野生型p27和核定位信号缺失型p27真核表达载体的构建及表达

目的 构建人野生型p27(p27WT)和核定位信号缺失型p27(p27△NLS)的真核表达载体,并在HEK293T细胞中进行表达,为细胞中p27核浆定位的变化及其不同的生物学功能研究提供细胞基础。方法 提取人乳腺癌细胞系MCF7总RNA,反转录cDNA后,分别进行p27全长和非NLS区片段的PCR扩增,获得p27WT全长(CDKN1B,NM＿004064.5)和p27△NLS编码区序列,分别将其克隆至真核表达载体pCMV-Blank,经菌液PCR、双酶切和测序鉴定。电穿孔法转染HEK293T细胞,48 h时分别提取胞核蛋白和胞质蛋白,Western blotting检测p27在细胞质和细胞核中的蛋白表达。结果测序结果显示,真核表达载体pCMV-Blank中插入的p27WT序列和p27△NLS序列均与NM＿004064.5序列相一致。pCMV-p27WT转染HEK293T细胞后,细胞总p27蛋白表达显著增加,核浆分离检测发现其在细胞质和细胞核中均表达;而pCMV-p27△NLS转染HEK293T细胞的总p27蛋白表达也显著增加,核浆分离检测发现其主要在细胞质中表达。结论 成功构建人p27...     

上调MiR-145的表达对口腔癌细胞CAL27生物学特性的影响

目的探讨MiR-145表达升高对口腔鳞状细胞癌细胞CAL27生物学特性的影响。方法通过实时定量PCR检测MiR-145在正常口腔黏膜细胞hNOK和口腔癌细胞CAL27的表达水平。通过MiR-145对CAL27的细胞转染,CAL27集落形成实验、细胞周期与凋亡实验,观察CAL27细胞生物学特性的改变。结果与正常口腔黏膜细胞hNOK相比,口腔癌细胞CAL27中的MiR-145表达呈下调状态。通过恢复口腔癌细胞中MiR-145的表达显著抑制了CAL27细胞集落的形成,并诱导G1期阻滞和细胞凋亡。结论 MiR-145可发挥口腔细胞癌的抑制功能,抑制口腔癌细胞CAL27细胞增殖特性,诱导其凋亡过程。在其诊断与治疗应用中,恢复MiR-145表达可能是一种合理的方法。     

外源性p27Kip1对兔眼滤过术后结膜瘢痕的抑制作用

目的观察外源性p27Kip1作用于兔眼滤过术后的效果,研究其对术后结膜瘢痕形成的抑制作用。方法根据GenBank人p27基因序列设计引物,制备腺病毒介导Ad-p27并验证其正确性。兔眼滤过术中结膜下注射Ad-p27、丝裂霉素C(MMC)和PBS,术后28d内测定眼压、观察眼前节的动态变化及并发症,依照Krofeld评分法进行滤过泡评分。结果 Ad-p27作用后28d内维持低眼压的状态,术后3d眼压下降达峰值7.68mmHg。Ad-p27降眼压程度与MMC相似,与PBS比较术后7d(P<0.05)、14d(P<0.01)、21d(P<0.01)和28d(P<0.05)眼压存在显著性差异。Ad-p27作用后14d内滤过泡弥漫性隆起,28d有囊性泡形成。Ad-p27组与PBS组比较,滤过泡评分在7d(P<0.01)、14d(P<0.01)和21d(P<0.05)有显著性差异。Ad-p27组术后21d前房恢复正常,而PBS组术后14d恢复正常。Ad-p27作用偶有前房渗出、前房出血等并发症。结论 Ad-p27通过抑制手术区瘢痕形成保持滤过道通畅,降低眼压。     

沪通长江大桥首个辅助墩沉井封底成功

<正>2015-12-08,世界最大公铁两用斜拉桥沪通长江大桥首个辅助墩沉井——27号墩沉井成功封底,这标志着主航道桥首个辅助墩即将转入承台施工。27号墩沉井面积相当于3个篮球场,高度与27层楼房相等。27号墩沉井从2014-10-06开始,历经钢沉井的制造、浮运、定位、水上钢沉井接高、4次混凝土沉井接高、5次吸泥下     

C-Met蛋白与HGF蛋白在舌鳞癌细胞中的表达及临床意义

目的探讨C-Met蛋白与肝细胞生长因子(HGF)蛋白在舌鳞癌细胞中的表达及临床意义。方法选取2011年6月至2013年5月我院口腔科收治的舌鳞癌患者46例作为实验组,另取同期在我院进行良性肿瘤切除患者27例作为对照组,正常组织为正常组,均进行免疫组化测定C-Met蛋白及HGF蛋白的表达。结果实验组中C-Met的阴性表达率为21.7%(10/46),弱阳性表达率为26.1%(12/46),强阳性表达率52.2%(24/46);对照组的阴性表达率为77.8%(21/27),弱阳性表达率为15.8%(5/27),强阳性表达率为3.7%(1/27),两组比较差异具有统计学意义(P<0.001)。实验组中HGF蛋白的阴性表达率为17.4%(8/46),弱阳性表达率为58.7%(27/46),强阳性表达率23.9%(11/46);对照组阴性表达率为63.0%(17/27),弱阳性表达率为37.0%(10/27),强阳性表达率为0.0%(0/27),两组比较差异具有统计学意义(P<0.001)。C-Met蛋白的表达与淋巴结转移比较,差异具有统计学意义(P<0.05);HGF蛋白的表达与病理分级、淋巴结转移等比较,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论 C-Met蛋白及HGF蛋白在舌鳞癌细胞中有显著性表达,且与舌鳞癌的发生、发展有密切关系。     

β2肾上腺素能受体基因多态性与维吾尔族肥胖的关系

目的探讨β2肾上腺素能受体(β2-adrenergic receptor,β2-AR or ADRB2)基因R16G、Q27E多态性与新疆维吾尔族人群肥胖发生的相关性。方法采用Taqman技术对新疆754例维吾尔族受试者进行β2-AR基因R16G、Q27E位点基因分型,并分析各基因型和等位基因频率在不同体重指数(BMI)水平的分布及其与超重、肥胖的关系。结果维吾尔族人群中超重组与肥胖组的血压、甘油三酯及胆固醇水平显著高于正常体重组(P<0.05)。R16G、Q27E两个多态位点的基因型频率与等位基因频率在正常体重组、超重组与肥胖组之间的分布均无统计学差异(P>0.05);按性别分层后基因型与等位基因频率的分布在3组间亦未见统计学差异。R16G、Q27E多态构成的4种单倍型在正常体重组、超重组与肥胖组的分布无统计学差异(P>0.05)。维吾尔族与汉族人群间比较,Q27E基因型与等位基因频率分布的差异有统计学意义(P<0.001)。结论β2-AR基因R16G、Q27E多态性与新疆维吾尔族人群肥胖发生无关,但Q27E基因型与等位基因频率分布在汉族与维吾尔族人群间不同。     

第二批低碳交通运输体系建设城市试点实施方案专家评审拉开帷幕

8月27日,第二批低碳交通运输体系建设城市试点实施方案专家评审拉开帷幕,截止9月上旬,16个试点城市实施方案将陆续接受交通运输部评审。27日,部政策法规司在部机关第一会议室组织召开了《蚌埠市低碳交通运输体系建设试点城市实施方案》专家评     

HB_sAg阳性产妇与HBV传播

<正> 从1986年2月起,用ELISA法,对27例产妇的阴道分泌物、胎盘血、羊水、初乳及新生儿脐带血、口腔分泌物和胎便中乙肝病毒感染性标志(HBsAg、HBeAg、抗-HBs、抗-HBe、抗-HBe)进行了检测。结果为:①胎盘血中HBsAg检出26/27(96.3%),抗-HBe检出23/27(85.2%),HBeAg检出16/27(59.3%)阳性检出率与血清结果完全一致。③羊水、阴道分泌物和初乳中,抗-HBc阳性率分别为     

高速公路挡土墙施工分析

工程概况该高速公路挡土墙位于K27+342-K27+362.70处,设计要求地基承载力≥0.2Mpa,挡墙基础、墙身采用7.5号浆砌块石。施工准备测量放线,由测量工程师根据图纸放出挡墙定位线、基础开挖边线控制桩,     

预应力连续箱梁施工

工程概况张石高速K35+051.278分离立交,桥梁起点桩号为K1+037.527,终点桩号为K1+168.127,桥梁总长130.6m,跨径组合为27+35*2+27,桥梁全宽12m,净宽11m,桥面横坡1.5%。该     

武夷山农村公路建设中的常见问题及处理办法

武夷山地质地貌、气候水文特点武夷山市位于福建省北部,处于东经117°37'22～118°19'44、北纬27°27'31～28°04'49。全境东西宽70公里,南北长72.5公里。境内东、西、北部群山环抱,中南部较平坦,为山地丘陵。地势由西北向东南倾斜。     

27SiMnMoV钢渗碳工艺性能的研究

本文采用真空渗碳方法,以20CrMnTi 钢为对比对象,研究了27SiMnMoV 钢的渗碳工艺性能.结果表明:27SiMnMoV 钢与20CrMnTi 钢相比,渗碳层中碳化物细小;碳浓度梯度小;硬度分布平缓;力学性能指标α_k、σ_(bb)、f 均要高些.故27SiMnMov 钢的渗碳工艺性能优于20CrMnTi钢.     

公交客车安全时不我待

2009年6月5日,成都9路公交车发生燃烧,事故造成27人遇难、72人不同程度受伤。瞬时间27条鲜活的生命随着一团烈火逝去,造成了一场人间悲剧。2008年5月5日,上海842路空调公交车在进站上下客时发生爆燃,事故造成3人遇难、12人受伤……     

放射性物品道路运输管理规定

2010年10月27日以交通运输部2010年第6号令发布The 6th Order of Ministry of Transport Issued by Ministry of Transport on Oct 27th,2010第一条为了规范放射性物品道路运输活动,保障人民生命财产安全,保护环境,根据《道路运输条例》和《放射性物品运输安全管理条例》,制定本规定。     

放射性物品道路运输管理规定

2010年10月27日以交通运输部2010年第6号令发布The 6th Order of Ministry of Transport Issued by Ministry of Transport on Oct 27th,2010第一条为了规范放射性物品道路运输活动,保障人民生命财产安全,保护环境,根据《道路运输条例》和《放射性物品运输安全管理条例》,制定本规定。第一章总则     

胆汁致胃黏膜损伤中瘦素、环氧合酶-2及p27的表达

目的通过大鼠实验模型观察瘦素(leptin)、环氧合酶-2(COX-2)及p27在胆汁所致胃黏膜损伤中的作用。方法SD大鼠分成4组:十二指肠胃反流(duodenogastric reflux,DGR)组、DGR 胆管结扎(bile duct ligation,BDL)组、胆管结扎组(BDL)、假手术组(control,C)组。术后12周处死大鼠,观察胃黏膜损害及病理组织学改变,计算DIX-ON积分;免疫组化(SP)法检测各组大鼠胃黏膜瘦素、COX-2及p27表达。结果DIXON积分DGR组、DGR BDL组较BDL组及假手术组积分均升高(P<0.05),DGR组较DGR BDL组DIXON积分升高(P<0.05);DGR组、DGR BDL组与BDL组及假手术组比较大鼠胃黏膜瘦素、COX-2高表达(P<0.05),p27低表达(P<0.05),DGR组比DGR BDL组高表达尤为明显(P<0.05)。DIXON积分与瘦素、COX-2表达呈正相关,与p27表达呈负相关。结论胆汁反流致胃黏膜损伤过程中,瘦素、COX-2及p27蛋白与病变的修复过程有关。     

推动欧洲不断前行的欧盟交通运输系统

高效的运输系统 2006年底,欧盟27国拥有近4910万总人口。从学童到领取抚恤金的老年人,他们中的大多数人都在使用运输系统上班、上学、购物或者休假旅游。2006年,欧盟27国居民人均日出行距离为34公里,乘坐客车的人均日出行距离为26公里。2006年底，每两名居民拥有近一辆小汽车。     

推动欧洲不断前行的欧盟交通运输系统

高效的运输系统 2006年底,欧盟27国拥有近4910万总人口.从学童到领取抚恤金的老年人,他们中的大多数人都在使用运输系统上班、上学、购物或者休假旅游.2006年,欧盟27国居民人均日出行距离为34公里,乘坐客车的人均日出行距离为26公里.2006年底,每两名居民拥有近一辆小汽车.运输系统不断提高的机动性已成为欧盟27国居民日常生活的一部分.     

基于因子分析的汽车行业上市公司绩效评价

以沪深两地上市的27家生产汽车整车的公司为研究对象,以2012年年报财务数据为样本,选取12个财务指标,包括9个正向指标和3个适度性指标,基于因子分析法,运用SPSS软件,对其经营绩效进行综合评价,并根据综合因子得分对这27家公司进行分类,找出了影响汽车行业上市公司经营绩效的主要因素,为决策提供依据。     

棉铃虫核型多角体病毒泰国株ORF27全长基因序列分析及其截短型基因的原核表达

目的 研究棉铃虫核型多角体病毒泰国株ORF27蛋白的功能,阐释其在传代效应中可能发挥的分子机制.方法 用PCR方法从棉铃虫核型多角体病毒泰国株基因组中扩增ORF27基因;使用ProtParam、TMpred、SignalP、ScanProsite等生物信息学软件分析其理化特性、亚细胞定位、信号肽、跨膜结构、功能位点等;并将其氨基端截短型基因进行原核表达.结果 ORF27基因序列全长768nt,编码255aa,分子质量约29.5ku.生物信息学软件预测其具有多个功能基序.截短型重组载体表达出分子质量约35ku的外源蛋白,主要以包涵体形式存在.结论棉铃虫核型多角体病毒ORF27蛋白可能具有非常广泛的生物学活性,调控多种细胞信号传导通路,调节细胞凋亡和细胞周期,参与传代效应的发生.