流行性出血热患者尿中病毒抗原的观察

本文报道了采用ELISA双夹心法、ELISA阻断试验、沉淀试验、SPA协同凝集试验、补体结合试验检测流行出血热(EHF)患者尿中流行性出血热病毒(EHFV)抗原;并用免疫电镜观察了尿中流行性出血热病毒形态;用尿中流行性出血热病毒抗原免疫家兔观察了其免疫源性。实验表明:①用ELISA双夹心法检测EHF患者尿抗原,早期检出率高、重复性好、特异性强,较上述其它检测尿抗原的方法好。②上述多种方法均证明EHF患者尿中确有EHFV抗原排出。③该EHFV抗原还具有一定的免疫源性。提示:ELISA双夹心法适用于EHF临床诊断及流行病学调查。     

流行性出血热病毒经口感染的实验研究(摘要)

<正> 为探索流行性出血热病毒(EHFV)经口感染的可能性,1985～1987年,我们以Bal b/c鼠作为动物模型,进行了实验研究。把EEFV鼠脑悬液经口灌入2日龄乳鼠,将食饵浸毒喂饲18日龄幼鼠进行感染,同时用同窝鼠分别设阴、阳性对照组。用免疫荧光法(IF)进行病毒抗原及抗体检测,用Vero—E6细胞进行病毒分离。结果,实验乳鼠于13～15天感染发病,且从其脑、肺脏中检出特异性抗原(21/24),从血清中查出特异性IgM抗体(24/24),效价为1:10～1:320。并从脑、肺脏中分离出四株EHFV,现已稳定传至第     

运用单克隆抗体分析流感病毒H1亚型HA蛋白的抗原表位

目的对甲型流感病毒H1亚型血凝素蛋白的抗原表位进行分析。方法以前期获得的97株抗H1亚型HA抗原的单克隆抗体为研究工具,用间接ELISA方法对不同亚型的血凝素抗原进行反应,将H1亚型HA蛋白的抗原表位进行粗分类,用ELISA阻断试验对抗原表位进行细分类。选取两类抗原表位的抗体,通过计算机模拟分析抗体与抗原结合的结构域,推测抗体结合的具体氨基酸位点。结果根据抗体的交叉反应性不同,将流感病毒H1亚型的HA的抗原表位分为8类;根据ELISA阻断试验的初步结果,H1亚型HA抗原的抗原表位又被细分为15类,通过计算机模拟分析预测的抗体与流感病毒HA抗原结合的氨基酸位点结果与ELISA阻断试验结果相吻合。结论证明流感病毒H1N1亚型HA抗原上至少含有15个抗原表位,且通过ELISA阻断试验和计算机模拟分析得到了相互印证,为流感病毒血凝素HA抗原表位预测方法的完善及通用疫苗的研制提供了实验数据。     

甲型流感病毒纯化及病毒生物学特征分析

目的评价蔗糖密度梯度离心纯化甲型流感病毒的方法,并对纯化的病毒颗粒特征和免疫原性进行分析。方法接种鸡胚培养病毒,收获尿囊液,超速离心浓缩,蔗糖密度梯度离心纯化病毒,用血凝试验、蛋白定量、透射电镜和SDS-PAGE鉴定病毒颗粒。取病毒纯化产物以0.03mg/只和0.005mg/只分组免疫小鼠,采集小鼠血清,利用血凝抑制试验测定血清血凝抑制滴度。结果成功利用蔗糖密度梯度离心法纯化出流感病毒,病毒原液经纯化后被分离成L、M、H三个病毒带,其中M病毒带的吸光度、蛋白浓度及血凝滴度最高,蛋白浓度可达1.2mg/mL,血凝滴度高达1×49。电镜观察显示,L区带为具有血凝活性的质膜和结构疏松的病毒组成,M区带病毒颗粒呈球形、丝状或棒状。同时,有大量空心病毒颗粒存在。H区带与M区带类似,但未发现空心病毒颗粒。纯化的病毒免疫小鼠后可产生具有较高血凝抑制活性的抗体。结论蔗糖密度梯度离心技术可用于流感病毒抗原的制备,且不影响病毒的免疫原性。因此,密度梯度离心法可为流感病毒的基础研究及疫苗开发提供技术支持。     

人类6型疱疹病毒

<正> 人类6到疱疹病毒(Human Herpesvirus6,HHV-6)是一种新发现的疱疹病毒,它在人群中广泛感染,并与多种疾病有关;但目前对该病毒的研究尚处于起步阶段,该病毒的许多方面仍需进一步研究。1986年美国国立肿瘤研究所Salahuddin等首次报道了从6名患B淋巴细胞瘤及淋巴腺炎的患者(其中2名HIV阳性)中分离到一种新的病毒;由于该病毒同时又感染入的B淋巴细胞,故当时命名     

单纯疱疹病毒Ⅱ型DNA结构

<正> 单纯疱疹病毒(Herpes simplex virus简称HSV)属于疱疹病毒属中α亚属。病毒颗粒直径为100～150mm,有四层结构。最内层是双股DNA卷绕在一个轴上;包着核酸的是病毒衣壳。衣壳有162个衣壳体,其中六联体150个,五联体12个,核衣壳直     

从流行性出热血病人脑脊液分离病毒及其生物学特点的研究(简报)

<正> 流行性出血热病人中约10％左右呈现中枢神经症状,如意识障碍、嗜睡、谵妄及痉挛等症状,这些提示出血热病毒侵入神经系统的可能性,但到目前为止还没有确实的依据。我们在一例严重的中枢神经症状的出血热病人脑脊液中进行了血清学及病毒学检查,首次分离出了出血热病毒,证实了上述可能性。我们把清亮透明的脑脊液用出血热免疫血清,进行了沉淀试验,呈现阳性反应。以后用ELISA法进一步证实了脑脊液里存在着出血热病毒抗原。我们把此脑脊液接种于Vero—E6细胞,经过两代的传代,用荧     

用SPA(Staphylococcal Protein A)凝集抑制试验检测单纯疱疹病毒抗体(摘要)

<正> SPA是血浆凝固醇阳性金黄色萄葡球菌细胞壁的一种蛋白质成份,具有与人及多种哺乳动物血清IgG的Fc段结合的特性。国外从七十年代起应用SPA并结合放射、荧光、电镜等技术,建立了许多敏感、特异、快速和简便的试验方法。1979年张颖吾等首先将SPA介绍到国内,相继应用SPA协同凝集试验于脑膜炎双球菌、链球菌、大肠杆菌的抗原分型。关于SPA在病毒抗体检测上的应用,SPA凝集抑制试验查抗体在国外已有报导,在国内尚未见应用。     

多发性骨髓瘤MMSA-1抗原的二级结构预测及多克隆抗体的制备

目的 运用生物信息学技术研究人多发性骨髓瘤MMSA-1(GenBank:AY952881)基因表达蛋白的二级结构和B细胞抗原表位,并制备多克隆抗体.方法 应用DNAStar Protean软件提供的模块分析和预测MMSA-1蛋白的二级结构和B细胞抗原表位.采用多通道同步固相全自动合成系统合成15肽,免疫健康新西兰成年家兔,制备相应的多克隆抗体.结果 MMSA-1蛋白含有较多的β折叠和转角结构.综合柔韧性、亲水性、抗原性、表面可能性、二级结构、偶联难易及实验难度等因素,选取了MMSA-1蛋白序列318～333位作为抗原表位,即SSSLLPQSPAPTEHL,15肽合成产物经HPLC纯化和质谱检测,纯度达到98.65%,序列正确.免疫兔子获得血清抗体采用层析柱纯化,ELISA检测效价:1∶6000.结论 本研究为基于人MMSA-1抗原表位手段的免疫治疗研究提供了理论依据.     

免疫渗滤法实验中非特异性染色封闭方法的改进

目的 选择理想的非特异性抗原封闭方法以适应基于免疫渗滤法的蛋白芯片制备.方法 以杆状病毒-昆虫表达系统制备的人乳头瘤病毒16型(HPV16)L1蛋白抗原为例,采用脱脂奶粉、小牛血清、牛血清白蛋白及不同组合等5种方法对非特异性抗原进行封闭,检测其在免疫渗滤实验中对消除非特异性染色的效果,寻找最佳封闭非特异性染色的方法.结果 经过多次重复试验,并以PBS代替血清作空白试验,结果显示,目前常用的先固相然后封闭的几种方法,其封闭效果的稳定性和重复性不佳,且空白对照易出现假阳性;同时发现使用脱脂奶粉做封闭剂封闭后,由于奶粉颗粒易堵塞NC膜的孔径,影响NC膜的渗滤速度;使用小牛血清做封闭剂封闭后,由于NC膜对小牛血清的吸附而产生背景,影响结果判读;而采用20g/L BSA先封闭后固相的方法,在实验中得到满意的结果.结论 先封闭后固相的方法,在免疫渗滤实验中对非特异性抗原封闭的效果理想、结果稳定、重复性好,为一种理想的新的封闭方法.     

MGBA抗原特异性CD8~+CTL细胞与CIK细胞杀瘤活性的对比研究

目的比较乳腺珠蛋白A(MGBA)抗原特异性CD8~+CTL细胞与CIK细胞对乳腺癌细胞的杀伤效果。方法从健康志愿者外周血中提纯单个核细胞,体外分离、诱导培养成树突状细胞(DC)、CTL和CIK细胞,用免疫磁珠法从CTL细胞中分选CD8~+CTL细胞;用表达乳腺珠蛋白的重组腺病毒(Ad-MGBA)转染DC细胞后,经刺激制备MGBA抗原特异性CD8~+CTL与CIK细胞,用流式细胞术检测两种杀伤细胞对乳腺癌细胞的杀伤效果。结果 CD8~+CTL和CIK对表达MGBA抗原的乳腺癌MDA-MB-415细胞杀伤率分别是63.07%和48.35%(P<0.05);对不表达MGBA抗原的乳腺癌MDA-MB-231细胞的杀伤率是14.62%和29.29%(P<0.05)。结论抗原特异性CD8~+CTL对表达该抗原的乳腺癌杀伤效果高于CIK细胞,而对不表达该抗原的乳腺癌细胞的杀伤效果低于CIK细胞。     

指突样网状细胞的形态特征及其功能

<正> 现代免疫学的发展使人们逐渐认识到:在免疫反应中,不仅有淋巴细胞的参与,还有一类细胞也能接受抗原信息,并影响淋巴细胞的增殖、分化、进而起着免疫的调节作用。这类细胞除了为人们所公认的巨噬细胞外,可能还包括两种网状细胞,即树突样网状细胞和指突样网状细胞。树突样网状细胞早已为人们所认识,它主要地特异定位于淋巴组织的B细胞区,其功能多认为能保留抗原或免疫复合物,与生发中心的形成有关,而指突样网状细胞只是近年才为人们所重视。     

MG_7抗原在胃肠癌的定位研究

本文应用免疫组化及免疫电镜技术对62例胃肠癌标本进行了原位MG_7抗原定位观察。结果显示80.77%(21/26例)的胃癌和94.44%(34/36例)的结直肠癌呈MG_7抗原阳性,该抗原的表达强度和存在部位与肿瘤的分化程度有一定相关。超微结构水平定位观察表明:在分化好的癌细胞、MG_7抗原主要位于腺腔缘微绒毛、细胞膜及膜下胞浆內;而在低分化癌细胞MG_7抗原主要位于分泌颗粒与合成及转运蛋白质的细胞器(包括內质网,高尔基复合体及其分泌小泡)內崾綧G_7抗原是胃肠癌细胞合成的一种分泌性物质。文中还对其定位特点与细胞分化程度的内在联系及其临床意义进行了探讨。     

两种酶结合物对棘球蚴三种抗原特异性及敏感性的检测比较

对９４例包虫病患者、４４例非包虫病患者及５０例健康人血清,用羊源林球蚴囊液、原头蚴及生发层抗原,分别进行了酶联金葡菌Ａ蛋白点免疫及酶标记单抗人ＩｇＧ点免疫试验,其结果显示：前者对三种抗原的敏感性分别为９４．７％、９５．７％和９６．８％;后者分别为９２．６％、９３．６％和９３．６％。前者的特异性分别为８１．９％、９２．６％和９２．６％;后者分别为８７．２％、９１．５％和９１．５％。酶联金葡菌Ａ蛋白点免疫除了林球蚴囊液抗原的特异性低于酶标羊抗人ＩｇＧ点免疫外,原头蚴抗原、生发展抗原的特异性和三种抗原的敏感性均比后者高。     

胃肠癌的MHC抗原表达及其与局部免疫应答的关系

利用一组单克隆抗体对62例胃肠癌组织进行免疫组化研究。结果发现:HLA-ABC抗原缺失率在胃癌,结、直肠癌和局部淋巴结转移灶分别为26.92%、13.89%和33.33%;HLA-DR抗原表达率分别为34.62%、22.22%、和40.0%,而HLA-DQ抗原仅表达于2例HLA-DR胃癌的少数癌细胞。且HLA-ABC抗原缺失率在早期癌(60.0%)明显高于中晚期癌(15.79%);胃肠癌的HLA抗原表达与局部单个核细胞各亚群浸润的程度间也有一定的相关。这些发现提示HLA抗原可能在肿瘤发生发展过程中具有重要的免疫调节功能。     

结核病无变态反应的机制

<正> 对已发生细胞免疫反应的个体注射某种抗原后不发生皮肤迟发过敏反应者,通常即称之为无变态反应。这种无反应性可以是对单一抗原呈特异性的反应缺乏,或者呈较普遍的无反应性。对这种无反应性有许多解释,包括皮肤试验抗原的制备,贮藏、操作、应用不当等等。这些是误差的常见原因,必须认真控制。另一方面,随着传染病种类的日益增多,相当多的病人显示有免疫功能紊乱,致使病人产生无反应性。结核病就是这些疾病中的一个。     

逆转录病毒转移的β－半乳糖苷酶基因在成纤维细胞中的表达

为了研究逆转录病毒载体转移外源基因的实用性，我们采用小鼠白血病病毒（ＭｏＭＬＶ）载体将大肠杆菌的β－半乳糖苷酶基因（ｌａｃＺ）和抗新霉素（ＮｅｏＲ）基因转移到大鼠成纤维细胞内，对整合后的前病毒结构和基因表达进行了酶活性测定和ＤＮＡ分析。结果表明：ｌａｃＺ基因可以在大鼠皮肤成纤维细胞和２０８Ｆ细胞株中较长时间地表达；前病毒整合位点、靶细胞特性和整合后的载体结构与转入基因表达的稳定性紧密相关。     

细胞凋亡相关抗原Fas和Bcl-2在自身免疫性甲状腺病甲状腺组织中的表达

目的　研究Fas,Bcl 2抗原在Graves病 (GD)和桥本氏病 (HD)的表达 ,探讨细胞凋亡在自身免疫性甲状腺病 (AITD)发病中的作用。方法　粗针穿刺获得病人甲状腺组织标本 ,颈部手术时取正常甲状腺组织作为对照 ;采用SABC免疫组化方法原位观察Fas,Bcl 2抗原的表达。结果　两种AITD甲状腺细胞Fas抗原的表达均较正常对照增强 ,GDBcl 2抗原表达也较正常对照增强 ,HDBcl 2表达强度与正常对照无明显差异 ;GD与HD相比较 ,GD甲状腺细胞Fas,Bcl 2抗原表达均强于HD。在HD ,Fas抗原表达较Bcl 2表达明显增强 ,但在GD ,Fas抗原表达与Bcl 2表达强度无显著差异。结论　由Fas介导的细胞凋亡在HD发病中起重要作用 ,在GD ,Fas诱导细胞凋亡的作用可能被Bcl 2对抗。     

应用细菌与病毒的共生关系分离培养乙型肝炎病毒(简报)

<正> 乙型肝炎病毒尚未在体外分离培养成功。目前,用于临床血清学诊断及预防疫苗的乙型肝炎抗元,是从乙型肝炎病人或健康带病毒者的血液以及乙型肝炎病人的肝脏组织中提纯的。因此,它的成本昂贵,材料来源也满足不了实际需要。近几年来我们研究并证实了在某种甲型链球菌(以下简称甲链)感染的鸡胚里,接种流感病毒时,该病毒不仅能与甲链同时生     

神经干细胞的分离培养与鉴定

目的　分离培养新生鼠神经干细胞并获得细胞克隆 ,同时建立良好的传代方法。方法　取新生大鼠大脑室管膜、脑室周围及海马细胞 ,经消化及机械吹打后接种于加有N2添加剂及生长因子的DMEM/F12 培养基 ,悬浮培养 ;用含血清而不含生长因子的培养基贴壁培养 ,促使分化 ;最后用免疫细胞化学方法进行染色鉴定。结果　分离培养的细胞多聚集生长 ,并形成细胞克隆 ,可以传代 ;细胞为圆形或椭圆形 ,经鉴定为nestin抗原阳性 ;分化后细胞分别表达神经元、星形胶质细胞和少突胶质细胞特异性抗原。结论　分离培养的细胞具有自我更新和多向分化能力 ,表达神经干细胞的特异性抗原nestin ,是神经系统的干细胞。