肝细胞肝癌患者的血清蛋白质组学研究

目的分析肝细胞肝癌患者的血清蛋白质谱,寻找诊断肝癌和检测治疗的特异性标志物。方法收集了50例肝癌患者血清,在去除血清中6种高丰度蛋白后进行双向凝胶电泳分离及银染,将凝胶扫描图像与正常人血清比较分析,然后经质谱鉴定20个差异表达蛋白质点。结果共鉴定了11种差异表达蛋白质,其中7种蛋白质在肝癌患者血清中表达水平上调,其余4种蛋白质表达水平下调。有7个点被同时鉴定为α1-抗胰蛋白酶,均在肝癌患者血清中表达上调,提示α1-抗胰蛋白酶在肝癌中降解加快。Western blotting检测进一步证实多数肝癌血清中的α1-抗胰蛋白酶小片段增多。结论血清是诊断肝癌和检测治疗非常重要的临床标本,本实验中鉴定的蛋白质虽不能作为临床诊断标志物,但对分析肝癌血清蛋白谱的改变有一定的参考价值。     

肿瘤间质灌注液蛋白质组学研究

目的 探讨肿瘤间质灌注液蛋白质组作为分析肿瘤组织中细胞微环境蛋白质组的可能性.方法 应用PBS液孵育新鲜肿瘤组织,提取肿瘤间质灌注液中的总蛋白,并应用蛋白质组学技术对其进行分析研究.结果 应用双向电泳、质谱和生物信息技术成功分离并鉴定出肿瘤间质灌注液中的蛋白成分;在肿瘤间质灌注液中发现肿瘤分泌蛋白Profilin-1.结论 肿瘤间质灌注液蛋白质组学研究为研究肿瘤组织中细胞微环境蛋白质组提供了新的研究方案.     

滋养细胞肿瘤对甲状腺功能的影响

４６例滋养细胞肿瘤病人的甲功检测结果表明：１２例并发甲亢，其血清β－ＨＣＧ、Ｔ４、Ｔ３、ＦＴ４Ｉ增高，Ｔ３／Ｔ４下降，Ｔ３Ｕ、ＴＳＨ保持正常。β－ＨＣＧ水平与Ｔ３、Ｔ４、ＦＴ４Ｉ呈正相关。β－ＨＣＧ＞２０００ＩＵ／Ｌ６例，５例为甲亢；２例有甲亢症状者，β－ＨＣＧ均＞１００００ＩＵ／Ｌ。ＨＣＧ具有弱的促甲状腺素（ＴＳＨ）作用，可能是该肿瘤并发甲亢的原因。葡萄胎清宫后、恶葡及绒癌有效化疗后，甲亢症状消失，甲功恢复正常。     

丙型肝炎患者血清蛋白质组差异表达的初步研究

目的观察丙型肝炎病毒(HCV)患者血清蛋白质组的变化情况,为研究丙型肝炎的发病机制及治疗提供新的线索。方法收集丙型肝炎患者和健康对照者血清,去除血清中高丰度蛋白;应用双向凝胶电泳技术构建2组研究对象血清二维电泳图谱,Image Master软件分析所得图谱,寻找差异蛋白质点;基质辅助激光解吸电离-飞行时间质谱法对2组间比较所得目标蛋白质点进行质谱鉴定。结果获得了HCV患者血清蛋白质双向电泳图谱,对表达差异2倍以上进行质谱鉴定,共鉴定出15种蛋白质。结论成功鉴定了15个HCV相关蛋白质,为进一步研究其发病机制及治疗手段提供了实验基础。     

应用激光捕获显微切割技术制备肺癌蛋白质组学研究样品

目的探讨应用激光捕获显微切割(laser capture microdissection,LCM)技术获取高同质性肺癌组织细胞及正常对照肺泡上皮细胞的方法及可行性。方法将新鲜肺癌组织标本及其配对正常组织常规制备8μm冰冻切片,采用改良的HE方法染色;应用LCM技术大宗切割肺鳞癌、腺癌及正常对照肺泡上皮细胞;选择性获取同质肺癌细胞和配对正常细胞。结果通过LCM技术可以准确、快速地分离癌细胞、间质及其他坏死组织,得到同质性不低于95%的肿瘤细胞和正常细胞。按照Duration 15.5 s的激光脉冲频率和平均8 000 shots条件,既可保证每个帽子的细胞收集数量,也能够有效地缩短实验时间,提高实验可控性,从而使操作过程标准化。结论应用LCM技术可以成功获取同质肺癌细胞和正常细胞。其所需标本量少、组织同质性高、操作过程稳定、可控性好,是肺癌分子生物学及蛋白质组学研究有价值的样品制备方法。     

细胞周期素E与甲状腺肿瘤的关系

目的　检测甲状腺肿瘤组织中CyclinE和PCNA的表达 ,探讨CyclinE与肿瘤发生及恶性程度的关系。方法　利用免疫组织化学技术分析 17例甲状腺腺瘤、43例甲状腺癌及 19例瘤旁“正常”组织中的CyclinE及PCNA的表达。结果　CyclinE及PCNA在“正常”组织与甲状腺腺瘤组织中表达无显著性差异 ;CyclinE及PCNA在甲状腺癌中的表达显著高于“正常”组织和甲状腺腺瘤组织 ,且随肿瘤恶性程度的增加而增加 ;CyclinE和PCNA的表达在“正常”组织、甲状腺腺瘤和甲状腺癌组织中均呈正相关。结论　CyclinE的表达可以作为诊断甲状腺癌及预测肿瘤恶性程度的指标。     

NLCM纯化的不同分化程度贲门腺癌细胞差异蛋白质组学研究

目的联合导向激光捕获显微切割技术(NLCM)及蛋白质组学技术比较分析高分化贲门腺癌细胞和低分化贲门腺癌细胞的蛋白质表达图谱差异,寻找与贲门腺癌恶性程度和预后有关的分子标志物。方法应用导向激光捕获显微切割技术分别获取高分化和低分化贲门腺癌细胞,提取蛋白质,应用双向凝胶电泳(2-DE)技术分离蛋白质,选定差异点,胶内酶解后,用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱技术(MALDI-TOF MS)鉴定差异蛋白质,并用免疫组化方法验证差异蛋白的表达。结果 1NLCM分别分离纯化了高分化和低分化贲门腺癌细胞;2建立了高分化和低分化贲门腺癌细胞的蛋白质表达图谱,两组分别检测到(846±52)个和(923±84)个蛋白质点,两组的匹配率为85.4%;3对高分化和低分化的贲门腺癌蛋白质表达谱进行比较分析,鉴定出10种差异蛋白,其中6个蛋白质在低分化贲门腺癌细胞中表达上调,4个蛋白质在低分化贲门腺癌细胞中表达下调;4差异蛋白质涉及细胞间信号转导、细胞代谢、凋亡及迁移等;5进一步通过免疫组化方法验证了差异蛋白HSP27的表达与蛋白质组学研究结果一致。结论高分化和低分化贲门腺癌间存在蛋白质表达的差异,这些差异表达的蛋白质可能与贲门腺癌的恶性程度和预后有关。     

血浆铜蓝蛋白在甲状腺肿瘤中的鉴别诊断意义

为了探讨血浆铜蓝蛋白在甲状腺良恶性肿瘤中的鉴别诊断价值，应用免疫组织化学的方法检测了８６例甲状腺肿瘤及肿瘤样病变的ＣＰ表达，发现所有的滤泡性腺癌和９５％的乳头状腺癌表现有ＣＰ的免疫阳性反应，而良性甲状腺肿瘤和肿瘤样病变中除１例嗜酸性细胞腺癌外，均未发现有ＣＰ的免疫染色。提示ＣＰ在甲状腺癌的生长、代谢过程中起重要作用，它可能成为甲状腺癌的标志物，对甲状腺癌的标志物，对甲状腺良恶性肿瘤的鉴别诊断具有重     

肿瘤miRNAs调控机制的研究进展与展望

微小RNA(micro RNAs,miRNAs)是一类不同于mRNA的非蛋白编码的小RNA,其通过结合靶mRNA的3′非翻译区(3′untranslated region,3′UTR),抑制靶mRNA的翻译或降解靶mRNA。miRNA在肿瘤发生、生长、迁移与侵袭过程中发挥了重要作用。miRNA的调控与其在肿瘤中的功能密切相关。竞争性内源性RNA(competing endogenous RNA,ceRNA)、环状RNA(circular RNA,circRNA)及RNA结合蛋白(RNA binding protein,RBP)参与了miRNA靶基因的表达调控,可能是miRNA在不同肿瘤组织及细胞中功能多样化与复杂化的原因之一。研究miRNA在特定细胞中网络调控机制的新技术是未来的新方向。     

PtenL/LMEFs与Pten△/△MEFs细胞系的差异表达蛋白质组分析

目的研究PtenL/LMEFs与Pten△/△MEFs细胞的蛋白表达差异。方法运用双向电泳技术比较PtenL/LMEFs与Pten△/△MEFs细胞的蛋白表达差异,6个差异蛋白进行胶内酶切后运用基质辅助激光解吸/电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)进行质谱分析,肽质量指纹图谱检索数据库后5个蛋白得到鉴定。结果同对照PTEN野生型细胞PtenL/LMEFs相比,磷酸甘油酸变位酶1(phosphoglycerate mutase 1,PGAM1)和肽脯氨酰顺反异构酶C(pepti-dyl-prolyl cis-trans isomerase C,cyclophilin C)在Pten△/△MEFs细胞中表达上调而Transgelin 2蛋白在Pten△/△MEFs细胞中表达下调。经鉴定已知蛋白点B和F都是过氧化物氧化还原酶6(Peroxiredoxin-6),蛋白点B在Pten△/△MEFs细胞中表达而在Pten△/△MEFs细胞中检测不到,蛋白点B和F的分子质量相似而等电点不同,可能是由于翻译后修饰。结论同对照PTEN野生型细胞PtenL/LMEFs相比,PTEN缺失的Pten△/△MEFs细胞有明显的差异性蛋白表达谱。PTEN的缺失引起细胞内多种蛋白表达改变,这些表达改变的蛋白可能与PTEN缺失后细胞癌变相关。     

494例甲状腺癌分布特征及诊断方法评价

目的　研究我省甲状腺癌的分布、诊断、治疗状况 ,评价其诊断方法并为该病生存分析提供基础资料。方法　收集 1 985年 1月至 1 999年 4月两所省级及医学院附属医院全部住院治疗的甲状腺癌病患者 494例及部分良性甲状腺肿瘤患者 2 2 3例的临床资料。结果　 494例甲状腺癌患者中以乳头状癌最多占 6 1 5 % ,其他组织类型依次为滤泡状癌 (2 3 1 % ) ,未分化癌(8 9% ) ,髓样癌 (6 5 % )。甲状腺癌发病年龄较其他癌偏低 ,除未分化癌其他均女性高于男性。以病理检查结果为标准评价细针穿吸及同位素检查 ,前者灵敏度为 85 2 % ,特异度为 85 7% ;后者灵敏度为 87 8% ,特异度为 2 5 0 %。结论　甲状腺癌在本省的分布与以往资料相似。细针穿吸法灵敏度和特异度均较高 ,而同位素法灵敏度与细针穿吸法相近 ,特异度较低。     

碘与自身免疫性甲状腺疾病发病的关系

目的了解目前陕西地区自身免疫性甲状腺疾病(AITD)患者碘的营养状况,初步探讨人体内碘的代谢状况与AITD发生、发展的关系。方法收集病例388例,其中AITD患者283例,非AITD对照105例。进行问卷调查,了解研究对象的一般情况;记录甲状腺的大小、形态、质地等情况;测定尿碘浓度、甲状腺功能以及甲状腺自身抗体。应用SPSS12.0进行数据处理。结果研究人群中Grave s病(GD)组的尿碘中位数是212μg/L,桥本甲状腺炎(HT)组是245.4μg/L,对照组是197.8μg/L,三组的尿碘分布有统计学差异。HT组患者在不同的尿碘水平上,血清甲状腺球蛋白抗体(TGAb)、甲状腺微粒体抗体(TMAb)以及高敏促甲状腺激素(HS-TSH)水平的差别无统计学差异。结论在AITD患者中存在饮食碘过多的问题,此可能在AITD的发病中起作用。     

甲状腺癌生存率及其影响因素

目的　对甲状腺癌患者生存率及其影响因素进行分析 ,以期为提高甲状腺癌的诊疗水平和延长病人的生存时间提供依据。方法　对 89例甲状腺癌患者进行统一问卷调查 ,采用寿命表法计算生存率 ,并采用Cox回归进行影响因素分析。结果　甲状腺癌 5年和 1 0年生存率乳头状 ,滤泡状 ,髓样和未分化癌分别为 93 3% ,87 7% ;80 0 % ,80 0 % ;1 0 0 0 % ,80 0 % ;30 0 % ,30 0 %。排除了混杂因素作用后 ,影响甲状腺癌预后的因素按其重要性大小依次为 :病理类型、城乡、性别、有无淋巴结转移和年龄。结论　甲状腺癌的生存率较高 ,影响其生存率的主要因素为病理类型、城乡、性别、有无淋巴结转移及年龄。     

~(99m)Tc-MIBI甲状腺癌阳性显像

目的　研究99mTc -MIBI三相显像对甲状腺癌的定性诊断价值。方法　将 1 5 0例受检者分甲状腺癌 ( 5 8例 )和甲状腺良性结节 ( 92例 )两组 ,以患侧 /健侧摄取比值 (UR)为定量指标 ,观察其 5min和 60min摄取比值变化。结果　甲状腺癌组动脉血流灌注异常增高占 74 1 3% ,而良性结节组仅为 31 .5 2 % ;甲状腺癌组 5min和 60minUR值分别为 1 86± 0 65和 1 63±0 49,而良性结节组分别为 0 81 3± 0 1 8和 0 82 7± 0 1 6,两组两时相UR值比较均有显著性差异 (P <0 0 1 )。结论　99mTc MIBI三相显像对甲状癌的定性诊断具有较高价值。     

甲状腺癌患者血清中SIL-2R测定的临床意义

测定 59例甲状腺良、恶性疾病患者血清中可溶性白介素 受体 (SIL- 2 R)。结果显示 :甲状腺癌患者血清中 SIL- 2 R明显高于良性疾病组及对照组 (P <0 .0 1 )。良性腺瘤及结节性甲状腺肿与对照组间无明显差异 (P >0 .0 5)。甲状腺癌术后 5～ 1 0 d血清中 SIL- 2 R较术前增高 ,可能与术前血清中 SIL- 2 R高水平及手术干扰机体免疫有关。术后约 2 0 d基本降至正常。甲状腺癌血清中 SIL- 2 R升高与甲状腺癌的病理类型无明显关系。提示检测血清中 SIL- 2 R对判别甲状腺疾病良、恶性 ,估计疗效及预后有一定临床意义     

Using cell membrane chromatography and HPLC-TOF/MS method for in vivo study of active components from roots of Aconitu

An offline two-dimensional system combining a rat cardiac mascle cell membrane chromatography time-of-flight mass spectrometry （CMC-TOF/MS） with a high performance liquid chromatography time-of-flight mass spectrometry （HPLC-TOF/MS） was established for in     

过氧化物酶抗体诊断自身免疫甲状腺疾病临床价值的探讨

目的 通过比较自身免疫甲状腺疾病(ATD)患者血清中过氧化物酶抗体(TPO-Ab)和甲状腺微粒体抗体(TMAb)水平,探讨测定TPO-Ab的临床价值。方法 采用放射免疫法同步测定200例ATD、50例非ATD、30例健康对照血清中甲状腺过氧化物酶抗体和甲状腺微粒体抗体的浓度。结果 ①ATD患者血清中TPO-Ab浓度显著升高(P＜0.01)。②桥本甲状腺炎患者甲功的变化与体内TPO-Ab浓度有关,可在一定程度上提示ATD的预后。③TPO-Ab浓度的变化与TMAb变化一致(r=0.83,P＜0.01),但用TPO-Ab作为诊断桥本甲状腺炎的指标较TMAb更具敏感性和特异性(P＜0.01)。结论 测定TPOAb是诊断自身免疫甲状腺疾病敏感、特异的指标。     

小细胞肺癌及其配对的正常肺组织差异表达蛋白质的双相电泳-飞行时间质谱研究

目的应用比较蛋白质组学方法分析小细胞肺癌(SCLC)与其配对的正常肺组织差异表达蛋白质,为阐明SCLC发病机制、筛选其早期诊断标志物提供有益的思路。方法应用双相电泳(2-DE)分离6例SCLC及其配对的正常肺组织可溶性总蛋白;应用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)获得差异蛋白点的肽质量指纹图谱(PMF);通过Mascot软件查询NCBI或SWISS-PROT数据库鉴定蛋白质。结果每张图谱约检测到800多个蛋白质点。经匹配分析,肺癌组织之间和正常肺组织之间凝胶图像的匹配率分别为75.5%和78.2%;选择14个背景清晰、重复性及分辨率较好、蛋白表达差异明显的点进行质谱分析,结合表观分子量及等电点(pI),初步鉴定了11种(六类)蛋白质:①与蛋白质降解通路有关的蛋白质:蛋白酶体α亚单位3型、蛋白酶体β亚单位2型及β亚单位5型;②自由基/抗氧化剂类:锰-超氧化物歧化酶(Mn-SOD)、过氧化氢酶(CAT)和黄素还原酶(FR);③细胞骨架类:原肌球蛋白-3(Tpm-3);④与能量代谢有关的蛋白质:硫氧还蛋白过氧化物酶(TPX1);⑤分子伴侣:抑制素(PHB),内质网蛋白ER29(Erp29);⑥其他:可溶性NSF黏附蛋白(alpha SNAP)。结论应用2-DE及MALDI-TOF-MS方法分离并初步鉴定了11种(六类)蛋白质;这些蛋白质与SCLC发生发展密切相关,部分可能成为SCLC诊断及治疗的分子靶点。     

实时超声弹性成像在鉴别诊断甲状腺结节性质中的价值

目的探讨超声实时弹性成像在鉴别诊断甲状腺结节中的应用价值。方法对123例患者二维超声检出的150个甲状腺结节行超声弹性成像检查;依据病理诊断结果对其进行弹性分级;0^Ⅱ级为良性,ⅢⅡ级为良性,Ⅲ^Ⅳ级为恶性。结果 1123例(150个甲状腺结节)中恶性20例,其中15个(15/20,75%)弹性分级为Ⅲ、Ⅳ级;良性103例,其中110个(110/130,84.6%)为0Ⅳ级为恶性。结果 1123例(150个甲状腺结节)中恶性20例,其中15个(15/20,75%)弹性分级为Ⅲ、Ⅳ级;良性103例,其中110个(110/130,84.6%)为0^Ⅱ级。2超声弹性成像诊断甲状腺良、恶性结节的敏感性、特异性、准确性分别为75%(15/20)、84.61%(110/130)、83.3%(125/150)。3依据病理诊断结果对本组123例甲状腺结节的弹性分级的诊断准确性进行比较,弹性分级Ⅲ级诊断恶性结节时ROC曲线下面积0.884,诊断准确性83.3%。结论超声弹性成像对甲状腺结节良恶性的鉴别诊断有较大的应用价值,综合常规超声表现有助于提高诊断。