肿瘤基因治疗载体在临床应用中的问题和研究进展

构建安全、有效、可控的载体为肿瘤基因治疗的瓶颈。肿瘤基因治疗载体分为病毒性载体和非病毒性载体。肿瘤基因治疗载体在临床应用中尚存在许多问题,目前的趋势集中于安全性、高效性、靶向特异性和多功能基因联合研究。     

Fas/FasL及其与肿瘤的关系

:Fas、Fas L是一对细胞膜表面分子。 Fas与 Fas L结合将启动死亡信号 ,导致 Fas+ 细胞出现凋亡。近年研究显示 ,Fas、Fas L的异常表达或功能紊乱 ,将直接影响细胞的生理活动 ,可能与肿瘤的发生、发展及转移有关     

涎腺肿瘤C—erbB—2癌基因的表达分析

本文应用链霉新合素－生物素－过氧化物酶技术,Ｐ１８５的特殊抗体,旨在检测４０例良恶性涎腺肿瘤标本中是否有Ｐ１８５的过量表达,以及探讨其与临床病理指标之间是否存在着相关关系。     

热诱导肿瘤特异性基因治疗载体的靶向性鉴定

目的检测已构建热反应元件修饰的端粒酶逆转录酶hTERT基因启动子(8HSEs-hTERTp)调控的基因表达载体肿瘤特异性和热诱导特性。方法①RT-PCR、Western blot和免疫细胞化学检测细胞内hTERT mRNA和蛋白表达水平,选择hTERT高表达和低表达的细胞株作为该研究阳性细胞株和阴性细胞株;②收集前期已包装成功的热反应元件8HSEs和人端粒酶逆转录酶启动子hTERTp联合调控自杀基因PNP表达的慢病毒表达载体8HhP病毒液,感染hTERT+SW480细胞及hTERT-MKN28细胞、hTERT-MRC-5细胞,细胞免疫荧光技术检测该治疗载体的肿瘤特异性及热反应特性;并用Western blot和RT-PCR分别检测热刺激条件下目的基因PNP在不同hTERT水平细胞株中的表达水平。结果 hTERT mRNA及蛋白在SW480细胞中高表达,在MKN28细胞和MRC-5细胞中低表达甚至阴性表达;免疫荧光、RT-PCR和Western blot结果显示,8HSEs-hTERTp调控的目的基因PNP只有在43℃处理下的SW480细胞中呈现高表达,而在阴性细胞株MKN28和MRC-5中PNP表达较少,而常温下SW480细胞中PNP的表达水平明显低于热处理组。结论 8HSEs修饰的hTERT启动子可以明显提高治疗载体的肿瘤特异性及热反应特性。     

缺氧诱导的肿瘤特异性基因治疗载体的靶向性鉴定

目的检测本课题组已构建的缺氧诱导的hTERT基因启动子(5HRE-hTERTp)调控的基因表达载体调控元件的肿瘤特异性和对缺氧诱导的反应性。方法 MTT法检测不同浓度(100、200、300、400、500μmol/L)CoCl2对LoVo细胞活力以及增殖的影响。收集前期已包装成功的缺氧反应元件(hypoxia-response elements,HRE)和人端粒酶催化亚单位启动子hTERTp联合调控CDX2表达的慢病毒表达载体pLVX-5HRE-hTERTp-CDX2-3FLAG(5HhC)病毒液,感染hTERT+LoVo细胞及hTERT-HK-2细胞,细胞免疫组化法验证该治疗载体的靶向性;复苏前期筛选的稳定表达5HhC的LoVo细胞(5HhC/LoVo),用缺氧模拟剂CoCl2模拟缺氧微环境,Western blot和RT-PCR分别检测缺氧调控下CDX2的表达水平。结果结肠癌细胞株LoVo在不同浓度CoCl2环境下随缺氧时间的延长,细胞活力及增殖均受到抑制,在高浓度(300、400、500μmol/L)作用下抑制效果更加明显;5HhC病毒成功感染hTERT+LoVo细胞,而在hTERT-HK-2细胞中不表达;Western blot和RT-PCR证实缺氧可上调5HhC/LoVo细胞中CDX2蛋白和mRNA的表达,且在300μmol/L CoCl2作用24h其蛋白表达量最高。结论缺氧微环境可明显上调hTERTp靶向性的治疗载体5HhC中抑癌基因CDX2的表达。     

肿瘤免疫研究的回顾与展望

20多年来,本校免疫病理研究室一直从事肿瘤免疫的研究,从研究肿瘤浸润淋巴细胞的活化和肿瘤逃逸的机制开始,到探索诱导浸润淋巴细胞(tumor infiltrating lymphocytes, TIL)活化的最佳条件,并将这些研究结果转化为肿瘤免疫治疗和免疫预防的实践,从一个侧面反映了人类在征服肿瘤道路上的艰苦历程。     

妇科肿瘤组织中端粒酶活性的检测

为明确妇科肿瘤中端粒酶的活性,探索端粒酶活化在妇科肿瘤形成中的作用,应用以ＰＣＲ为基础的端粒酶测定方法（ＴＲＡＰ）对７８例妇科肿瘤和对照组织标本进行端粒酶活性测定。结果表明,端粒酶活性在子宫颈癌、卵巢癌和子宫内膜癌标本中阳性率为９１％（３０／３３）;子宫肌瘤、卵巢良性肿瘤和宫颈湿疣等良性增生病变中阳性率为１５％（３／２０）;正常对照组全部阴性。恶性肿瘤组阳性率明显高于后两组（Ｐ＜０．００５）。提示端粒酶活化是妇科恶性肿瘤中的普遍现象,在妇科肿瘤形成中有重要作用。     

IL-1α、IL-4、IL-6、TNFα基因多态性与自身免疫性甲状腺疾病的关系

目的　自身免疫性甲状腺疾病 (autoimmunethyroiddisease,AITD)包括Graves病 (Graves’disease ,GD)、桥本氏甲状腺炎(Hashimoto’sthyroiditis,HT) ,其发病与遗传易感基因和环境因素之间复杂的相互作用有关。细胞因子是由免疫细胞产生的一组调节细胞功能的高活性、多功能的免疫介质。目前研究表明有多种细胞因子如白细胞介素IL 1、IL 4、IL 6、肿瘤坏死因子(TNF)、γ干扰素 (IFN γ)通过改变免疫活性细胞和甲状腺滤泡上皮细胞的某些功能状态直接或间接参与AITD的发生发展。本课题以IL 1α、IL 4、IL 6、TNFα为侯选基因研究中国山东地区汉族人群AITD患者的多态性 ,找出与AITD发病有关联的基因。方法　选取内分泌专科门诊及住院无血缘关系的山东地区汉族GD及HT患者各 10 0例 ,其中GD组再根据性别、有无甲亢家族史、有无甲亢性眼病再分为三个亚组。选取门诊健康体检者 10 0例 ,均无甲状腺疾病及家族史 ,无其他自身免疫性疾病病史。提取外周血白细胞DNA ,采用序列特异性引物聚合酶链反应 (PCR SSP)检测等位基因和基因型。结果　①GD组与HT组t等位基因频率与对照组比较均明显减低 ,全部AITD患者IL 4 5 90位置启动子区t等位基因频率明显低于对照组 ( 6 %vs 15 .5 % ,P <0 .0 5 )。②基因型分析表明 ,由于t?     

新型自体肿瘤细胞疫苗治疗进展期肿瘤患者的免疫学检测

目的　探讨自体肿瘤疫苗的作用机制。方法　 2 0例进展期肿瘤患者术后第 4周开始以自体肿瘤细胞疫苗行主动免疫治疗。免疫接种共 4次 ,每次间隔 7～ 10d ;接种前 3d及第 4次接种后一周 ,采集外周血 ,分离单个核细胞 ,以流式细胞分析术 /细胞内细胞因子检测法测定CD8+ IFN γ+ ,CD8+ IL 10 + 细胞及CD4+ IFN γ+ ,CD4+ IL 10 + 细胞 ;同时采集血清 ,ELISA法检测血清IFN γ、IL 10水平。结果　自体肿瘤细胞疫苗治疗后 :①血清IFN γ水平升高 [(7.16± 2 .91)ng·L- 1升至 (11.68± 4.86)ng·L- 1,P <0 .0 5] ;而IL 10水平下降 [2 1.0 4± 13 .81)ng·L- 1降至 (13 .41± 5.71)ng·L- 1,P <0 .0 5] ;②CD8+ IFN γ+ 阳性细胞由 (3 .80± 1.45) %升至 (6.94± 2 .63 ) % ;CD4+ IFN γ+ 阳性细胞由 (3 .0 9± 1.52 ) %升至 (5.2 0± 2 .94) % (P <0 .0 5) ;③病人耐受良好。结论　自体瘤细胞疫苗免疫后可改善肿瘤患者细胞介导的抗瘤免疫反应     

IL-2治疗中晚期肺癌的期临床验证及其评价

为观察 r IL- 2临床疗效 ,选择了 50例中晚期肺癌患者 ,分别为鳞癌 2 5例、腺癌 18例、小细胞肺癌 6例、大细胞肺癌 1例。采用联合给药 ,根据 WHO实体肿瘤客观疗效评定标准判断疗效 ,并观察毒副反应。结果 :未分化癌的临床缓解率为 6 6 .7% ,鳞癌、腺癌分别为 4 0 %、38.9% ,生活质量 34例(6 8% )明显改善 ,10例 (2 0 % )稳定 ,仅 6例 (12 % )有所下降。少数患者偶有发冷、发热等不适感觉。     

肾上腺肿瘤的超声诊断价值

用B型超声检查38例肾上腺肿瘤，诊断率为92.1％。该方法具有快捷、方便、费用低廉等特点，应为肾上腺肿瘤诊断和筛选的首选影像学方法。认为瘤体大小、邻近脏器肿瘤、解剖异常和肿瘤呈外生性生长是影响起声定位的因素。对瘤体大小、超声所见和临床表现三者的综合分析是肿瘤准确定性的关键。     

Celecoxib对乳腺癌MCF-7细胞增殖和凋亡的影响

目的 探讨选择性环氧化酶 2(cyclooxygenase-2, COX2)抑制剂Celecoxib对乳腺癌MCF7细胞增殖和凋亡的影响及其机制.方法 用不同浓度(10、20、40μmol/L)的Celecoxib处理MCF7细胞,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测Celecoxib对MCF7细胞增殖的影响;流式细胞仪测定细胞周期和细胞凋亡;RT-PCR法检测COX2基因表达;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测前列腺素E2(PGE2)释放水平.结果 Celecoxib对乳腺癌MCF7细胞增殖的抑制作用呈时间和剂量依赖性;Celecoxib可下调MCF7细胞COX2-mRNA表达.流式细胞仪结果显示:细胞周期各时相中,Celecoxib各浓度组G0/G1期阻滞,S期细胞所占的比例明显减少,有明显的诱导凋亡作用.Celecoxib可明显抑制MCF7细胞PGE2释放水平.结论 Celecoxib可有效抑制乳腺癌细胞增殖,并诱导凋亡.其机制可能与COX2表达下调、PGE2水平下降有关.     

进展期肿瘤主动特异性免疫治疗的临床研究

目的探讨自体肿瘤疫苗的作用机制。方法50例进展期肿瘤患者术后第4周开始以自体肿瘤细胞疫苗行主动特异性免疫治疗。免疫接种共4次,每次间隔7-10 d;接种前3 d及第4次接种后1周,采集外周血,分离单个核细胞,以流式细胞分析术/细胞内细胞因子检测法测定CD8+-IFN-γ+、CD8+-IL-10+细胞及CD4+-INF-γ+、CD4+-IL-10+细胞;用自体肿瘤抗原做皮肤迟发型过敏试验(DTH),48 h后测量红斑、硬结大小(mm)。对DTH反应部位皮肤活检,用免疫组化染色了解局部细胞免疫反应。结果自体肿瘤细胞疫苗治疗后表现为:①CD8+-IFN-γ+阳性细胞由(3.90±1.42)%升至(7.12±2.15)%;CD4+-INF-γ+阳性细胞由(4.19±1.50)%升至(7.20±2.29)%(P<0.05);②与治疗前相比,治疗后患者对自体肿瘤抗原的特异性DTH反应明显增强(P<0.01);③DTH反应部位CD8+T细胞、CD4+T细胞浸润明显增多;④患者耐受性良好。结论自体肿瘤细胞疫苗免疫后,可改善肿瘤患者细胞介导的抗瘤免疫反应;自体肿瘤疫苗可激发患者特异性细胞介导的免疫反应。     

IL-2治疗中晚期肺癌的Ⅲ期临床验证及其评价

为观察rIL-2临床疗效,选择了50例中晚期肺癌患者,分别为鳞癌25例、腺癌18例、小细胞肺癌6例、大细胞肺癌1例.采用联合给药,根据WH O 实体肿瘤客观疗效评定标准判断疗效,并观察毒副反应.结果:未分化癌的临床缓解率为66 .7%,鳞癌、腺癌分别为40%、38.9%,生活质量34例(68%)明显改善,10例(20%)稳定,仅6 例(12%)有所下降.少数患者偶有发冷、发热等不适感觉.     

自身抗体——肿瘤新的早期诊断标志物

肿瘤标志物是指肿瘤细胞本身存在的或分泌的、能反映肿瘤的存在和生长的特异性物质.血清肿瘤标志物已被广泛应用于肿瘤的检测,但是这些标志物的检测是基于肿瘤抗原,在肿瘤的筛选和诊断方面存在很多的不足.本文就目前基于肿瘤患者体内针对肿瘤抗原的自身抗体作为肿瘤诊断的标志物进行综述.这种检测方法是利用肿瘤抗原来检测肿瘤自身抗体,其特异性和敏感性优于传统的检测方法,并为肿瘤的筛选和诊断提供了新的手段.     

全反式维甲酸诱导前列腺癌细胞系DU-145凋亡的分子机理

目的　克隆全反式维甲酸诱导前列腺癌细胞系 DU- 1 45细胞产生凋亡的相关基因。探讨维甲酸诱导前列腺癌细胞产生凋亡的分子机理。方法　应用全反式维甲酸诱导前列腺癌细胞系DU- 1 45细胞凋亡 ,采用基于 PCR的改良消减杂交技术克隆与凋亡相关的基因。结果　在前列腺癌 DU- 1 45细胞凋亡过程中 ,有大量肿瘤坏死因子 (TNF)的表达 ,同时 ,克隆出 c- erb B- 2基因。结论　TNF及 c- erb B- 2基因在由全反式维甲酸诱导的前列腺癌细胞系 DU- 1 45细胞凋亡过程中起着重要作用     

胰腺囊腺肿瘤的影像诊断

目的进一步探讨胰腺囊腺肿瘤的影像学特征及临床应用价值。方法分析经手术和病理证实的17例胰腺囊腺肿瘤的临床表现及影像学特征。结果超声检查17例,可以显示肿瘤大小、位置轮廓,可了解肿瘤囊壁厚度、回声及有无分隔情况;CT检查15例,增强后囊肿不强化,囊壁实性结节明显强化。上消化道钡餐造影(GI)13例,可见胃肠道受压移位;逆行胰胆管造影(ERCP)3例,见胰管受压移位。结论超声和CT是诊断胰腺囊腺肿瘤的有效方法,二者结合可提高诊断率,GI和ERCP在鉴别诊断上有一定价值。