人白细胞介素18cDNA的克隆及序列测定

获取人ＩＬ－１８ｃＤＮ克隆。方法用ＲＴ－ＰＣＲ方法从人外周血单个核细胞中获取人ＩＬ－１８ｃＤＮＡ，将其克隆至天然蛋白表达载体ＰＢＶ２２０中，并进一步亚克隆至融合蛋白表达载体ＰＧＥＸ－４Ｔ－３中，对其进行酶切分析及序列测定。结果测序结果表明克隆至ＰＢＶ２２０中的ＩＬ－１８ｃＤＮＡ包含成熟ＩＬ－１８蛋白的全部编码序列，酶切分析表明一约４７０ｂｐ的基因片段克隆至ＰＧＥＸ－４Ｔ－３中，与理论预计的一致。结     

人白细胞介素-2 cDNA导入对卵巢癌耐药细胞株耐药性的逆转

为了构建ｐｃＤＮＡ－ＩＬ－２真核表达质粒，并探讨白细胞介素－２（ＩＬ－２）ｃＤＮＡ导入对顺铂诱导的卵巢癌耐药细胞株耐药性的影响。我们采用ＰＣＲ技术扩增人ＩＬ－２ｃＤＮＡ片段，构建ｐｃＤＮＡ－ＩＬ－２真核表达质粒。导入顺铂诱导的人卵巢癌耐药细胞株，观察其耐药性的改变。结果成功构建了ｐｃＤＮＡ－ＩＬ－２真核表达质粒，并在Ｃｏｓ－７细胞高效表达，导入卵巢癌耐药细胞后其对顺铂的敏感性显著升高。说明转导ｐｃＤ－ＮＡ－ＩＬ－２基因的人卵巢癌耐药细胞株其耐药性有明显逆转，而且ＩＬ－２亦可逆转非ｍｄｒ１依赖的耐药性     

PCR测定沙门氏菌,霍乱弧菌和副溶血弧菌的研究

从沙门氏菌鞭毛素基因序列，副溶血弧菌耐热溶血素基因序列和霍乱弧菌肠毒素基因序列中分别选择并合成一对引物，其ＰＣＲ扩增产物２６４Ｂｐ，２９３ｂｐ和２９２ｂｐ。对这三种菌的标准株，临床株及无关菌株的ＰＣＲ测定及酶切鉴定，均显示良好的特异性。     

套式RT-PCR检测肾综合征出血热病毒方法的建立及应用

针对汉坦病毒（Ｈａｎｔａｎｖｉｒｕｓ,ＨＶ）中国代表株（Ａ９、Ｒ２２）Ｍ基因片段设计分型引物（Ⅰ、Ⅱ型）,采用改进的异硫氰酸胍酚一步法（胍酚法）提取汉坦病毒ＲＮＡ,套式ＲＴ－ＰＣＲ检测稀释病毒上清,模拟病人血清和２０例急性期（１～７ｄ）血清样本。结果：能检测到模拟血清中少至几个ＰＦＵ病毒ＲＮＡ,敏感性５～１０ｆｇ。检测过程可在５ｈ内完成。２０例急性期患者血清检测阳性率为１００％,并能进行临床分型。扩增产物经打点杂交证实其特异性。而正常及非ＨＦＲＳ患者血清结果均为阴性。提示：套式ＲＴ－ＰＣＲ基因诊断技术优于传统的ＭａｃＥＬＩＳＡ、ＩＦＡＴ和ＲＰＨＩ诊断法。     

纸层析发校法检测结核杆菌PCR扩增产物

目的 建立一种新的快速纸层析杂交技术，用于特异性检测带有生物素标记的合酶链式反应（ＰＣＲ）扩增产物。方法 将特异性捕获探针固定在聚酯砜膜上，扩增产物置膜一端，经毛细作用，带有生物素标记的特异性ＤＮＡ分子固定于反应区，非特异性分子被洗脱，杂交物通过链霉亲和素硷性磷酸酶偶联物及底物（ＢＣＩＰ－ＮＢＴ）显色后判断结果，结果 这一技术允许在２５ｍｉｎ内交将结核杆菌经ＰＣＲ扩增后的ＤＮＡ１０ｐｇ检出，结论     

W基因组织表达的特异性

Ｗ基因是利用周转神经髓鞘蛋白ＰＭＰ－２２基因的编码区５’－及３’－序列引物，藉ＰＣＲ方法自人脑胶质瘤ｃＤＮＡ文库中扩增的一个基因片段，本实验研究Ｗ基因组织表达的特性性。方法搜集不同组织来源的肿瘤及正常脑组织标本，行ＲＴ－ＰＣＲ及ＲＮＡ斑点杂交检测。     

原发性高血压患者氨苯喋啶敏感性钠通道β亚单位基因12外显子的PCR-SSCP分析

为确定原发性高血压患者是否存在氨苯喋啶敏感性钠通道（Ａｍｉｌｏｒｉｄｅｓｅｎｓｉｔｉｖｅｓｏｄｉｕｍｃｈａｎｎｅｌ，ＡＳＳＣ）β亚单位基因第１２外显子ＤＮＡ片段突变，本研究采用ＰＣＲ－ＳＳＣＰ技术对１４８例确诊型高血压病患者的ＡＳＳＣβ亚单位基因第１２外显子进行了分析。结果在原发性高血压患者中检出了３例有ＡＳＳＣβ亚单位基因第１２外显子突变的个体。提示原发性高血压的发生与ＡＳＳＣβ亚单位基因第１２外显子突变有关，它可能是原发性高血压发生的分子基础之一。     

AT1受体基因型和环境因素对高血压病人群脑梗？…

目的 探讨血管紧张素Ⅱ１型受体基因（ＡＴ１Ｒ基因）Ａ／Ｃ＾１１６６多态性与高血压病并发脑梗死的关系，评价ＡＴ１Ｒ基因以及１０余种侯选危险因素对高血压病人群脑梗死发生的危险贡献。方法 随机收集高血压病例２４０例，按合并脑梗死的无分为两组，采集临床病史资料，留取血标本进行临床生化指标检验和ＡＴ１Ｒ基因分析。基因分析采用ＰＣＲ－ＡＳＯ点杂交法。结果 ①２４０例病例ＡＴ１Ｒ基因的检测，未发现ＣＣ型，两种基     

EGFR和pS2蛋白在直肠癌中的表达及其临床意义

表皮生长因子受体 (Ｅｐｉｄｅｒｍａｌｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒｒｅｃｅｐｔｏｒ ,ＥＧＦＲ)及其相关配体表皮生长因子 (Ｅｐｉｄｅｒｍａｌｇｒｏｗｔｈｆａｃ ｔｏｒ ,ＥＧＦ)和转化生长因子α(Ｔｒａｎｓｆｏｒｍｉｎｇｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒａｌ ｐｈａ,ＴＧＦ浕)是细胞信号传导系统的一部分。研究表明 ,ＥＧＦＲ基因的拷贝数增加或过度表达 ,均能促进正常细胞的增殖、转化与恶性肿瘤细胞的生长和转移。ｐＳ2蛋白作为一种雌激素调节蛋白 ,其表达不但受雌激素调节 ,同时也受ＥＧＦ、ＴＧＦ浕等因子的影响。本研究采用免疫组化技术 ,…     

Cadherin-Catenin复合体及p53蛋白表达与早期胃癌淋巴结转移的关系

运用单克隆抗Ｅ－ｃａｄ、ａ－ｃａｔ和ｐ５３蛋白抗体及免疫组化方法检测了６９例早期胃癌标本。结果显示，Ｅ－ｃａｄ及ａ－ｃａｔ表达减弱率分别为５３．６％和６５．２％，ｐ５３蛋白阳性率为２７．５％。Ｅ－ｃａｄ及ａ－ｃａｔ的表达显著相关，而ｐ５３的表达与Ｅ－ｃａｄ或α－ｃａｔ表达无关。粘膜下癌α－ｃａｔ减弱表达及ｐ５３蛋白阳性表达者淋巴结转移率较高；而α－ｃａｔ保留表达及ｐ５３蛋白阴性表达者无论是粘膜内或粘膜下癌，未见淋巴结转移。提示结合α－ｃａｔ及ｐ５３蛋白表达，可协助诊断早期胃癌淋巴结转移。     

小鼠乳腺癌细胞系IL—2基因转导及成瘤性研究

研究白细胞介素２转基因乳腺癌组织在小鼠体内成瘤性。方法 用感染法将人ＩＬ－２基因体外导入乳腺癌细胞系４Ｔ１。转基因细胞４Ｔ１－ＩＬ＝２培养上清内ＩＬ－２分泌量，ＤＮＡ，ＲＮＡ分别ＥＬＩＳＡ，Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交及逆转录ＰＣＲ法分析。体内实验将动物区分４Ｔ１，ＲＴ１／ＩＬ－２混合接种或单独接种三组。     

人工合成广谱细胞生长因子全基因

目的 利用ＰＣＲ介导的半酶促半化学法人工合成经改造的广谱细胞生长因子基因。方法 将基因依据其限制性内切酶切点分为左中右三个区段。化学合成若干寡核苷酸小片段,利用ＰＣＲ的方法介导寡核苷酸小片段之间的连接。最后将三条基因区段基因区段组合为完整的基因。结果 各区段及全基因的序列经测定与设计方案相符。结论 广谱细胞茵子基因的成功合成为将来的表达与应用研究创造了条件,同时证明ＰＣＲ介导的人工基因合成法是一种     

内皮素受体基因在冠心病患者外周血中表达及意义

目的 研究内皮素受体基因（ｅｎｄｏｔｈｅｌｉｎ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ｇｅｎｅ Ａ，ＥＴＡ）在冠心病患者外周血中的表达情况，探讨其临床意义，并建立外周血ＥＴＡ基因的ＲＴ－ＰＣＲ检测方法。方法 应用ＲＴ－ＰＣＲ技术检测外周血循环中ＥＴＡ基因表达水平。结果 ３５例冠心病患者中有３０例出现阳性条带，阳性率为８５％。对照组２０例中有１６例阳性，阳性率为８０％。对两组中出现的阳性条带应用义作半定量分析，冠心病患     

NIDDM血管病变与血浆内皮素,6—酮—前列环素F1α,血栓？…

探讨ＮＩＤＤＭ病人血管病与血浆内皮素、６－酮－前列环素Ｆ１α、血栓素Ｂ２的关系。方法应用放射免疫法测定ＮＩＤＤＭ病人血浆ＥＴ、ＴＸＢ２、６－Ｋ－ＰＧＦ１α的变化。结论血浆ＥＴ、ＴＸＢ２、６－Ｋ－ＰＧＦ１αＲ ＮＴＹＯＳＫ ＲＣ ＪＭＤＹＭＷ ＨＣ ＸＬＥＱ 程度，提示可能存在糖尿病血管并发症。     

用PCR-SSCP方法研究子宫颈癌组织中人乳头瘤病毒E_7基因的变异

运用核酸杂交和聚合酶链式反应（ＰＣＲ）对临床确诊的６１份子宫颈癌Ⅱ～Ⅲ期标本进行了人乳头瘤病毒（ＨＰＶ）１６型Ｅ７基因的检测。非同位素地高辛标记探针斑点杂交阳性检出率为４５．９％，ＰＣＲ检测阳性率为５４．１％，两种检测结果证实ＨＰＶ－１６型感染与子宫颈癌的发生密切相关。进一步用灵敏的单链构象多态性分析法（ＳＳＣＰ）对３３例阳性标本进行分析，发现有２７例单链ＤＮＡ迁移率与正常对照有不同，推测均发生了ＤＮＡ序列的改变，提示ＨＰＶ－１６Ｅ７基因的变异在子宫颈癌组织中是较常见的现象，其与子宫颈癌的发生有一定的关系。     

PCR技术对两个Huntington舞蹈病家系的遗传学分析

本文对两个Ｈｕｎｔｉｎｇｔｏｎ舞蹈病家系进行调查并应用ＰＣＲ技术作了基因检测，所用引物５’－ＣＴ－ＧＴＧＧＧＡＣＣＴＣＧＧＣＴＡＡＧＣ－３‘及５’－ＧＴＣＡＧＣＡＣＣＴＣＡＧＡＣＣＡＧＡＧ－３‘，合成了ＰＹＮＺ－３２标志基因，经多态性连锁分析提示它对国人Ｈｕｎｔｉｎｇｔｏｎ舞蹈病进行基因检测和临床应用具有可能性。     

应用PCR方法检测人乳头瘤病毒的E_7转化基因

应用聚合酶链反应技术（ＰＣＲ）检测５４份子宫颈癌活检标本中人乳头瘤病毒１６型（ＨＰＶ－１６）Ｅ７转化基因的存在情况，结果显示阳性率为７２．２％（３９／５４）。ＨＰＶ－１６Ｅ７转化基因在人子宫颈癌组织中的高检出率，证实该转化基因与其发生关系密切。本研究同时证明，ＰＣＲ方法具有敏感、特异、快速和实用特点，值得推广。     

早期复极综合症心率变异性改变

观察了３１例早期复极综合症（ＥａｒｌｙｒｅＰｏｌａｒｉｚａｔｉｏｎｓｙｎｄｒｏｍｅ，ＥＲＳ）Ａ２９例正常对照组·Ｃ率变异（Ｈｅａｒｔｒａｔｅｖａｒｉａｂｉｌｉｔｙ，ＨＲＶ）五个时域指标的改变。结果发现，ＥＲＳ组相邻正常Ｒ－Ｒ问期差值的均万根ＧｅｑｕａｒｅｒｏｏｔｄｔｈｅｍｅａｎｓｑｕａｒｅｄｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅｓｄＳｕｅ－ｃｅｓｓｉｖｅＮＮｉｎｔｅｒｖａｌｓ，ｒＭＳＳＤ）及相邻Ｗ常Ｒ－Ｒ问期至值大于５０ｍｓｉ６数占总Ｒ－Ｒ间期数的百分比（ＰｒｏＰｏｒｔｉｏｎｏｆＮＮ　ｉｎｔｅｒｖａｌｇｒｅａｔｅｒｔｈａｎ５０ｍｓ，ＰＮＮｓ。）较对照增高，其余指标无明显差异。提示ＥＲＳ存在到交感神经活性增高。ＥＲＳ·Ｏ率变异的特征性改变对于该症的诊断及鉴别诊断具有一定意义。     

pEGFP-N1-TNFα表达载体的构建与鉴定

目的构建pEGFP-N1-TNFα重组质粒并鉴定,为转导CIK细胞并定位表达奠定基础。方法以pMD19Sim-ple T-TNFα为模板,PCR扩增TNFαCDS区片段,将PCR产物进行15g/L琼脂糖凝胶电泳,并回收TNFα条带,用BglⅡ和HindⅢ将TNFα的PCR片段及目的载体pEGFP-N1双酶切,然后进行连接。连接产物转化至DH5α中。挑取克隆,提质粒,进行鉴定。结果 PCR扩增片段、双酶切出现722bp大小的目的基因条带与预期结果相符;插入片断测序结果与合成的寡核苷酸序列一致。结论成功构建了重组质粒pEGFP-N1-TNFα,为下一步用纳米材料转染CIK细胞的研究奠定了基础。     

Desmin基因exon6 A360P错义突变与克山病的关系

目的探讨Desmin基因exon6的A360P错义突变与克山病心肌损伤发生发展的关系。方法采用临床流行病学方法调查,随机抽取年龄、性别相匹配的慢型和潜在型克山病患者、病区正常组和非病区正常组各30例血样,提取基因组DNA,采用PCR扩增、酶切、电泳等技术比较各组Desmin基因片断酶切位点的变化。结果慢型和潜在型克山病患者与病区正常组未检出Desmin基因exon6的A360P错义突变位点。结论Desmin基因exon6的A360P错义突变可能不是克山病心肌损伤的易感基因突变。