高压静电场对体外培养癌细胞增殖的影响

研究高压静电场（high—voltage electrostatic field,HVEF）影响癌细胞增殖的量效和时程关系．量效实验以不同强度的高压静电场作用于体外培养的人肝癌细胞SMMC7721,用MTY比色法检测电场作用效果,并找出最适电压;时程实验用台盼兰排斥法比较电场作用次数对细胞增殖的影响,并用流式细胞仪检测抑制效果．高压静电场处理后,各实验组细胞生长受到不同程度的抑制．U=2．5kV时,细胞增殖活性降低最显著（P〈0．01）,并且随作用次数增多,电场对细胞增殖的抑制效果增强（P〈0．01）．一定强度的高压静电场作用能够有效抑制癌细胞增殖．     

高压静电场治疗腹水瘤小鼠实验研究

初步探讨高压静电场(high-voltage electrostatic field, HVEF)对动物体内肿瘤的治疗效果.用不同强度高压静电场治疗腹水瘤C57BL/6小鼠,记录小鼠生存时间,计算生存概率,应用Kaplan-Meier氏方法绘制生存分析曲线.结果表明,不同强度静电场对荷瘤小鼠生存状况有不同影响. 电压为10kV和23kV的静电场对小鼠无治疗作用;电压为30kV时,电场的治疗作用不明显(P>0.05);而17kV组,小鼠存活时间明显延长(P<0.05). 高压静电场能够改善荷瘤小鼠生存状况,并且存在一定阈值,适宜强度的静电场能够有效延长荷瘤小鼠的生存期.     

高压静电场对丝裂霉素C抗癌作用的协同效应

以体外培养的人肝癌细胞SMMC7721和小鼠Lewis肺癌细胞为靶细胞,采用MTT比色法分别检测HVEF和MMC单独使用及联合应用对癌细胞增殖的抑制效果,并根据抑制率判定协同效应,从而探讨高压静电场(HVEF)与丝裂霉素C(MMC)联合应用对癌细胞生长是否具有协同抑制作用.结果表明:经HVEF与MMC联合作用后,两种癌细胞的增殖活性均低于单独使用MMC组,人肝癌细胞SMMC7721下降了20%～38%(P＜0.01),小鼠Lgwis肺癌细胞下降了7%～15%(P＜0.01),且两种方法具有协同效应,说明一定强度的高压静电场能够增强丝裂霉素C的抗癌作用.     

高压静电场对丝裂霉素C抗癌作用的协同效应

以体外培养的人肝癌细胞SMMC7721和小鼠Lewis肺癌细胞为靶细胞,采用MTT比色法分别检测HVEF和MMC单独使用及联合应用对癌细胞增殖的抑制效果,并根据抑制率判定协同效应,从而探讨高压静电场（HVEF）与丝裂霉素C（MMC）联合应用对癌细胞生长是否具有协同抑制作用.结果表明：经HVEF与MMC联合作用后,两种癌细胞的增殖活性均低于单独使用MMC组,人肝癌细胞SMMC7721下降了20%~38%（P〈0.01）,小鼠Lewis肺癌细胞下降了7%~15%（P〈0.01）,且两种方法具有协同效应,说明一定强度的高压静电场能够增强丝裂霉素C的抗癌作用.     

饱和脂肪酸对胰岛β细胞凋亡和细胞周期进程的影响

目的 探讨饱和脂肪酸棕榈酸(palmitate acids, PA)对MIN6胰岛β细胞生长、增殖及凋亡的影响,研究诱导MIN6细胞凋亡,抑制细胞周期进程的可能细胞分子机制.方法 采用MTT法检测细胞活力,流式细胞仪测定细胞周期,Annexin-Ⅴ/FITC/PI双标记流式细胞术检测细胞凋亡.应用Western blot检测细胞周期相关蛋白cyclin D1和CDK4的表达水平,以及抗凋亡蛋白家族(IAP)XIAP和cIAP-2的表达水平.结果 和对照组相比:①不同浓度PA显著抑制MIN6细胞增殖(P<0.01);②不同浓度PA作用均呈时间与剂量依赖性诱导MIN6细胞凋亡(P<0.01);③PA亦能显著抑制细胞周期进程,使MIN6细胞周期更多滞留在G0/G1期(P<0.01),G2/M期与S期细胞比例降低(P<0.01);④用Western blot检测发现:和对照组相比,PA降低磷酸化AKT、XIAP和cIAP-2的表达水平(P<0.01),以及降低细胞周期蛋白CDK4、cyclin D1(P<0.01)的表达水平.结论 PA能抑制胰岛β细胞的生长、增殖和诱导凋亡,可能是通过降低cyclin D1和CDK4活性,使细胞滞留在G0/G1期,抑制细胞周期进程,影响其复制;同时降低抗凋亡蛋白XIAP和cIAP-2的活性,促使细胞的凋亡.     

血红素加氧酶-1基因修饰的骨髓间质干细胞抑制肺动脉平滑肌细胞增殖的实验研究

目的 探讨骨髓间质干细胞携带的血红素加氧酶-1(HO-1)基因于体外共培养体系中抑制肺动脉平滑肌细胞增殖的效果及机制.方法 采用核转染技术将HO-1质粒转染至骨髓间质干细胞,共培养肺动脉平滑肌细胞和骨髓间质干细胞,评估5-羟色胺刺激后的平滑肌细胞增殖情况,检测5-羟色胺刺激后平滑肌细胞中RhoA的活性.结果 5-羟色胺可刺激肺动脉平滑肌细胞增殖,使单纯培养的平滑肌细胞总数较对照组增加2.40倍(P<0.01).野生型骨髓间质干细胞与肺动脉平滑肌细胞共培养并不能抑制平滑肌细胞的增殖,而携带HO-1基因的干细胞则可明显抑制5-羟色胺刺激的平滑肌细胞增殖,使平滑肌细胞总数降至对照组的1.56倍(P<0.05);5-羟色胺可引起肺动脉平滑肌细胞中RhoA活性增加2.90倍,野生型干细胞与肺动脉平滑肌细胞共培养并未能改变5-羟色胺刺激的RhoA激活,但在携带HO-1基因的干细胞共培养体系中5-羟色胺诱发的RhoA活性明显降低.结论 骨髓间质干细胞携带的HO-1基因可以旁分泌的形式抑制平滑肌细胞的增殖,其作用的机制可能与其产生的CO通过激活cGMP信号通路进而抑制RhoA的激活有关.HO-1可作为外源基因导入体内治疗肺动脉高压.     

aptamer-siRNA核酸复合物对K562细胞凋亡的促进作用

目的观察aptamer-siRNA核酸复合物对人慢性粒细胞白血病(CML)细胞株K562细胞凋亡的影响,并探讨其作用机制。方法使用不同浓度的aptamer-siRNA溶液转染K562细胞,噻唑蓝(MTT)法检测aptamer-siRNA对K562细胞增殖的影响,AnnexinV/PI双染法检测aptamer-siRNA对K562细胞凋亡的影响,Western blot和RT-PCR法检测aptamer-siRNA对K562细胞bcl-2、Bax和caspase-3蛋白及mRNA表达的影响。结果与对照组相比,转染aptamer-siRNA后K562细胞增殖受到明显抑制,K562细胞的早期凋亡率明显增加,细胞中bcl-2蛋白和mRNA的表达水平明显降低,Bax和caspase-3蛋白和mRNA的表达水平明显升高,差异均具有统计学意义(P<0.05)。aptamersiRNA核酸复合物浓度(50~250μmol/L)对bcl-2、Bax和caspase-3 mRNA的影响具有明显的量效关系。结论aptamer-siRNA核酸复合物能够通过促使bcl-2基因减少和Bax、caspase-3基因增长,进而促进K562细胞凋亡。     

shRNA干扰LGR5对HeLa细胞增殖及耐药性的影响

目的探讨富含亮氨酸重复序列G-蛋白偶联受体5(LGR5)基因在HeLa细胞增殖及耐药性中的作用及可能机制。方法采用shRNA技术干扰LGR5表达,构建LGR5干扰(shLGR5)的HeLa细胞,并设对照组(shCon)。采用细胞计数、平板克隆以及MTT实验观察shLGR5对HeLa细胞增殖及耐药性的影响;采用Western blot检测LGR5、β-catenin在HeLa细胞中的表达。结果成功构建了LGR5干扰的HeLa细胞系;与shCon组相比,shLGR5组细胞生长速度及克隆形成率明显降低,差异具有统计学意义(P<0.01);shLGR5组与shCon组HeLa细胞对顺铂的耐药性差异亦具有统计学意义(P<0.01);且干扰LGR5抑制HeLa细胞中β-catenin蛋白的表达。结论 LGR5基因在HeLa细胞增殖及耐药性中有重要作用,且与Wnt/β-catenin通路有关。     

蜂斗菜素诱导骨髓瘤RPMI 8226细胞凋亡及其机制

目的观察蜂斗菜素对骨髓瘤RPMI 8226细胞凋亡的影响,并探讨其作用机制。方法采用锥虫蓝拒染法检测蜂斗菜素对RPMI 8226细胞的增殖抑制作用,TUNEL法检测蜂斗菜素诱导的RPMIS226细胞凋亡,Hochest33258荧光染色法观察细胞核的变化,Western blot技术检测Caspase-3、8、9蛋白表达和MEK/ERK、p38MAPK蛋白磷酸化水平。结果蜂斗菜素作用24、48、72h后对骨髓瘤RPMI 8226细胞均有显著的增殖抑制作用(P均<0.01);蜂斗菜素呈时间和浓度依赖地诱导骨髓瘤RPMI 8226细胞凋亡(P<0.05,P<0.05),Caspase抑制剂预处理可明显抑制细胞凋亡;蜂斗菜素作用72h后,Caspase-3、8、9蛋白表达显著增加(P<0.05,P<0.01,P<0.05),ERK1/2及MEK蛋白磷酸化水平显著下降(P<0.01,P<0.05),p38MAPK蛋白磷酸化水平显著上升(P<0.01)。结论蜂斗菜素能够抑制骨髓瘤RPMI 8226细胞增殖,诱导细胞凋亡,其机制可能与Caspase-3、8、9蛋白激活,ERK/MEK及p38MAPK蛋白磷酸化改变有关。     

白术对小鼠移植性肉瘤S180的抑瘤作用及对Bcl-2基因表达的影响

目的 探讨白术对小鼠S180肉瘤的抑制作用及对肿瘤凋亡相关基因Bcl-2表达的影响.方法 昆明系小鼠60只,皮下注射S180细胞,同时分别给予白术、环磷酰胺处理小鼠,其后2周内测量各组肿瘤生长大小;采用RT-PCR法检测凋亡抑制基因Bcl-2的表达.结果 白术组的肿瘤重量低于模型组而大于环磷酰胺组(P均<0.05),但白术抑制肿瘤生长的作用强度未呈现量效关系,且其抑瘤率不及环磷酰胺(P<0.05);与对照组相比,白术能显著抑制肿瘤Bcl-2基因的表达水平(P<0.05).结论 白术具有抑制肿瘤生长的作用,可作为肿瘤治疗的辅助药物.