突变型低氧诱导因子1α加速骨缺损部位新血管生成的实验观察

目的通过突变低氧诱导因子1α(hypoxia inducible factor 1,HIF1α)基因的3个氨基酸位点研究该基因在常氧条件下骨缺损区域对血管新生效应的影响。方法定点突变HIF1α编码区(coding sequence,CDS)402、564和803位3个氨基酸后将基因重组入腺病毒pAdEasy-1系统并测定滴度,同理包装未突变组和空病毒组;以3种病毒液连同空白组共分4组进行后续实验(A组:含突变HIF1α基因病毒液,B组:含未突变HIF1α基因病毒液,C组:空病毒液,D组:空白组);将病毒液转染入兔骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)内,通过示踪因子人源化绿色荧光蛋白(human renilla reniformis green fluorescent protein,hrGFP)观察病毒转染效率,检测各组转染细胞中HIF1α基因mRNA和蛋白表达情况;制作兔桡骨缺损动物模型,将含目的基因的病毒液按上述分组转染MSCs后作为种子细胞移植到多孔纳米磷灰石-硅灰石生物活性玻璃陶瓷(apatite-wollastonite magnetic bioactive glass-ceramic,A-W MGC)载体中搭建人工组织工程骨架载体并植入体内,于术后8周处死各组动物,取植入区域组织做新血管生成检测。结果 CDS区第402、564和803位氨基酸均定点突变为丙氨酸;3种腺病毒重组体构建成功并鉴定完毕;A、B两组HIF1αmRNA表达量明显高于C、D两组,差异具有统计学意义(P<0.05),而A、B两组之间及C、D两组之间比较,差异无统计学意义(P>0.05);A组HIF1α蛋白表达量明显高于其他3组,差异具有统计学意义(P<0.05),而B、C、D 3组之间比较差异无统计学意义(P>0.05);A组转染到动物体内后可见明显成血管效果,其他3组未见缺损区域有血管新生。结论 13点突变后HIF1α基因能够在常氧条件下大量且高效表达;23点突变后HIF1α基因能够在体内局部形成有效的血管网络。     

MELATONIN AND IMMUNOMODULATION IN AGED AND IMMUNODEFICIENT MICE

Melatoninisaindolehormonesecretedbythepinealglandinresponsetophotoperiodsandinflu encesmanyimportantbiological processes,recentstudiesrevealedthatMelatonincouldincreasetheweightofimmunorgans,raisethelymphocyteper centageinperipheralblood ,acceleratetheantibody’ssynthesisandcell’sproliferation ,stirupcytokine’sdevelopment,helptheregulationinneuroen docrineimmunologicalnetwork ,andalsoplayanimportantroleininducingtheimmuno circadianrhythm[1 ] .HelperandsuppressionTlymphocyteswerecapitalcellsi…     

大鼠附睾上皮内ACP及NSE与过剩精子处理的关系初探

目的　研究大鼠附睾上皮细胞PAS阳性物质的性质 ,以及与溶酶体的酸性水解酶、附睾腔内过剩精子消化处理之间的关系 ,借以阐明附睾上皮处理过剩精子的机制。方法　用组织化学的方法显示PAS阳性物质、非特异性酯酶 (NSE)和酸性磷酸酶 (ACP)并研究其相互关系。结果　PAS阳性颗粒分布于PAS阳性细胞的核下区、核上区或充满整个胞质 ,也可见于附睾管腔内 ,尤其是附睾上皮近腔面 ,呈条带状 ;NSE、ACP阳性颗粒均位于胞质的核上方及附睾上皮的近腔面。结论　NSE、ACP与PAS的染色结果一致 ,说明附睾上皮除吞噬精子外 ,还可能分泌溶酶体酶进入附睾上皮的近腔面以初步处理精子 ,而精子残骸穿过附睾上皮进入间质可能进一步被巨噬细胞系统消化处理     

酒精诱导的小鼠生殖系统损伤与一氧化氮的关系

目的　研究酒精饲养小鼠精子死亡率和活动率与睾丸一氧化氮 (NO)形成的关系。方法　应用灌胃的方法饲养酒精组小鼠 ,并检测小鼠精子死亡率、活动率以及睾丸NO含量和NOS活性。结果　酒精饲养小鼠精子死亡率明显高于对照组 ,而活动率以及NO含量和NOS活性均低于对照组。结论　酒精诱导小鼠精子质量下降与NO浓度有关     

14周至足月胎儿角膜上皮干细胞的分布及超微结构观察

目的观察胚胎期角膜上皮干细胞的迁移规律及其超微结构,为利用胎儿角膜上皮干细胞提供理论依据。方法观察14至38周胎儿角膜上皮HE及抗人64ku角蛋白单克隆抗体(mAE5)染色反应,并观察胎儿角膜上皮干细胞的超微结构。结果14周角膜上皮由一层基底细胞被覆一至两层鳞状细胞构成,且仅有表层鳞状细胞mAE5弱阳性反应。17至29周缘部上皮有3~5层,中央部有2~3层,整层基底细胞mAE5反应阴性,其上鳞状细胞呈强阳性。33至38周角膜上皮已近成熟,仅剩缘部基底上皮细胞mAE5反应阴性。超微结构显示mAE5阴性反应的基底层细胞核异染色质多,胞质中细胞器较少,且细胞间连接也较少。结论胎儿角膜上皮干细胞呈现由全层向基底层,再向缘部逐渐迁移的分布规律,且超微结构较幼稚。     

孕酮对正常生育和不明原因不育男性精子-仓鼠卵穿透试验的作用

目的　比较正常生育男性和不明原因男性不育症患者精子的受精能力及其对孕酮 (P)的反应性。方法　选择10例不明原因男性不育症患者和 10例正常生育男性 ,在上游后精子悬液中加入P 10 μmol·L -1,并体外获能 2h。采用超排卵法制备仓鼠卵细胞 ,将精子与卵子体外受精 3h后观察卵子受精率 (FR)与受精指数 (FI)。结果　上游后精子与P孵育能显著提高生育组的FR(P <0 .0 1) ,但不能增加不育组的FR ;生育组FR显著高于不育组FR(P <0 .0 0 1)。P能显著提高生育组的FI (P <0 .0 1) ,但不能增加不育组的FI;生育组FI显著高于不育组FI (P <0 .0 1)。结论　P能增强正常生育男性精子的受精能力 ;精子对孕酮的反应性降低可能是不明原因男性不育症的病因之一     

被动吸烟对小鼠致突变作用

目的　确定被动吸烟对小鼠的遗传毒性效应。方法　应用实验动物模型 ,小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验和精子畸形试验。结果　被动吸烟组小鼠骨髓嗜多染红细胞微核率和精子畸形率高于阴性对照组 ,差异均有显著性 (P <0 .0 5 ) ,被动吸烟组的精子畸形率与染毒剂量成良好的量效关系 (r=0 .995 0 ,P <0 .0 5 )。结论　提示被动吸烟可在小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验和精子畸形试验中 ,对小鼠产生致突变作用     

家兔肋软骨膜移植再生关节软骨的实验研究

作者将14例家兔的肋软骨膜移植于剥去关节软骨的下颌髁状突骨床上,以电镜为主观察了自体软骨膜再生关节软骨的过程。结果见软骨形成开始于术后第14天,此时膜中出现软骨细胞,形成软骨基质;1月时软骨分层并开始改建,软骨细胞呈典型形态,伴有丰富的粗面内质网和高尔基氏器,提示其分泌活动旺盛;术后2月时细胞器减少;4～6月时软骨细胞呈现退变,而软骨形态已接近正常的关节软骨。作者还讨论了软骨膜移植物形成关节软骨以及软骨改建的机理。     

慢性氟中毒作用下小鼠切牙成釉细胞的改变

目的　通过观察慢性氟中毒作用下小鼠切牙成釉细胞形态学变化 ,探讨氟斑牙的形成机制。方法　建立小鼠氟斑牙动物模型 ,在不同时期肉眼观察成活小鼠切牙颜色及釉质表面变化 ,4 5d后处死动物 ,HE染色 ,光镜观察小鼠切牙成釉细胞各个时期的细胞形态学变化。结果　随着小鼠日常饮用水中氟化钠浓度的增加和时间的延长 ,小鼠切牙氟斑牙症状加重 ;成釉细胞出现扭曲变形、正常的高柱状形态丧失、胞内出现空泡及大小不等的黑色颗粒、托姆斯突被异位物质压迫等细胞形态学改变突出。结论　氟对小鼠切牙的毒性效应在其发育初始阶段即已产生影响 ,并与时间和剂量有密切关系。从小鼠切牙发育初始阶段研究氟斑牙的致病机制可能会有所启示     

Induction of animal model of Graves' disease in BALB/c mice

Objective To construct an animal model of Graves' disease (GD) by immunizing BALB/c mice with hM12 cells co-expressing major histocompatibility complex (MHC) class Ⅱ molecules and human thyrotropin receptor (TSHR) molecules. Methods BALB/c mice in experimental group (H-2d) were immunized with hM12 cells Intraper-itoncally every 2 weeks for six times, while mice in control group were immunized with M12 cells. Five weeks later, the thyroids were histologically examined, and serum samples were tested for thyroid-stimulating antibodies (TSAb) and thyroid hormone levels. Results One BALB/c mouse in experimental group developed Graves'-like disease. Total T4 and T3 levels in this mouse were above the upper limit of normal, TSAb activity was displayed in its serum. The thyroid histologically showed the features of thyroid hyperactivity including thyrocyte hypercellularity and colloid absorption.None of control mice developed Graves'-like disease. Conclusion An animal model with some characteristics of human Graves' disease was successfully induced and the model will facilitate studies aimed directly at understanding the patho-genesis of autoimmunity in Graves' disease.     

保肝解毒颗粒对四环素致急性肝损伤小鼠肝细胞超微结构的立体计量学分析

目的探讨保肝解毒颗粒对四环素致急性肝损伤小鼠肝细胞超微结构的影响。方法60只小鼠随机分为模型组、保肝解毒颗粒大、中、小剂量组、甘利欣对照组和空白对照组,分别以相应剂量药物灌胃5 d,然后以四环素灌胃造模。对肝组织进行电镜观察,并对肝细胞超微结构进行立体计量学测定分析。结果模型组线粒体、异染色质Vv及线粒体、内质网、高尔基体δm明显降低,常染色质和脂滴Vv明显升高;保肝解毒颗粒可明显升高线粒体、异染色质Vv及线粒体、内质网、高尔基体δm,降低常染色质和脂滴Vv。结论保肝解毒颗粒可使肝细胞超微结构变化显著改善,具有较好的保肝作用。