报告一例抗E(rh″)抗体

<正> 关于Rh血型系统的抗D(Rho)抗体,国内已有大宗报到如郝氏,王氏,严氏,抗E抗体除严氏已报到两例外,我们在工作中曾遇到数例抗E抗体,特选其中一例报告于下: 病历摘要产妇王某,33岁。1969年足月分娩一女婴,现健在。产后因失血过多,曾在某地医院输血300ml。1972年元月,足月分娩一女婴,婴儿降生后当日即见黄疸出现,渐渐加重。生后     

2342例孕妇Rh血型及免疫抗体测定与新生儿溶血病

作者对２３４２例孕妇进行了Ｒｈ血型检查，其中３７５例疑有血型抗原免疫者进行了血清免疫抗体测定。结果，检出Ｒｈ阴性孕妇１３例，其中２例血清中存在ＩｇＧ抗Ｄ抗体。对孕妇进行Ｒｈ血型及免疫抗体测定，可为Ｒｈ新生儿溶血病的产前诊断和治疗提供诊断依据，并对孕妇围产期及以后的输血有指导意义。     

肿瘤与血型抗体

<正> 肿瘤与血型的关系已引起了人们的关注,有人报告、A型与胃癌之间有重要的联系。但肿瘤的发生发展与患者本人的血型抗体有无关系?本文就100例各种肿瘤患者(包括A.B.O血型)的血型抗体作了检测,正常人(健康献血员)50例(A.B.O血型)作对照。现报告如下: 一、材料和方法: (一) 材料     

自身抗体正常人群中459例抽样检查报告

<正> 血清中自身抗体是自身免疫反应和自身免疫性疾病的重要标志之一。现已发现有二十余种。随着免疫学的进展,发现一些正常人,特别是60岁以上的老年人,亦存在一种或一种以上的自身抗体:如抗核抗体(ANA)、抗甲状腺球蛋白抗体(TGA)、抗甲状腺微粒体抗体(TMA)、抗胃壁细胞抗体(PCA)等,但并不引起机体的组织细胞损伤。为了研究自身抗体在正常人群中分布情况,我们在正常人群中抽样459例进行检查报告如下:     

制备胃蛋白酶结晶并用之消化人IgG制备F(ab')_2

<正> 目前在免疫学研究中抗体的F(ab’)_2已为不可缺少的试剂,然国内市场既无抗体F(ab’)_2出售亦无制备F(ab’)_2所需的结晶胃蛋白酶供应。我们在瘤组织内淋巴细胞亚群分布的研究中须用人IgG的F(ab’)_2作抗原制备抗多价人免疫球蛋白(Ig)抗血清,为此乃以药用胃蛋白酶为材料制备了三次结晶的胃蛋白酶,用以水解人IgG,制备出IgG的F(ab’)_2片段兹将我们的方法介绍于下。     

滴金法检测幽门螺杆菌细胞毒素相关蛋白A抗体试剂盒的研制及应用

目的　建立一种快速、简易的检测血清中抗幽门螺杆菌 (Hp)细胞毒素相关蛋白A(CagA)抗体的胶体金免疫渗滤法 (DIGFA)。方法　采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金颗粒 ,标记葡萄球菌A蛋白 (SPA) ,将重组的CagA抗原固定于硝酸纤维素膜上 ,制成免疫渗滤试剂盒。血清中抗CagA抗体与试剂盒上金标记物及硝酸纤维素膜上的固相抗原结合后 ,形成肉眼可见的红色斑点。结果　用DIGFA与酶联免疫吸附试验 (ELISA)试剂盒对比检测了 32 6份血清标本中抗CagA抗体 ,本方法的特异性为 95 .8% ,敏感性为 97.3% ,两种方法符合率为 96 .6 %。结论　DIGFA检测血清中的抗CagA抗体特异性强、灵敏度高、简便快速 ,无需特殊仪器设备 ,有广泛应用价值     

小鼠抗人T淋巴细胞表面抗原噬菌体抗体库的构建及筛选

目的　构建并筛选小鼠抗人静息 /活化T淋巴细胞表面抗原的噬菌体展示抗体库。方法　以人静息 /活化T淋巴细胞免疫Balb/c小鼠 ,取脾细胞 ,RT -PCR扩增VH 和VK 基因 ,拼接为ScFv ,插入噬菌粒载体转化大肠杆菌 ,构建了噬菌体展示抗体库 ,以人T淋巴细胞为靶抗原 ,对该库进行了 3轮淘洗 ,ELISA方法鉴定噬菌体抗体。结果　成功构建了最大实际库容量为 1 .75× 1 0 6的小鼠抗人静息T淋巴细胞表面抗原的噬菌体展示ScFv抗体库和小鼠抗人活化T淋巴细胞表面抗原的噬菌体展示ScFv抗体库。结论　所构建的抗体库可进一步用于对T淋巴细胞表面蛋白抗原的差异显示分析及构建基因工程抗体。     

食管鳞状细胞癌中的A、B血型抗原

用我们改良的特异性红细胞粘连试验对50例食管鳞癌的A、B血型抗原进行了研究。由于已往该试验都是在不染色切片上观察,有时难予辨认癌细胞或细胞巢,故我们在抗原反应之前将切片作美兰染色。观察后以5%福尔马林和5%戊二醛的PBS固定切片,然后行H E染色,这样切片可长期保存。50例食管鳞癌标本中之正常上皮均为血型抗原阳性,然47例之癌组织却呈不同程度的血型抗原丢失,完全丢失者28例,部分丢失者19例。将癌组织中血型抗原丢失情况与癌组织的分化程度、浸润性、局部转移、淋巴细胞浸润及纤维性间质增生进行比较,发现血型抗原丢失的程度与癌的分化高低呈负相关关系,而与癌的浸润性、局部转移、淋巴细胞浸润及间质增生无明显关系。我们认为癌组织血型抗原丢失可能是随着细胞癌变而来的去分化现象,癌细胞可能丧失了合成这种抗原的能力。     

抗人钠碘转运体单克隆抗体杂交瘤细胞系的建立与鉴定

目的　利用合成短肽制备抗人钠碘转运体 (NIS)单克隆抗体。方法　以人NIS蛋白质的两个片段 (第 2膜外段和第14f段 )为抗原免疫小鼠 ,运用杂交瘤技术 ,制备鼠抗人NIS单克隆抗体 (rhNISMAb) ,然后采用小鼠Ig亚类测定试剂条测定单抗的亚类 ,并通过ELISA、Western blot、免疫组化染色等技术鉴定其特异性。结果　运用杂交瘤技术成功地制备出能稳定分泌抗人NIS单克隆抗体的细胞系。Western blot分析表明 :此单抗所识别的靶分子的相对分子量主要在 97KD ,免疫组化染色显示 :甲状腺滤泡细胞膜上有棕黄色着色 ,以基底侧最为明显。结论　成功地制备出抗人NIS单克隆抗体 ,为NIS抗原 抗体的研究提供了新的工具     

融合基因Aβ-HBcAg的原核表达及表达蛋白的免疫反应性和免疫原性分析

目的　研究 β 淀粉样肽 (β amyloidpeptide,Aβ)与乙型肝炎核心抗原 (HBcAg)融合基因Aβ HBcAg的原核表达 ,检测融合蛋白的免疫反应性及免疫原性。方法　将重组质粒pBV2 2 0 /Aβ HBcAg转化大肠杆菌DH5α,温控表达 ,超声破碎细菌 ,通过SDS PAGE、考马斯亮蓝染色和ELISA等方法 ,观察Aβ HBcAg的表达及融合蛋白的免疫反应性 ;用融合蛋白免疫Balb/c小鼠 ,ELISA法检测血清中的抗 Aβ抗体和抗 HBc抗体滴度。结果　融合蛋白以包涵体的形式存在于沉淀中 ,表达量为菌体沉淀的 5 % ,融合蛋白既有Aβ的免疫反应性 ,又有HBcAg的免疫反应性。Balb/c小鼠经过 3次免疫后 ,血清中的抗体滴度很低 ,继续强化免疫 2次后 ,血清中抗 Aβ抗体滴度、抗 HBc抗体滴度分别上升为 1∶80 0和1∶32 0 0。结论　融合基因Aβ HBcAg可在大肠杆菌DH5α中表达 ,表达蛋白有一定的免疫反应性和免疫原性 ,但表达量较低 ,免疫反应性和免疫原性较弱。提示融合基因Aβ HBcAg的表达量和融合蛋白免疫原性的提高尚需进一步研究。     

Graves病自身免疫单链抗体库的构建及抗甲状腺单抗的筛选

目的　Graves病属于甲状腺自身免疫性疾病 (AITD) ,其患者血中存在多种抗甲状腺自身抗体 ,其中包括TGAb、TPOAb以及TRAb。单链抗体 (ScFv)是以连接肽将重链可变区基因 (VH)和轻链可变区基因 (VL)连接起来形成的单链小分子抗体。为了获得人源性抗甲状腺抗体 ,分析其基因结构 ,进一步研究AITD的发病机理 ,我们构建了人源性噬菌体ScFv库。方法　采取Graves病人静脉血 ,用淋巴细胞分层液按常规分离单个核细胞。提取淋巴细胞总RNA逆转录合成cDNA。分别扩增出全套的免疫球蛋白VL 链和VH 链基因 ,利用重叠PCR方法 ,构建ScFv基因。重组到 p3SCMH嗜菌粒中 ,电穿孔转化XL1 Blue大肠杆菌。经适当培养后 ,加入约 10 12 空斑形成单位 (PFU)的辅助噬菌体VCSM13,构建噬菌体抗体库。测定库容 ,鉴定重组率。以固相化的抗原对噬菌体ScFv库进行了 4轮“吸附 洗脱 扩增”的筛选 ,富集特异性噬菌体抗体。用ELISA竞争抑制实验检测富集的噬菌体抗体。结果　以单链cDNA为模板 ,用PCR方法分别扩增VL 链和VH 链的DNA。PCR产物经 15g·L-1琼脂糖电泳检测 ,分别在 380bp和 4 2 0bp左右见到扩增带。将VL 和VH 进行重叠PCR制备ScFv ,琼脂糖电泳显示PCR产物在 80 0bp左右有扩增带。将ScFv基因纯化 ,用SacⅠ+SpeⅠ双酶消化后 ,重组到 p3     

迟缓爱德华菌抗独特型单链抗体基因的构建、表达及鉴定

目的 构建、表达及鉴定迟缓爱德华菌抗独特型单链抗体基因.方法 采用RT-PCR方法从分泌迟缓爱德华菌独特型单克隆抗体的杂交瘤细胞株(1E11)中克隆出V_H和V_L可变区基因, 再通过重叠延伸拼接PCR方法在V_H和V_L可变区基因之间引入连接肽(Gly_4ser)_3,体外构建单链抗体基因;将其克隆至表达载体pET-28a并在大肠杆菌中表达,表达产物纯化后,用SDS- PAGE、Western blot及ELASA进行鉴定.结果 迟缓爱德华菌抗独特型单链抗体基因scFv在BL21(DE3)菌中获得表达,表达产物以不溶性包涵体形式存在,经过溶解包涵体、纯化和体外复性,获得了高纯度的单链抗体片段,重组蛋白的分子质量为27 ku.ELASA分析结果证实迟缓爱德华菌抗独特型单链抗体基因scFv与原代抗体一样,具有较高的抗原亲和力.结论 成功构建了迟缓爱德华菌抗独特型单链抗体基因scFv,为进一步制备迟缓爱德华菌抗独特型抗体基因工程疫苗奠定基础.     

新型抗ErbB2、抗CD16三价双特异性抗体的构建及功能鉴定

目的构建一种新型三价抗ErbB2、抗CD16 BsAb。方法构建重组载体pET22b( )/BsAb;转化大肠杆菌BL21(DE3),获得重组蛋白的表达,通过包涵体复性纯化蛋白。应用悬浮培养系统扩增稳定表达抗人CD16 scFv-Fc融合蛋白的CHO细胞株(CG5细胞)和稳定表达抗人ErbB2 scFv-Fc融合蛋白的CHO细胞株(HG2细胞),通过rProtein A Sepharose Fast Flow亲和层析柱纯化融合蛋白,应用流式细胞术分析BsAb的结合能力。结果该BsAb可在大肠杆菌BL21(DE3)中以包涵体形式高效表达,通过对重组蛋白的复性可获得高纯度的蛋白;复性后的BsAb具有与其亲本抗体相似性的结合靶抗原的能力。结论新型三价抗ErbB2、抗CD16 BsAb能与高表达ErbB2的乳腺癌细胞系SKBR3细胞高亲和力结合和表达CD16的人外周血单个核细胞低亲和力结合。     

抗人γ-精浆蛋白VH单域抗体基因的构建、表达及空间构象分析

目的扩增出抗人γ-精浆蛋白(γ-Sm)单克隆抗体(mAb)的重链可变区(VH)单域抗体基因,并进行原核表达及空间构象分析。方法从分泌抗γ-SmmAb的杂交瘤细胞系E4B7中提取总RNA,经RT-PCR扩增VH单域抗体基因,将其克隆到融合蛋白表达载体pGEX-4T-1中进行表达,并利用计算机软件对表达产物进行空间构象分析。结果VH单域抗体基因全长363bp,含起始码和终止码。将其克隆到pGEX-4t-1内,转化大肠杆菌DH5α,获得高效表达,表达量占全菌总蛋白质的38％,以包涵体形式存在。经初步纯化和复性后,用谷胱甘肽(GST)亲和色谱纯化,再经凝血酶水解获得抗γ-SmVH单域抗体。竞争结合抑制实验证明,该表达产物具有前列腺癌细胞亲和活性。空间构象分析结果显示,该抗体具有完整的抗原结合位点。结论构建成功抗γ-Sm的VH单域抗体,为进一步临床应用奠定基础。     

抗人γ-精浆蛋白V_H单域抗体基因的构建、表达及空间构象分析

目的　扩增出抗人γ 精浆蛋白 (γ Sm)单克隆抗体 (mAb)的重链可变区 (VH)单域抗体基因 ,并进行原核表达及空间构象分析。方法　从分泌抗γ SmmAb的杂交瘤细胞系E4B7中提取总RNA ,经RT PCR扩增VH 单域抗体基因 ,将其克隆到融合蛋白表达载体 pGEX 4T 1中进行表达 ,并利用计算机软件对表达产物进行空间构象分析。结果　VH 单域抗体基因全长 363bp ,含起始码和终止码。将其克隆到 pGEX 4T 1内 ,转化大肠杆菌DH5α ,获得高效表达 ,表达量占全菌总蛋白质的 38% ,以包涵体形式存在。经初步纯化和复性后 ,用谷胱甘肽 (GST)亲和色谱纯化 ,再经凝血酶水解获得抗γ SmVH 单域抗体。竞争结合抑制实验证明 ,该表达产物具有前列腺癌细胞亲和活性。空间构象分析结果显示 ,该抗体具有完整的抗原结合位点。结论　构建成功抗γ Sm的VH 单域抗体 ,为进一步临床应用奠定基础。     

单项低水平抗-HBs阳性者对接种乙肝疫苗的免疫应答(摘要)

<正> 为了阐明单项低水平抗—HBs阳性者是否具有免疫性,1986年5月～1987年5月,我们在西安市郊两所小学经HBV三项指标(HBsAg、抗-HBs、抗-HBe)筛查,选取单项低水平抗-HBs阳性者(S/N:2.1—10)85人作为本次的研究对象,并以HBV三项指标全阴性者180人作为对照,年龄均为5～9岁。根据随机化原则,将低水平抗体组和HBV指标全阴性组均分为疫苗接种组与安慰剂对照     

新生儿性别与母亲HBsAg/抗—HBs状态的关系

<正> 流行病学资料证实,乙肝病毒(IIBV)感染后男性易成为乙肝表面抗原(IIBsAg)携带状态,而女性则易产生相应抗体(抗-IIBs)。国外研究双亲IIBsAg/抗-IIBs状态与其子女第二性比率(SSR,活产男婴数/活产女婴数)关系的结果表明,父母双方抗-IIBs均阴性而一方IIBsAg阳性时,SSR最高;父母双方IIBsAg均阴性而一方抗-IIBs阳性时,SSR最低。Blumberg等提出生物学假说,即HBV的抗原与男性相关抗原间存在交叉反应性,以解释这些现象。我们分析了1986年7月～1989年9月出生于我院新生儿的母亲IIBsAg/抗-IIBs状态,以探讨母亲IIBsAg/抗-IIBs与新生儿性别的关系。IIBsAg     

用体外致敏联合EB病毒转化技术构建抗肝癌的人源Fab噬菌体抗体库

目的构建抗肝癌的人源Fab噬菌体抗体库。方法体外致敏并用EB病毒(EBV)转化肝癌患者的外周血单个核细胞(PBMC)。RT-PCR扩增人抗体轻链和重链Fd段基因,将抗体基因分别与载体pComb3连接后,电转化大肠杆菌XLI-Blue,构建噬菌体呈现型Fab抗体库。结果经EBV转化的4例肝癌患者PBMC,ELISA检测均有抗肝癌抗体产生;经PCR扩增出13条轻链基因片段(κ、λ)和28条重链Fd基因片段(γ);电转化构建的噬菌体抗体库库容为1.7×107puf/mL;Fab基因的重组率约为100%。结论用体外致敏法结合噬菌体抗体库技术,成功构建了全人源抗肝癌Fab组合抗体文库。     

贫困山区孕期CMV感染与IL-6的关系

目的　研究贫困山区孕期巨细胞病毒 (Cytomegalovirus,CMV)感染状况 ,探讨孕期CMV感染与白细胞介素 6(Interleukin 6,IL 6)的关系。方法　用ELISA和PCR方法检测贫困山区30 5例正常孕妇外周血特异性CMVIgM抗体及CMVDNA ,对其中 48例孕期CMV感染者及68例孕期未感染CMV者进行随访 ,检测产后两周内乳汁及新生儿尿液CMVDNA ;并采用双抗体夹心ELISA法检测孕妇及乳母外周血中IL 6水平。结果　孕妇CMV活动性感染率 1 9.0 2 % ,孕期CMV活动性感染及乳汁排泄CMV者其外周血IL 6水平显著高于未感染者 (P <0 .0 5 )。结论　贫困山区孕期CMV感染率较国内外报道的高 ;IL 6在孕期活动性CMV感染中可能起着重要作用     

抗人γ-精浆蛋白V_H单域抗体/人p53四价功能域融合基因的构建及空间构象分析

目的　构建抗人γ 精浆蛋白 (γ Sm)重链可变区 (VH)单域抗体 /人 p5 3四价功能域融合基因 ,并进行空间构象分析。方法　选用人IgG3上游铰链区作为抗体和人p5 3四价功能域之间连接的linker。利用回归PCR法扩增人IgG3上游铰链区与人p5 3四价功能域融合基因 ,并在融合基因 5’端和 3’端引入SalⅠ与HindⅢ酶切位点 ,将融合基因克隆入 pUC1 9载体中构建pUC1 9/IgG3 /p5 3克隆载体。将抗人γ SmVH 单域抗体克隆入 pUC1 9/IgG3 /p5 3载体中 ,构建抗人γ SmVH 单域抗体 /人 p5 3四价功能域融合基因。经酶切鉴定及序列测定证实后 ,利用计算机软件进行空间构象分析。结果　获得了抗人γ SmVH 单域抗体 /人 p5 3四价功能域融合基因 ,基因全长 5 2 8bp ,可编码 1 76个氨基酸 ,与已发表的抗人γ SmVH 单域抗体、人IgG3上游铰链区和人p5 3四价功能域基因cDNA序列一致。计算机软件分析结果显示 ,融合基因表达产物可自动装配成四聚体抗体 ,并具有四条长的、柔性好的多肽 ,可确保每个抗体空间构象的独立性。结论　构建成功四价抗人γ SmVH 单域抗体 ,为进一步临床应用奠定基础。