人脐带血造血祖细胞生物学特性研究

人脐带血中含有较骨髓细胞更原始更早期的造血干／祖细胞群，使人们对脐血替代骨髓移植寄于极大的关注。本文通过造血祖细胞体外培养，观察来自人脐带血、外周血及骨髓的粒系祖细胞（CFU－GM）不同的生物学特性，将有助于对成人脐血移植中有关造血干／祖细胞扩增及移植后体内长期存活等问题的研究。材料和方法1标本采集脐带血来自本院产房，正常足月分娩后脐带静脉采血，肝素20U／ml抗凝。骨髓、外用血采自正常献髓者。2实验方法依照本室各系祖细胞体外培养常规方法[1]。培养体系：粒单系集落刺激因子（GM－CSF）20ug／L（日本）或人胎…     

系统性红斑狼疮患者的骨髓粒系祖细胞及肾上腺皮质激素对粒系祖细胞的影响

<正> 系统性红斑狼疮(SLE)患者往往伴有末梢血白细胞减少,据Dubois报告,其发生率占42.6％。SLE患者发生白血球减少的机制还有很多地方不清楚,特别是对患者粒系祖细胞的分化,增殖过程的研究,几乎还是空白点。本文探讨了SLE患者骨髓粒系祖细胞形成的集落以及强的松龙对集落形成的影响。     

胎肝无细胞悬液对脐血CD34~(+)细胞体外扩增的研究

采用两步法分离出脐血CD34＋细胞，比较研究了胎肝无细胞悬液及IL3＋IL6＋GM－CSF＋EPO两种情况下脐血CD34＋细胞的体外扩增。结果表明胎肝无细胞悬液对粒系-单极系祖细胞（Granulocyte－macrophagecolony－formingunit，CFU－GM），红系暴式集落形成单位（Burst－formingunitoferythroid，BFU－E），多向祖细胞（Mixedcolony-formingunit，CFU－MIX）3种集落的扩增效果明显优于4种造血因子联合组，差异具有统计学意义（P＜0.01）。脐血造血细胞扩增对于成人脐血移植有重要意义。胎肝无细胞悬液的扩增成功表明其可代替多种造血生长因子联合应用，并可作为一种效果优良、价廉的扩增剂。     

集落刺激因子治疗他巴唑致粒细胞缺乏症疗效观察

目的　探讨他巴唑致粒细胞缺乏症 (简称粒缺 )的更有效的治疗方法。方法　回顾性分析比较了本院十余年来收治的2 9例因服他巴唑而致粒缺患者用不同治疗方法的效果。 2 9例中 ,男 4例 ,女 2 5例。年龄 2 5～ 6 0岁。所有患者服他巴唑前血白细胞均正常。病史中无放射线、毒物、化学和其他药物接触史。既往无其他引起白细胞减少的疾病。 2 4例 (82 .8% )服他巴唑≥ 30mg·d-1,5例 (17.2 % )服他巴唑 2 0mg·d-1。 2 9例粒缺出现于服他巴唑后 2～ 2 2周 ,平均 (7.72± 4 .2 7)周 ,其中 2 3例 (79.3% )发生在服药后 4～ 12周。粒缺发生后均行骨髓穿刺 ,骨髓像均呈现粒系细胞增生低下 ,其中 2 5例 (86 .2 % )中幼粒阶段以下显著减少 ,4例 (13.8% )各阶段粒细胞几乎找不到 ,红系和巨核系大致正常。粒缺发生后立即停用他巴唑 ,隔离防护 ,大量广谱抗生素防治感染及其他对症支持治疗基础上 ,加用升白细胞药物。根据所用升白细胞药物不同 ,分为两组。组 1:共 18例 ,口服升白细胞药物 (利血生、鲨甘醇、维生素B4等 ) ;组 2 :共 11例 ,重组人粒细胞集落刺激因子(rhG CSF) /重组人粒 巨噬细胞集落刺激因子 (rhGM CSF) (惠尔血、吉姆欣、生白能 ) ,15 0～ 30 0 μg·d-1,皮下注射 ,每 1～ 2d复查血常规 ,白细胞恢复正?     

人白细胞介素3的基因结构及其生物活性

<正> 人白细胞介素3(hIL-3)又名多向克隆刺激因子(multi-CSF),是活化T细胞、NK细胞产生的一类糖蛋白分子,可刺激骨髓多能干细胞增殖,并分化形成粒系、红系、单核巨噬系及巨核系等定向祖细胞,对血源细胞系的成熟具有重要作用。近年来,     

慢性肾功能衰竭患者血清对红系祖细胞的抑制及红细胞生成刺激素的疗效

本文探讨了慢性肾功能衰竭患者自身血清对骨髓红系祖细胞的抑制作用及红细胞生成刺激素(erythropoietin EPO)的临床疗效。自身血清加入培养体系与胎牛血清加入组比较,半数病例集落数减少,自身血清用活性炭吸附后,这种造血抑制作用被解除。EPO治疗后的血色素增加程度和自身血清的造血抑制活性呈相关性,可见,如果能设法有效地去除患者体液中的造血抑制因子,EPO的临床疗效就能进一步提高。     

兔动员外周血间充质干细胞集落形成能力与神经元诱导分化研究

目的研究动员后兔外周血间充质干细胞(PBMSCs)的存在频率,并对PBMSCs进行神经元诱导分化鉴定。方法采用粒细胞集落刺激因子(G-CSF)皮下注射动员,结合密度梯度离心和贴壁培养法分离、培养兔外周血样品中的PBMSCs,利用集落形成率分析动员兔PBMSCs的存在频率,并对PBMSCs的神经元分化能力进行体外诱导鉴定。结果动员后的PBMSCs原代培养24h后,可见较多短梭形及多角形贴壁细胞,3～4d后出现集落样生长,传代培养的PBMSCs形态均一、呈长梭形漩涡状生长;未动员的外周血样品中的贴壁细胞少,集落形成少,且易老化,无法传代。集落形成率实验显示,动员后的PBMSCs在每百万外周血单个核细胞中有2.8～10.8个;而未动员组PBMSCs仅有0～3个。免疫细胞化学染色显示,PBMSCs经神经诱导7d后其神经元特异性烯醇化酶(NSE)、神经元特性核蛋白(NeuN)染色阳性。结论动员剂可提高兔外周血中的PBMSCs含量,所获取的PBMSCs具备神经元分化能力。     

虾青素预处理对体外氧化应激诱导内皮祖细胞凋亡的保护作用

目的探讨虾青素对体外氧化应激诱导的人外周血内皮祖细胞凋亡的影响及机制。方法体外培养人外周血单核细胞源的内皮祖细胞,分为正常对照组、模型组(叔丁基过氧化氢100μmol/L)、虾青素+叔丁基过氧化氢(虾青素0.1、1、10nmol/L预处理24h后,再加终浓度为100μmol/L的叔丁基过氧化氢溶液继续培养6h)组。MTT法检测细胞存活率;DAPI染细胞检测细胞凋亡率;DCFH-DA法检测细胞内活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平;比色法检测半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(Caspase-3)活性;JC-1法测定线粒体膜电位。结果与正常对照组比较,叔丁基过氧化氢(100μmol/L)能明显造成内皮祖细胞凋亡(P<0.05)。虾青素可降低叔丁基过氧化氢引起的内皮祖细胞凋亡,表现为细胞凋亡率减少(P<0.05),线粒体膜电位增加,Caspase3表达减弱。结论虾青素对叔丁基过氧化氢诱导的内皮祖细胞凋亡具有保护作用,其机制可能与保护线粒体功能有关。     

TGF-β1对成人骨髓CD105~+间充质干细胞增殖与分化的影响

目的分离并鉴定成人骨髓间充质干细胞(mesenchymalstemcells,MSCs),研究TGFβ1对骨髓MSCs增殖与分化的影响。方法分离成人骨髓单个核细胞;MACS磁珠分选CD105+细胞;FACS检测其免疫表型;诱导分选的CD105+细胞向脂肪及成骨细胞分化,油红O染色、VonKossa染色及RTPCR检测脂肪细胞及成骨细胞;观察TGFβ1对分选出的CD105+细胞分化与增殖的影响;免疫荧光染色检测诱导后的脂肪细胞CD105的表达情况;MTT法检测TGFβ1对CD105+细胞增殖的影响。结果成人骨髓来源的CD105+细胞体外可向脂肪及成骨细胞分化;在向脂肪细胞分化过程中,加入1～50ng/mLTGFβ1后,成脂诱导体系中无脂肪细胞出现;在向成骨诱导过程中,加入20ng/mLTGFβ1后,钙化基质沉淀明显降低;在脂肪诱导体系中,MTT染色检测显示TGFβ1对CD105+细胞的增殖有明显促进作用(P<0.05)。结论TGFβ1抑制成人骨髓源CD105+MSCs向脂肪及成骨细胞分化,在向脂肪诱导过程中,TGFβ1促进MSCs的增殖。     

血管内皮祖细胞与VEGF对增生性糖尿病视网膜病变新生血管形成的影响

目的检测增生性糖尿病视网膜病变(PDR)患者纤维血管膜标本中血管内皮祖细胞和血管内皮生长因子(VEGF)的表达,探讨二者与PDR发生发展的关系及相互作用。方法收集10例玻璃体手术中剥除的PDR膜,以10例增生性玻璃体视网膜病变(PVR)膜及1例人视网膜为对照,进行组织形态学观察,免疫组织化学染色检测血管内皮祖细胞数及VEGF的表达,并进行统计学分析。结果 PDR膜包括中央部无血管区,间有少量细胞的纤维组织区和周边部富细胞区,PVR膜则为排列不规则的细胞散在分布于细胞外间质。10例PDR膜中均发现血管内皮祖细胞(5.90±1.83)个,而10例PVR膜中仅有1例发现血管内皮祖细胞(0.10±0.32)个,人视网膜未见血管内皮祖细胞。PDR膜VEGF表达明显高于对照组,差异有统计学意义(P<0.001),且PDR膜中血管内皮祖细胞数与VEGF的表达呈现正相关性。结论血管内皮祖细胞与VEGF均参与了PDR新生血管的形成,二者可能具有协同作用。     

Toxicity to the normal hemocytes by ALA-PDT for the ex vivo purging of hematopoietic stem cell grafts

Objective To study the toxic effects of 5-amionlevulinic acid-based photodynamic therapy (ALA-PDT) on human peripheral blood mononuclear cells (PBMCs), cord blood mononuclear cells (CBMCs) and peripheral blood stem cells (PBSCs), and furthermore, to understand the possible causes of this response. Methods We used MTT assay to detect the survival rate of PBMCs, CBMCs and PBSCs after treated by ALA-PDT under the optimum experiment conditions with U937 as control;Annexin V-FITC/PI was used to detect the pattern of cell death induced by ALA-PDT. By using flow cytometry, we detected intracellular PpIX fluorescence intensity. Results After ALA-PDT treatment the survival rate of PBMCs had no significant change;however in PBSCs and CBMCs, the survival rate reduced to 70%, and the survival rate of leukemia cell U937 was the lowest, about 30%. After incubation with ALA,except for PBMCs, intraceUuiar PplX fluorescence intensity of the other two kinds of normal haemocytes and U937 increased obviously. These results combined with the flow cytometry suggested that the main pattern of cell death here was apoptosts. Conclusion Under the optimum experiment conditions, ALA-PDT has a slight effect on normal haemocytes but excellent depletions of leukemia cells. Therefore, it can effectively purify autologons bone marrow or stem cell grafts.     

胎盘、脐血和骨髓来源的贴壁细胞的生物学特性的比较

目的探讨人胎盘、脐血和骨髓来源的贴壁细胞的分离培养和生物学特性,为间充质干细胞(MSC)的选择和应用提供依据。方法采用酶消化法分离人胎盘组织,60 g/L羟乙基淀粉和密度梯度离心两步法分离脐血单个核细胞,密度梯度离心法分离骨髓单个核细胞,分别进行贴壁培养,观察不同来源MSC的生长、增殖和表面标志的表达并做比较。结果胎盘来源的贴壁细胞为一种混合性细胞,脐血单个核细胞体外培养可以获得形态不均一的贴壁细胞,二者在生长规律和形态学特征上与骨髓基质相比有一定差异性,CD106、CD44在三种细胞均有表达。结论胎盘和脐血来源的贴壁细胞具备间充质干细胞的基本特征。     

CD_3 McAb联合rhIL-2激活的骨髓对白血病细胞杀伤净化作用的研究

目的　探讨CD3单克隆抗体 (CD3McAb)联合重组人白细胞介素 2 (rhIL 2 )激活的骨髓对白血病细胞的杀伤及净化作用。方法　用MTT法检测激活骨髓的细胞毒作用 ;半固体集落培养法观察激活骨髓CFU GM水平和对白血病细胞的净化作用 ;采用间接荧光法测定激活骨髓的免疫标记。结果　CD3McAb与rhIL 2联合激活的骨髓对白血病细胞株K5 6 2、HL 6 0均有明显的杀伤净化作用 ,且优于rhIL 2或CD3McAb单用组 (P <0 .0 5或P <0 .0 1)。rhIL 2和 (或 )CD3McAb对激活骨髓的CFU GM水平无明显影响。CD3McAb +rhIL 2激活的骨髓 ,与活化前及rhIL 2或CD3McAb组相比 ,CD3+ 、CD8+ 、CD1 9+ 、CD2 5+ 、CD38+ 、CD56+ 细胞显著升高。结论　CD3McAb能增强rhIL 2激活的骨髓对白血病细胞的杀伤及净化作用     

低增生性急性白血病的诊断与治疗(附9例报告)

本文分析了低增生性急性白血病(HAL)与胃烟性白血病(SAL)低原始细胞性白血病(OBL)及MDS的异同点,提出HAL的诊断标准:①初诊病例骨髓呈灶性增生减低或重度减低,原+早(幼)≥本系细胞30%;②骨髓活检印片有核细胞增生亦呈减低现象,病理切片示造血组织减少。应取消SAL及OBL的命名,以防止分类上的混乱。     

异基因骨髓移植治疗急性白血病1例报告

报道急性早幼粒细胞白血病缓解半年,进行异基因骨髓移植1例。预处理用环磷酰胺加全身X线照射。移植其弟的骨髓。移植后住层流无菌室,全环境保护等。术后40天血象及骨髓象恢复正常。术后210天复查红细胞同功酶,证明供者骨髓被植活。随访1年5个月无复发。     

生长因子促进牙周骨缺损再生的实验研究

目的　通过组织学观察转化生长因子 β1 (TGF β1 )对豚鼠牙周骨缺损的修复作用。方法将 1 8只实验豚鼠随机分为实验组和对照组 ,在两组动物 1 1 牙周制备高 3～ 5mm ,宽 2mm的骨缺损区 ,实验组骨缺损区填入浸有TGF β1 的明胶海绵块 ,对照组只填入明胶海绵块。术后 1周、2周、3周、1月、3月、6月处死动物进行组织学观察。结果　①实验组 :术后 1周 ,骨缺损区周围有炎性细胞浸润 ,可见牙槽骨变性坏死 ;术后 2周炎性渗出明显吸收 ,成纤维细胞、毛细血管生长活跃 ,可见骨样及少量骨组织 ;术后 1月见新生骨组织范围扩大 ,钙化程度加强 ;术后 3～ 6月 ,缺损区完全由新骨充填 ,并逐渐改建成骨小梁不断增多的正常骨组织。②对照组 :术后 1周骨缺损区周围可见大量炎性细胞浸润 ;术后 2周见炎性渗出吸收 ,成纤维细胞、毛细胞血管生长活跃 ;术后 1～ 6月见骨缺损区周围新骨生成逐渐增多 ,但缺损主要以纤维结缔组织充填。同实验组形成鲜明对照。结论　TGF β1 可诱导牙槽骨再生     

胎鼠与成鼠脊髓蛋白质组图谱的构建及其差异分析

目的初步建立并优化用于脊髓组织蛋白质组分析的双向电泳技术。应用双向电泳技术建立胎鼠与成鼠脊髓蛋白质组图谱,并对两者的差异进行比较,从整体水平上探究成鼠脊髓丧失再生能力的蛋白质基础。方法以大鼠脊髓为研究对象,应用以固相pH梯度等电聚焦为第一向、均一水平十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳为第二向的双向电泳体系,对样品制备、电泳参数、染色等技术环节中影响双向电泳分辨率的关键因素进行一系列的优化。采用ImageMaster 2D Elite图像分析软件对获得的胎鼠与成鼠脊髓蛋白质组2-DE图谱进行图像分析,比较两者在蛋白质组表达上的差异。结果在此优化的实验条件下,获得了质量较好的脊髓组织蛋白质组双向电泳图谱。胎鼠脊髓蛋白质组图谱经图像分析后,可检测到838个蛋白点,成鼠脊髓蛋白质组图谱可检测到847个蛋白点。对胎鼠与成鼠脊髓蛋白质组匹配差示图谱的分析发现,两者间存在813个差示蛋白。结论通过对各种条件的优化,初步建立了脊髓组织2-DE技术。对胎鼠与成鼠脊髓蛋白质组的比较发现,两者存在明显差异。胎鼠与成鼠脊髓蛋白质组差示图谱的建立,为进一步筛选、鉴定与脊髓再生能力丧失有关的蛋白,并探究其作用机制打下了基础。     

盐酸胍发新诱发小鼠骨髓细胞及地鼠肾细胞染色体畸变的研究

应用盐酸胍发新诱发小鼠骨髓细胞和地鼠肾细胞(BHK)染色体畸变效应研究。结果表明当1/4、1/8和、l/16 LD_(50)盐酸胍发新腹腔注射于小鼠体内时,骨髓细胞内染色体畸变频率没有增加。在8.5、4.25和2 .125mg/kg重试验中骨髓细胞畸变频率分别为0.014、0.198和0.114;而对照组为0.183.没有显著差异。当用0.5 mg、0.3mg 、0.15 mg盐酸胍发新处理培养的BHK细胞时频率是0.08、0.05和0.07,对照组是0 .05。经统计学分析试验组和对照组无显著差异(P>0.05).结果表明盐酸胍发新未见遗传危害。     

复合人工骨修复股骨头骨缺损的影像学研究

目的　研究用复合人工骨治疗股骨头坏死的效果。方法　建立双侧股骨头内骨缺损模型 ,并分为 4组 :bBMP 胶原 珊瑚复合人工骨组 (5侧 )、肌骨瓣组 (5侧 )、单纯珊瑚组 (4侧 )、对照组 (1 4侧 ,为以上各组的对侧 )。造模及植入后定时行X线、核素骨显像、MRI及CT检查。结果　①核素骨显像示 :6周及 1 2周 ,Ⅰ组股骨头核素摄取量静态相头 /干比升高 ,但血流相及血池相不升高。②MRI:1 0周示Ⅰ组骨缺损内多量新生骨形成 ,Ⅳ组骨缺损内囊腔中为脂肪性信号 ,周围为低信号的硬化带。③拍片及CT示 :1 4～ 1 6周 ,Ⅰ组骨缺损大多完全闭合 ,珊瑚已吸收 ,其余各组骨缺损部分残留 ,Ⅳ组骨缺损囊壁硬化带形成。结论　该复合人工骨有较强的传导成骨及诱导成骨作用 ,是修复股骨头骨缺损的良好移植材料 ,但它不能改善缺血坏死股骨头的血供。     

骨髓间质干细胞的分离培养与鉴定

目的建立兔骨髓间质干细胞(MSCs)的体外分离纯化、扩增和鉴定的方法,为MSCs的进一步诱导分化和应用奠定基础。方法抽取兔胫骨骨髓,密度梯度离心,得到骨髓单个核细胞,接种后形成单层贴壁细胞,经胰蛋白酶消化后传代培养扩增,倒置显微镜下观察原代和传代细胞的生长特性。通过免疫荧光组织化学、流式细胞分析和透射电镜鉴定细胞。结果分离培养的骨髓MSCs贴壁、呈梭形,原代细胞呈集落生长,7～10d达到融合,传代后增殖速度加快;骨髓MSCs表达CD90,反复传代后表达效率增高,不表达CD34;透射电镜可见细胞表面有大量的绒毛突起,胞浆中有丰富的粗面内质网和线粒体,核大,形态不规则。结论密度梯度离心结合贴壁法,以及消化传代能有效分离纯化和扩增骨髓MSCs,分离培养的细胞具有骨髓MSCs的基本表型和特性。