颈癌组织中的表达高于正常宫颈组织及CIN组织(P＜0.01),且IL-6和MCL-1蛋白的表达呈正相关性(r=0.566,P＜0.01);MCL-1蛋白与MCL-1mRNA表达呈正相关性(r=0.772,P＜0.01).结论 IL-6和MCL-1的表达在宫颈癌的发生、发展过程中起着共同调节作用,这一发现有助于对早期癌前病变的筛查,并为宫颈癌的治疗提供了一个细胞因子靶点.