哇巴因抗体制备的方法学研究

目的　探索合适的实验条件 ,制备高度特异性以及高效价的哇巴因抗体 ,促进国内对内源性哇巴因这种皮质类固醇激素的研究。方法　利用外源性哇巴因分别与牛血清白蛋白 (BSA)及卵清蛋白 (OVA)耦联 ,制备抗原免疫家兔 ,根据对兔免疫后动物体内抗体效价连续监测的结果来制定免疫方案 ,制备哇巴因抗血清 ,分别应用硫酸铵分段盐析法和DEAE D52 纤维素阴离子非保留色谱相配伍的方法纯化哇巴因抗体 ,并对该抗体进行特异性、亲和性及纯度测定。结果　所得抗体效价最高达 1∶(1× 1 0 6) ,亲和常数最高为 1 .59× 1 0 8,除了与地高辛存在 9.2 0 %～1 9.80 %的交叉结合反应外 ,与结构类似的其他几种物质 ,如强的松、安体舒通、西地兰、睾酮及地塞米松的交叉结合率均小于 5% ,SDS PAGE结果显示所得抗体为电泳纯。结论　应用本研究中所探索出的实验方法 ,获得了高特异性、高亲和性以及高效价的哇巴因抗体 ,可用于对内源性哇巴因的临床与实验研究。     

抗哇巴因多克隆抗体的制备及免疫周期和剂量的研究

制备抗哇巴因多克隆抗体 ,探讨最佳的免疫周期及免疫剂量。应用哇巴因 (ouabain) -牛血清白蛋白 (BSA)结合物为抗原免疫家兔 ,每周从兔耳缘静脉采血 ,监测哇巴因特异抗体的产生 ;以0 .2 5mg/次、1mg/次、1.75mg/次、2 mg/次四种不同免疫剂量进行最佳免疫剂量的研究。 5个月后颈动脉取血 ,进行抗体效价、亲和力及特异性的检测。结果显示免疫间隔为 6周、免疫剂量为 1.75mg/次时可以获得高效价、高亲和力和高特异性的哇巴因抗血清。     

哇巴因多克隆抗体对两肾一夹肾血管性高血压大鼠血流动力学的影响

为探讨哇巴因多克隆抗体的降压作用及哇巴因与高血压发病的关系 ,给“两肾一夹 +盐 ( 2 k1 c+盐 )”、“两肾一夹 ( 2 k1 c)”肾血管性高血压大鼠随机静注哇巴因多克隆抗体、硝普钠、正常兔免疫球蛋白 ( Ig G)及生理盐水 ,颈动脉插管观察注射后 3h内血压动态变化。结果表明 :哇巴因多克隆抗体对“两肾一夹 +盐”肾血管型高血压大鼠具有明显的降压作用 ,而对“两肾一夹”高血压模型降压作用不明显。正常兔免疫球蛋白对各种高血压模型均无降压作用。提示内源性哇巴因 ( EO)升高可能是高血压的发病因素之一 ;高盐引起血压升高的机制之一可能是通过刺激 EO的分泌增加。     

内源性哇巴因的研究与展望

围绕着“一种新的激素———内源性哇巴因(endogenous ouabain,EO)”,从“生物学特性和生理学研究”、“病理生理学和临床意义研究”、“检测方法”及“应用研究”四个方向展开对内源性哇巴因历时17年的系列研究,结果显示:EO是一种新的肾上腺皮质激素;EO的异常分泌与高血压等疾病的发生发展密切相关;对高EO的病理生理学作用的干预,有可能成为新的诊断和治疗方法。     

内源性哇巴因在大鼠体内的免疫组织化学定位研究

目的　探讨内源性哇巴因 (Endogenous ouabain,EO)在 SD大鼠体内的组织学定位。方法　采用高度特异的抗哇巴因兔血清 ,用免疫组织化学 ABC法观察 EO在大鼠体内的分布。结果　免疫组化染色显示在 SD大鼠的肾上腺皮质内侧网状带可以观察到丰富的哇巴因免疫反应阳性物质 ,垂体后叶有较弱的哇巴因免疫反应阳性物质 ,而下丘脑、肾脏、心肌等组织中并未发现有哇巴因免疫反应阳性物质存在。结论　表明 EO主要存在于 SD大鼠肾上腺皮质网状带 ,为 EO作为一种新的肾上腺皮质激素提供了形态学依据     

慢性盐缺乏、盐负荷对血清内源性哇巴因水平的影响

目的观察慢性盐缺乏和盐负荷对内源性哇巴因(EO)分泌的影响,探讨在慢性盐缺乏或盐负荷状态下EO对SD大鼠钠代谢和血压的调节作用。方法以含0.02%(低盐)、0.5%(普食)及8%(高盐)的普通加碘盐饲料喂养SD大鼠8周,原子吸收分光光度法检测尿液中钠离子、钾离子浓度,酶联免疫吸附法(ELISA)检测EO水平。结果高盐组SD大鼠血压较同期普食组和低盐组显著性升高(P<0.01)。高盐组24 h尿钠排泄量较普食组和低盐组显著增加(P<0.01)。高盐组24 h尿钾排泄量显著低于对照组和低盐组(P<0.01)。高盐组与普食组比较血清EO水平无统计学差异,低盐组于第4周开始血清EO水平高于普食组和高盐组,有统计学差异(P<0.01)。结论慢性盐缺乏时SD大鼠EO水平升高,提示其为慢性盐缺乏状态下维持血压的调节因子;而慢性盐负荷时血压明显升高,但未发现EO显著升高。     

正常SD大鼠血清及组织内源性哇巴因的含量及其意义

探讨正常 SD大鼠血清及组织内源性哇巴因 ( EO)的含量 ,为 EO生理及病理作用的进一步研究提供理论及实验依据。方法　制备高度特异性的哇巴因抗体 ,应用酶联免疫吸附试验 ( ELISA)的方法 ,对正常 SD大鼠血清及组织标本测定其 EO含量。结果　血清、肝脏、肾脏、肾上腺、垂体及下丘脑内 EO含量分别为 ( 1 .1 2± 0 .1 7) μg/ L、( 1 .79± 0 .44) μg/ kg组织、( 1 .0 8±0 .63)μg/ kg组织、( 1 .73± 0 .81 )μg/ kg组织、( 2 7.54± 6.91 )μg/ kg组织、( 1 .83± 0 .54)μg/ kg组织、( 1 0 .1 0± 3.0 8) μg/ kg组织。肾上腺内 EO含量明显高于其它组织及血清 EO含量。结论　确定了正常 SD大鼠血清及多种组织内源性哇巴因的含量 ,提示肾上腺有可能是 EO的主要来源     

肾小球疾病时内源性哇巴因水平的变化

目的　探讨内源性哇巴因 (EO)与肾小球疾病的关系。方法　采用酶标免疫吸附抗原包被竞争法检测 4 6例肾小球疾病患者及健康对照者血清EO浓度。结果　肾小球疾病患者的血清EO水平明显高于正常对照组 ,EO水平与肾小球疾病的病因、水肿、血尿及大量蛋白尿无关 ,与肾性高血压呈正相关 ,与肾功能减退呈负相关。结论　血清EO与肾小球疾病进展有关     

葎草花粉致敏蛋白多克隆抗体的制备及其在筛选致敏蛋白组分的应用

目的制备、鉴定兔抗葎草花粉蛋白多克隆抗体,并初步应用于葎草花粉致敏蛋白组分的筛选。方法用葎草花粉变应原浸液免疫兔,获得高效价抗葎草花粉蛋白抗血清,应用琼脂免疫双扩散、ELISA法以及Western blotting鉴定产生的抗体。同时对葎草花粉过敏性哮喘患者血清进行Western blotting检测。结果兔抗血清效价经ELISA检测,效价>1∶10000,免疫双扩散结果表明抗血清只与葎草花粉变应原形成特异性IgG沉淀线,Western blotting检测兔抗血清IgG可以特异性识别葎草花粉8种蛋白组分,分子质量分别为100、88、76、69、65、55、49、38 ku,患者血清IgG可以识别5种蛋白组分,分子质量分别为100、76、55、493、8 ku。结论制备的兔抗血清具有较高效价和较好的特异性,应用该血清筛选出的葎草花粉致敏蛋白组分与患者血清筛选的组分相似,因此可进一步应用于初筛cDNA表达文库。     

多发性骨髓瘤MMSA-1抗原的二级结构预测及多克隆抗体的制备

目的 运用生物信息学技术研究人多发性骨髓瘤MMSA-1(GenBank:AY952881)基因表达蛋白的二级结构和B细胞抗原表位,并制备多克隆抗体.方法 应用DNAStar Protean软件提供的模块分析和预测MMSA-1蛋白的二级结构和B细胞抗原表位.采用多通道同步固相全自动合成系统合成15肽,免疫健康新西兰成年家兔,制备相应的多克隆抗体.结果 MMSA-1蛋白含有较多的β折叠和转角结构.综合柔韧性、亲水性、抗原性、表面可能性、二级结构、偶联难易及实验难度等因素,选取了MMSA-1蛋白序列318～333位作为抗原表位,即SSSLLPQSPAPTEHL,15肽合成产物经HPLC纯化和质谱检测,纯度达到98.65%,序列正确.免疫兔子获得血清抗体采用层析柱纯化,ELISA检测效价:1∶6000.结论 本研究为基于人MMSA-1抗原表位手段的免疫治疗研究提供了理论依据.     

孕酮对正常生育和不明原因不育男性精子-仓鼠卵穿透试验的作用

目的　比较正常生育男性和不明原因男性不育症患者精子的受精能力及其对孕酮 (P)的反应性。方法　选择10例不明原因男性不育症患者和 10例正常生育男性 ,在上游后精子悬液中加入P 10 μmol·L -1,并体外获能 2h。采用超排卵法制备仓鼠卵细胞 ,将精子与卵子体外受精 3h后观察卵子受精率 (FR)与受精指数 (FI)。结果　上游后精子与P孵育能显著提高生育组的FR(P <0 .0 1) ,但不能增加不育组的FR ;生育组FR显著高于不育组FR(P <0 .0 0 1)。P能显著提高生育组的FI (P <0 .0 1) ,但不能增加不育组的FI;生育组FI显著高于不育组FI (P <0 .0 1)。结论　P能增强正常生育男性精子的受精能力 ;精子对孕酮的反应性降低可能是不明原因男性不育症的病因之一     

哇巴因对大鼠心脏内皮素系统表达的影响

目的探索哇巴因对大鼠心脏内皮素系统表达的影响。方法雄性SD大鼠随机分为哇巴因组和生理盐水对照组,每周测量收缩压,分别于实验24、、6周放免法测定两组大鼠血浆及心脏组织中内皮素的含量,并用免疫组化法检测大鼠左心室内皮素A、B两种受体的表达。结果大鼠腹腔注射哇巴因4周后收缩压开始上升,6周后哇巴因组大鼠血压与对照组相比有显著性差异。大鼠腹腔注射哇巴因2周后,血浆及心脏组织内皮素水平升高,4周时左心室内皮素A型受体表达增强,而B型受体的表达在整个实验过程中均无显著变化。结论哇巴因可以引起血浆及心脏组织中内皮素质量浓度增加,左心室内皮素A型受体表达增强,这种效应可能是其升高血压及损害靶器官的机制之一。     

公路施工准备阶段的测量工作探讨

近年来,公路建设快速向前发展.然而在我国山区高等级公路施工过程中,准备阶段的测量工作存在着种种不合理的现象,延误工程项目的施工进度,造成不必要的经济损失.对公路工程项目施工准备阶段的测量工作进行探讨,可为同类工程提供一定的参考.     

纳米铜粉的制备及保存

以硫酸铜为原料，水合肼为还原剂，在70℃左右，pH为11时反应合成了纳米铜粉；采用X射线衍射仪对铜粉进行了表征；讨论了制备条件对纳米铜粉的影响，研究了纳米铜粉在蒸馏水中及苯并三氮唑溶液中的保存．     

AR沥青隔离剂的制备及应用

介绍了乳液型AR沥青隔离剂的制备过程,以及室内、施工现场的应用情况。     

环境友好方法制备纳米氧化镁

以MgCl2·6H2O为原料,强碱性阴离子交换树脂作为致沉剂,采用离子交换树脂法制备了纳米MgO粉体．通过单因素实验探讨了MgCl2的起始浓度、反应温度、反应时间以及煅烧温度和时间对MgO粒径及物化性能的影响,用XRD、SEM、TEM对纳米MgO进行了表征,并考查了离子交换树脂的循环利用．结果表明,制备纳米MgO的最佳工艺条件为：MgCl2浓度为0．2mol／L,反应温度为50℃,反应时间8h,煅烧温度及时间为400℃煅烧6h;在最佳工艺条件下制备的纳米MgO具有规则的六方片状结构,平均粒径大小为10nm左右;离子交换树脂的再生对MgO的产率和形貌不产生影响．与其他制备纳米MgO的方法相比,该工艺成本低、污染小、产率较高,具有一定的环保效应,适宜于工业化生产．     

碳纤维增强铝基复合材料的制备及其拉伸性能

利用挤压铸造方法,采用三种不同的凝固条件,制备了连续长碳纤维增强铝基复合材料的拉伸试样,并对其拉伸性能进行了试验。试验结果表明,该复合材料的抗拉强度和弹性模量皆随碳纤维的体积含量增加而增加。含48％碳纤维的复合材料比基体材料的拉伸强度高50％以上,但塑性指标随碳纤维含量的增加而显降低,当连续碳纤维的体积含量较小时,凝固条件对该复合材料的抗拉强度影响较大,对弹性模量的影响较小;当碳纤维的体积含量较大时,凝固条件对该复合材料的抗拉强度影响较小,而对弹性模量的影响较大。