环氧氯丙烷对组织工程心脏瓣膜构建中基质金属蛋白酶1、3表达的影响

目的探讨环氧氯丙烷对组织工程心脏瓣膜构建中基质金属蛋白酶-1、3(matrix metalloproteinase-13、,MMP-1、3)表达的影响。方法采用去垢剂和胰蛋白酶消化制备的脱细胞猪主动脉瓣膜支架作为对照组,用30 g/L环氧氯丙烷处理24 h的去细胞支架材料作为实验组。将培养的人骨髓间充质干细胞(human bone marrow mesenchymalstem cells,hBMSCs)种植于脱细胞支架上的组织工程心脏瓣膜(tissue engineering heart valve,TEHV),分别行石蜡包埋切片HE染色和扫描电镜观察TEHV的组织结构,并行RT-PCR测定hBMSCs分泌MMP-1、3的功能。结果hBMSCs在实验组脱细胞瓣膜表面生长良好,MMPs的表达比对照组降低。结论环氧氯丙烷处理的脱细胞猪主动脉瓣膜支架,可以抑制hBMSCs的MMP-1、3的表达。     

羊膜移植于角膜基质内的转归及其影响因素

目的研究羊膜移植于角膜基质内的转归并探讨其影响因素。方法取15只新西兰大白兔,将二氯三苯胺荧光素(dichlorotriazinyl aminofluoresclin,DTAF)标记的羊膜埋植于角膜基质内。术后进行临床观察,并于4、8、13、17、22周取材做HE染色观察组织病理学改变,激光共聚焦显微镜检查追踪羊膜踪迹,以及22周取材做角膜透射电镜检查,观察超微结构。结果 HE染色术后4周可见多层均质红染的羊膜组织弯曲排列,结构保留完整,基底膜和实质层未溶解。术后8周,羊膜组织仍呈均质红染的条状结构,实质层较完整。术后13周羊膜形态渐显模糊,但仍呈条带状,少量角膜细胞聚集在羊膜周围。术后17周明显可见碎片状的羊膜组织。术后22周角膜基质内存留小片状羊膜组织。激光共聚焦显微镜发现羊膜在角膜基质内可以存留22周以上。术后22周角膜透射电镜可见整合于角膜基质中的羊膜基质胶原纤维成分较不规则,羊膜周围角膜基质超微结构无明显改变。结论羊膜移植于角膜基质内存留时间可长达22周以上,羊膜可以融合于角膜组织中,作为替代材料为行角膜移植手术争取了时间。     

心血管介入器械表面修饰新策略血管内皮细胞生长微环境的原位仿生构建

血管支架等心血管介入医疗器械植入人体后的血栓形成和再狭窄等问题长期以来一直是临床上亟待解决的难题.目前研究显示,损伤部位血管内皮功能性重建能显著降低再狭窄比率,避免血栓的形成,而该过程与内皮细胞所处的周细胞环境、底层组织拓扑结构和细胞外基质等微环境密切相关.本文系统讨论了以上3种要素对血管内皮功能性重建的影响,并给出了作者在材料表面内皮细胞生长微环境的原位仿生构建方向的最新研究进展:对于周细胞环境,主要通过调控平滑肌细胞为收缩型表型,进而促进内皮细胞功能性因子释放; 对于底层拓扑结构,可在材料表面制备微/纳图形进行仿生构建,进而调控内皮形态和分布呈体内生理状态;对于细胞外基质,可通过细胞脱附技术获得或将细胞外基质成分接枝在材料表面,赋予材料良好的生物相容性.      

LHF保存液低温保存大鼠胰腺的实验研究

研究自制 LHF器官保存液对 SD大鼠胰腺的保存效果。方法　 LHF和高渗枸椽酸腺嘌呤保存液保存大鼠胰腺 1 2 h、2 4 h、36h后进行胰岛细胞分离 ,观察保存前、后细胞形态、功能的变化。结果　 LHF液保存大鼠胰腺 36h内 ,组织含水量无显著的增加 ;保存液中胰淀粉酶、胰岛素含量低 ;细胞色素氧化酶活力无显著性降低。胰岛细胞分离后 ,细胞形态结构完整、分泌功能良好 ,其保存效果明显优于高渗枸椽酸腺嘌呤保存液。结论　 LHF作为胰腺保存液能够有效地保存大鼠胰腺 36h,可用于胰岛移植供体保存     

新鲜羊膜和保存羊膜在碱烧伤眼表重建中的作用比较

目的 观察比较新鲜羊膜和保存羊膜移植在兔角膜急性碱烧伤眼表重建中的作用,并探讨肿瘤坏死因子α(TNF-α)和血小板源性生长因子(PDGF)的疗效.方法 建立兔角膜急性碱烧伤模型,设左眼为对照组,右眼为治疗组,并于24h内行新鲜羊膜或保存羊膜移植术(12眼/组).术后观察双眼形态及角膜新生血管变化,酶联免疫吸附法检测房水中TNF-α的含量,免疫组化法检测角膜组织中PDGF-BB蛋白的表达情况.结果 与对照组比较,治疗组炎症反应轻,角膜溃疡范围小,上皮再生速度快,新生血管长度短(P<0.05).治疗组房水中TNF-α含量低于同期保存羊膜移植组和对照组,且下降速度快,角膜组织中PDGF-BB蛋白表达升高(P<0.05).与保存羊膜移植组比较,新鲜羊膜移植组炎症反应更轻,TNF-α下降速度更快(P<0.05),PDGF-BB表达水平更高(P<0.05).结论 在角膜急性碱烧伤眼表重建中,新鲜羊膜较保存羊膜效果更好,其作用与抑制TNF-α水平、促进PDGF表达有关.     

脱水保存角巩膜移植修复角巩膜组织缺损的临床评价

为评价脱水保存的角巩膜移植修复角巩膜组织缺损的疗效，对118例（120眼）角膜缘变性及角巩膜葡萄肿患者施行全厚板层及板层移植术。术后随访6月～10年，所有病例获得了满意效果，未见原有病复发，亦无排斥反应发生。结果显示，采用脱水保存的角巩膜移植修复眼球壁组织缺损，效果满意，无并发症。     

Metrigel-VEGF-SW982细胞支架复合物的构建及在滑膜肉瘤小鼠模型上的应用

目的建立Metrigel-VEGF-SW982细胞支架复合物并利用复合物制作移植瘤动物模型,为其他软组织肿瘤动物模型的建立提供思路。方法培养扩增SW982细胞,消化收集细胞,用Metrigel对SW982细胞进行重悬,同时加入VEGF,应用Transwell制作Metrigel-VEGF-SW982细胞支架复合物,并进行培养,HE染色观察细胞支架复合物形态结构。选取10只4周龄雌性SCID小鼠,随机分成支架组和对照组。支架组小鼠腋下移植细胞支架复合物,对照组注射移植细胞培养基悬液。8周后,比较两组造模成功率,取材HE染色观察肿瘤的组织形态特点。结果利用Metrigel对SW982细胞进行立体式培养,能够很好的模拟细胞在体的生长状态。采用细胞支架复合物构建滑膜肉瘤动物模型,成瘤率较对照组明显提高,且肿瘤体积更大,细胞密度更高,肿瘤内部有新生血管。结论利用MetrigelVEGF-SW982细胞支架复合物构建滑膜肉瘤动物模型,能够极大地提高模型成瘤率,为滑膜肉瘤的研究提供便利。     

纳米磷酸盐/聚磷酸钙纤维/聚乳酸骨与软骨组织工程支架复合材料研究

采用溶媒浇铸、粒子滤取技术与气体发泡相结合的方法制备出纳米磷酸盐/CPP/PLLA骨与软骨组织工程支架复合材料;测试了该支架复合材料的物理、力学及降解性能,并用扫描电子显微镜对其微观结构进行了观察.实验结果表明:纳米磷酸盐/CPP/PLLA骨与软骨组织工程支架复合材料具有三维、连通、微孔网状结构,并具有较高的空隙率和较好的压缩模量,还具有良好的降解性能和生物相容性,是比较理想的骨和软骨组织工程支架材料.     

人蜕膜细胞培养作为抗早孕药物筛选模型的研究

目的 建立分数的人蜕膜质细胞培养模型以用于抗生育药物的筛选研究。方法 早孕６￣９周的３人蜕膜组织经胶原酶（１５０ｕ／ｍｌ）和透明质酸酶（５０ｕ／ｍｌ）于３５℃恒温水浴振荡消化１００ｍｉｎ，并经２１６μｍ不锈钢网过滤后得到分离的人蜕膜基质细胞，该细胞培养于无血清培养液（以下简称培液）中，通过变换培液中添加生长因子及抗生育药物的浓度观察其生长变化情形。结果 人蜕膜细胞在无血清ＦＤ＋８Ｆ培液中，可维持贴     

两种方法冻存胎儿卵巢组织后的活力判断

目的 比较常规慢速冻存法与快速冻存法保存胎儿卵巢组织的效果,为快速冻存法的应用提供依据.方法 以1.5 mol/L乙二醇与0.1 mol/L蔗糖作冷冻保护剂,分别采用常规慢速冻存法和三步快速冻存法保存1 mm3大小的胎儿卵巢组织,解冻后观察两组卵巢组织内的超微结构;以去势裸鼠为受体,将解冻后的胎儿卵巢皮质片移植于裸鼠的双肾被膜下,观察移植2周和8周后移植物的组织学结构、移植物存活率、卵泡密度及受体鼠血清E2水平.结果 与新鲜胎儿卵巢组织相比,慢速和快速冷冻后卵巢组织中形态正常的卵母细胞的比例都明显减少(P<0.05).移植后2周的两移植组均有卵泡存活,原始卵泡广泛分布于基质中;移植后8周的两移植组的卵泡数量都明显减少,但初级卵泡的数量相对增加.比较移植2周和8周后移植物的存活率、单位面积移植物内的原始卵泡或初级卵泡数及受体鼠血清雌激素水平,两移植组并无显著性差异.结论 三步快速冻存法可有效保存胎儿卵巢组织的生物活性,解冻后卵巢组织的形态学结构、雌激素分泌与常规慢速冻存组并无显著性差异.     

Biocompatibility evaluation of polyethylene terephthalate artificial ligament coating hydroxyapatite by fibroblasts cells in vitro

Hydroxyapatite (HA) based materials have been widely used in the field of ligament tissue engineering in the past decades. It has been previously reported that HA can increase the penetration of marrow-derived mesenchymal stem cells (MSCs) and MSCs cells into scaffolds due to increased cell differentiation in biological media. Additionally, it was found that there are much difference between MSCs and anterior cruciate ligament (ACL) cells. For that reason, we mainly evaluate the biocompatibility of polyethylene terephthalate (PET) silk scaffold with fibroblasts cells in vitro. We cultured mouse fibroblasts cells on the substrate of PET fiber and PET-HA scaffold, respectively, and then observed the morphology by using scanning electron microscopy. Our data indicate that PET-HA scaffold has good biocompatibility with fibroblasts cells and can potentially be useful in enhancing the fibroblasts cell differentiation and proliferation.     

自制磷酸钙骨水泥人工骨的生物安全性

目的　评价自制磷酸钙骨水泥人工骨 (CPC)的生物相容性。方法　将CPC人工骨制成生理盐水浸提液 ,培养L 92 9细胞 ,观察浸提液对L 92 9细胞生长和相对增殖度的影响 ,评价CPC人工骨对细胞的潜在毒性作用 ;将CPC人工骨制成一定大小和形状植入新西兰兔股部肌肉 ,观察植入后不同时期试样周围组织反应程度 ,评价CPC对组织的刺激性和相容性。结果　CPC对L 92 9靶细胞未见毒性作用 ;植入后对周围组织、肌肉无刺激反应。结论　CPC人工骨有良好的生物相容性     

A HISTOPATHOLOGIC IMMUNOHISTOCHEMICAL AND ULTRASTRUCTURAL STUDY OF RABBIT CORNEA AFTER EXCIMER LASER PHOTOREFRACTIVE KERATECTOMY

In excimer laser photorefractive keratectomy(PRK), the central part of the Bowman's mem-brane and superficial stroma is ablated after re-moval of the corneal epithelium. Clinical studiesshowed that the results of PRK for myopia of up to--6 diopters are satisfactory[' 'J. However, deeperresearch is needed, especially the healing processfollowing PRK,which is different from the woundhealing mechanism after conventional occularsurgery['.'J. Corneal haze and myopic regression arethe 2 main co…     

胎儿软骨细胞体外培养过程中生长及代谢的变化

目的探讨体外培养的软骨细胞形态及Ⅰ、Ⅱ型胶原和聚集蛋白聚糖的表达变化,为组织工程软骨种子细胞选择合适的回植时机。方法取体外培养的第1-5代胎儿软骨细胞,观察细胞形态和细胞增殖率;用爱茜蓝(alcianblue)法检测软骨细胞聚集蛋白聚糖中糖胺聚糖含量;分别用免疫细胞化学和逆转录聚合酶链反应检测Ⅰ、Ⅱ型胶原及聚集蛋白聚糖在蛋白和mRNA水平的表达。结果体外培养的胎儿软骨细胞从第3代起逐渐向成纤维样细胞转换;各代软骨细胞糖胺聚糖的含量随传代次数的增加而逐渐降低,第3代后处于较低水平;第2代以前Ⅱ型胶原表达较强,Ⅰ型胶原表达较弱,之后随传代Ⅱ型胶原表达减弱,Ⅰ型胶原表达逐渐增强;而聚集蛋白聚糖在第3代以前表达较高,从第4代后明显下降。结论人胎儿软骨细胞体外培养过程中,第2代软骨细胞从形态和功能上最接近体内状况,可作为软骨组织工程的种子细胞。     

掺锶磷酸钙骨水泥的体外细胞生物学性能评价及其与掺锶量的相关性

目的 评价"SrHPO4/Ca4(PO4)2O/CaHPO4"系掺锶磷灰石骨水泥的生物相容性及其与掺锶量的关系.方法 通过急性全身毒性、热原性、溶血性、体外细胞毒性以及成骨细胞在材料表面的黏附、增殖与表达等实验,检测材料的性能及生物降解潜能.结果 "SrHPO4/Ca4(PO4)2O/CaHPO4"系掺锶磷灰石骨水泥的急性全身毒性、热原性、溶血性、体外细胞毒性均为合格.Sr-CPC的热原性、溶血性以及碱性磷酸酶值与掺锶量呈非线性关系.结论 含锶磷酸钙骨水泥体外细胞生物相容性良好,是安全的新型骨组织工程支架材料.     

骨骼肌中存在CDla^＋细胞

目的 研究骨骼肌中CDla^ 细胞的形态、分布及功能。方法 4例人骨骼肌样本采用CDla抗体进行免疫组织化学染色．光镜观察。结果 骨骼肌纤维之间、肌束膜和肌外膜的血管壁、神经纤维、脂肪组织中的CDla^ 细胞呈带状、灶状或散在分布。CDla^ 细胞大小不等，形态多样，常有突起。突起粗细、长短、多少不等，其突起可与周围或远处的CDla^ 细胞或突起相连；骨骼肌纤维之间的CDla^ 细胞也可与肌膜紧密相连。结论 骨骼肌纤维之间的CDla^ 细胞可能是肌卫星细胞的某一分化阶段；骨骼肌中各种组织内的CDla^ 细胞也可能是相应组织成熟细胞的前体状态，并参与相应组织结构的形成和维持。     

PRK术后家兔角膜透射电镜、扫描电镜的实验研究

应用 SVS APEX PLUS型准分子激光治疗系统对 6只家兔双眼进行 PRK术 ,设定右眼- 4.0 0 D,左眼 - 8.0 0 D。分别于术后 3天、30天、1 0 0天两组随机选取 1只家兔 ,使其猝死摘除双眼球 ,取其角膜。每只角膜分为两半 ,一半角膜电镜下观察其超微结构 (1 /4行 SEM,1 /4行TEM)。透射电镜观察手术后 1 0 0天 ,角膜上皮细胞基本恢复正常。扫描电镜观察则上皮细胞界限分明 ,上皮明亮细胞较多 ,但微绒毛、微皱褶相对减少。提示 PRK术后 1 0 0天角膜组织结构基本正常 ,但仍有组织薄弱处和特殊性改变。其角膜上皮微绒毛、微皱褶相对减少 ,可能是临床上PRK术后部分患者近期角膜干燥的原因之一     

良性前列腺增生的形态学改变与ARmRNA表达差异

采用直接法原位ＰＣＲ技术对４例ＮＡＰ和１０例ＢＰＨ组织中ＡＲｍＲＮＡ表达作了检测分析，并对其在ＮＡＰ与ＢＰＨ的表达作了定量比较分析。结果表明∶（１）ＮＡＰ及ＢＰＨ标本ＡＲｍＲＮＡ表达均显示阳性。阳性信号主要定位于靠近核膜的胞浆当中，主要分布在前列腺上皮细胞、间质细胞。（２）前列腺上皮组织中ＡＲｍＲＮＡ表达具区域异质性的特点；部分增生前列腺的腺上皮基底层（ＢＣＬ）细胞阳性表达增强，ＮＡＰ组未发现此现象。（３）图像分析表明无论是ＮＡＰ还是ＢＰＨ，ＡＲｍＲＮＡ在腺上皮的阳性表达强度均强于间质。而ＮＡＰ与ＢＰＨ之间阳性表达强度无显著差异。     

Interaction of human fibroblasts with electrospun composites gelatin/PLLA, chitosan/PLLA and PLLA fibrous scaffolds

Highly porous ultrafine electrospun scaffolds, gelatin/poly(L-lactic acid) (PLLA) and chitosan/PLLA were prepared by blending gelatin and PLLA, chitosan and PLLA respectively. The biocompatibilities of these scaffolds were assessed by attachment, proliferation and viability of cells on them. The results indicated that over 30% WI-38 cells could attach to the gelatin/PLLA and chitosan/PLLA scaffolds at 2 h after seeding, while the attachment of the cells was only 15% on PLLA scaffolds. Both gelatin/PLLA and chitosan/PLLA scaffolds also exhibited a very good ability for proliferation of WI-38 cells. Cell growth on the gelatin/PLLA and chitosan/PLLA scaffolds showed dramatic improvement, indicating a much better biocompatibility in the blends contributed by gelatin and chitosan. 3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide (MTT) assay also demonstrated gelatin/PLLA showed better ability to enhance the growth and functions of the cells. These assays suggest that the electrospun gelatin/PLLA and chitosan/PLLA scaffolds are promising biomaterials with great biocompatibility for the development of skin tissue engineering.