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相似文献
 共查询到20条相似文献,搜索用时 279 毫秒
1.
获取人IL-18cDN克隆。方法用RT-PCR方法从人外周血单个核细胞中获取人IL-18cDNA,将其克隆至天然蛋白表达载体PBV220中,并进一步亚克隆至融合蛋白表达载体PGEX-4T-3中,对其进行酶切分析及序列测定。结果测序结果表明克隆至PBV220中的IL-18cDNA包含成熟IL-18蛋白的全部编码序列,酶切分析表明一约470bp的基因片段克隆至PGEX-4T-3中,与理论预计的一致。结  相似文献   

2.
为了构建pcDNA-IL-2真核表达质粒,并探讨白细胞介素-2(IL-2)cDNA导入对顺铂诱导的卵巢癌耐药细胞株耐药性的影响。我们采用PCR技术扩增人IL-2cDNA片段,构建pcDNA-IL-2真核表达质粒。导入顺铂诱导的人卵巢癌耐药细胞株,观察其耐药性的改变。结果成功构建了pcDNA-IL-2真核表达质粒,并在Cos-7细胞高效表达,导入卵巢癌耐药细胞后其对顺铂的敏感性显著升高。说明转导pcD-NA-IL-2基因的人卵巢癌耐药细胞株其耐药性有明显逆转,而且IL-2亦可逆转非mdr1依赖的耐药性  相似文献   

3.
从沙门氏菌鞭毛素基因序列,副溶血弧菌耐热溶血素基因序列和霍乱弧菌肠毒素基因序列中分别选择并合成一对引物,其PCR扩增产物264Bp,293bp和292bp。对这三种菌的标准株,临床株及无关菌株的PCR测定及酶切鉴定,均显示良好的特异性。  相似文献   

4.
针对汉坦病毒(Hantanvirus,HV)中国代表株(A9、R22)M基因片段设计分型引物(Ⅰ、Ⅱ型),采用改进的异硫氰酸胍酚一步法(胍酚法)提取汉坦病毒RNA,套式RT-PCR检测稀释病毒上清,模拟病人血清和20例急性期(1~7d)血清样本。结果:能检测到模拟血清中少至几个PFU病毒RNA,敏感性5~10fg。检测过程可在5h内完成。20例急性期患者血清检测阳性率为100%,并能进行临床分型。扩增产物经打点杂交证实其特异性。而正常及非HFRS患者血清结果均为阴性。提示:套式RT-PCR基因诊断技术优于传统的MacELISA、IFAT和RPHI诊断法。  相似文献   

5.
W基因是利用周转神经髓鞘蛋白PMP-22基因的编码区5’-及3’-序列引物,藉PCR方法自人脑胶质瘤cDNA文库中扩增的一个基因片段,本实验研究W基因组织表达的特性性。方法搜集不同组织来源的肿瘤及正常脑组织标本,行RT-PCR及RNA斑点杂交检测。  相似文献   

6.
目的 建立一种新的快速纸层析杂交技术,用于特异性检测带有生物素标记的合酶链式反应(PCR)扩增产物。方法 将特异性捕获探针固定在聚酯砜膜上,扩增产物置膜一端,经毛细作用,带有生物素标记的特异性DNA分子固定于反应区,非特异性分子被洗脱,杂交物通过链霉亲和素硷性磷酸酶偶联物及底物(BCIP-NBT)显色后判断结果,结果 这一技术允许在25min内交将结核杆菌经PCR扩增后的DNA10pg检出,结论  相似文献   

7.
为确定原发性高血压患者是否存在氨苯喋啶敏感性钠通道(Amiloridesensitivesodiumchannel,ASSC)β亚单位基因第12外显子DNA片段突变,本研究采用PCR-SSCP技术对148例确诊型高血压病患者的ASSCβ亚单位基因第12外显子进行了分析。结果在原发性高血压患者中检出了3例有ASSCβ亚单位基因第12外显子突变的个体。提示原发性高血压的发生与ASSCβ亚单位基因第12外显子突变有关,它可能是原发性高血压发生的分子基础之一。  相似文献   

8.
目的 探讨血管紧张素Ⅱ1型受体基因(AT1R基因)A/C^1166多态性与高血压病并发脑梗死的关系,评价AT1R基因以及10余种侯选危险因素对高血压病人群脑梗死发生的危险贡献。方法 随机收集高血压病例240例,按合并脑梗死的无分为两组,采集临床病史资料,留取血标本进行临床生化指标检验和AT1R基因分析。基因分析采用PCR-ASO点杂交法。结果 ①240例病例AT1R基因的检测,未发现CC型,两种基  相似文献   

9.
表皮生长因子受体 (Epidermalgrowthfactorreceptor ,EGFR)及其相关配体表皮生长因子 (Epidermalgrowthfac tor ,EGF)和转化生长因子α(Transforminggrowthfactoral pha,TGF浕)是细胞信号传导系统的一部分。研究表明 ,EGFR基因的拷贝数增加或过度表达 ,均能促进正常细胞的增殖、转化与恶性肿瘤细胞的生长和转移。pS2蛋白作为一种雌激素调节蛋白 ,其表达不但受雌激素调节 ,同时也受EGF、TGF浕等因子的影响。本研究采用免疫组化技术 ,…  相似文献   

10.
运用单克隆抗E-cad、a-cat和p53蛋白抗体及免疫组化方法检测了69例早期胃癌标本。结果显示,E-cad及a-cat表达减弱率分别为53.6%和65.2%,p53蛋白阳性率为27.5%。E-cad及a-cat的表达显著相关,而p53的表达与E-cad或α-cat表达无关。粘膜下癌α-cat减弱表达及p53蛋白阳性表达者淋巴结转移率较高;而α-cat保留表达及p53蛋白阴性表达者无论是粘膜内或粘膜下癌,未见淋巴结转移。提示结合α-cat及p53蛋白表达,可协助诊断早期胃癌淋巴结转移。  相似文献   

11.
研究白细胞介素2转基因乳腺癌组织在小鼠体内成瘤性。方法 用感染法将人IL-2基因体外导入乳腺癌细胞系4T1。转基因细胞4T1-IL=2培养上清内IL-2分泌量,DNA,RNA分别ELISA,Southern杂交及逆转录PCR法分析。体内实验将动物区分4T1,RT1/IL-2混合接种或单独接种三组。  相似文献   

12.
目的 利用PCR介导的半酶促半化学法人工合成经改造的广谱细胞生长因子基因。方法 将基因依据其限制性内切酶切点分为左中右三个区段。化学合成若干寡核苷酸小片段,利用PCR的方法介导寡核苷酸小片段之间的连接。最后将三条基因区段基因区段组合为完整的基因。结果 各区段及全基因的序列经测定与设计方案相符。结论 广谱细胞茵子基因的成功合成为将来的表达与应用研究创造了条件,同时证明PCR介导的人工基因合成法是一种  相似文献   

13.
内皮素受体基因在冠心病患者外周血中表达及意义   总被引:1,自引:0,他引:1  
目的 研究内皮素受体基因(endothelin receptor gene A,ETA)在冠心病患者外周血中的表达情况,探讨其临床意义,并建立外周血ETA基因的RT-PCR检测方法。方法 应用RT-PCR技术检测外周血循环中ETA基因表达水平。结果 35例冠心病患者中有30例出现阳性条带,阳性率为85%。对照组20例中有16例阳性,阳性率为80%。对两组中出现的阳性条带应用义作半定量分析,冠心病患  相似文献   

14.
探讨NIDDM病人血管病与血浆内皮素、6-酮-前列环素F1α、血栓素B2的关系。方法应用放射免疫法测定NIDDM病人血浆ET、TXB2、6-K-PGF1α的变化。结论血浆ET、TXB2、6-K-PGF1αR NTYOSK RC JMDYMW HC XLEQ 程度,提示可能存在糖尿病血管并发症。  相似文献   

15.
运用核酸杂交和聚合酶链式反应(PCR)对临床确诊的61份子宫颈癌Ⅱ~Ⅲ期标本进行了人乳头瘤病毒(HPV)16型E7基因的检测。非同位素地高辛标记探针斑点杂交阳性检出率为45.9%,PCR检测阳性率为54.1%,两种检测结果证实HPV-16型感染与子宫颈癌的发生密切相关。进一步用灵敏的单链构象多态性分析法(SSCP)对33例阳性标本进行分析,发现有27例单链DNA迁移率与正常对照有不同,推测均发生了DNA序列的改变,提示HPV-16E7基因的变异在子宫颈癌组织中是较常见的现象,其与子宫颈癌的发生有一定的关系。  相似文献   

16.
PCR技术对两个Huntington舞蹈病家系的遗传学分析   总被引:1,自引:0,他引:1  
本文对两个Huntington舞蹈病家系进行调查并应用PCR技术作了基因检测,所用引物5’-CT-GTGGGACCTCGGCTAAGC-3‘及5’-GTCAGCACCTCAGACCAGAG-3‘,合成了PYNZ-32标志基因,经多态性连锁分析提示它对国人Huntington舞蹈病进行基因检测和临床应用具有可能性。  相似文献   

17.
应用聚合酶链反应技术(PCR)检测54份子宫颈癌活检标本中人乳头瘤病毒16型(HPV-16)E7转化基因的存在情况,结果显示阳性率为72.2%(39/54)。HPV-16E7转化基因在人子宫颈癌组织中的高检出率,证实该转化基因与其发生关系密切。本研究同时证明,PCR方法具有敏感、特异、快速和实用特点,值得推广。  相似文献   

18.
观察了31例早期复极综合症(EarlyrePolarizationsyndrome,ERS)A29例正常对照组·C率变异(Heartratevariability,HRV)五个时域指标的改变。结果发现,ERS组相邻正常R-R问期差值的均万根GequarerootdthemeansquareddifferencesdSue-cessiveNNintervals,rMSSD)及相邻W常R-R问期至值大于50msi6数占总R-R间期数的百分比(ProPortionofNN intervalgreaterthan50ms,PNNs。)较对照增高,其余指标无明显差异。提示ERS存在到交感神经活性增高。ERS·O率变异的特征性改变对于该症的诊断及鉴别诊断具有一定意义。  相似文献   

19.
目的构建pEGFP-N1-TNFα重组质粒并鉴定,为转导CIK细胞并定位表达奠定基础。方法以pMD19Sim-ple T-TNFα为模板,PCR扩增TNFαCDS区片段,将PCR产物进行15g/L琼脂糖凝胶电泳,并回收TNFα条带,用BglⅡ和HindⅢ将TNFα的PCR片段及目的载体pEGFP-N1双酶切,然后进行连接。连接产物转化至DH5α中。挑取克隆,提质粒,进行鉴定。结果 PCR扩增片段、双酶切出现722bp大小的目的基因条带与预期结果相符;插入片断测序结果与合成的寡核苷酸序列一致。结论成功构建了重组质粒pEGFP-N1-TNFα,为下一步用纳米材料转染CIK细胞的研究奠定了基础。  相似文献   

20.
Desmin基因exon6 A360P错义突变与克山病的关系   总被引:1,自引:0,他引:1  
目的探讨Desmin基因exon6的A360P错义突变与克山病心肌损伤发生发展的关系。方法采用临床流行病学方法调查,随机抽取年龄、性别相匹配的慢型和潜在型克山病患者、病区正常组和非病区正常组各30例血样,提取基因组DNA,采用PCR扩增、酶切、电泳等技术比较各组Desmin基因片断酶切位点的变化。结果慢型和潜在型克山病患者与病区正常组未检出Desmin基因exon6的A360P错义突变位点。结论Desmin基因exon6的A360P错义突变可能不是克山病心肌损伤的易感基因突变。  相似文献   

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