全反式维甲酸和干扰素-γ协同作用对人胶质瘤细胞系SHG-44增殖、凋亡及侵袭力的影响

目的　研究全反式维甲酸 (ATRA)和干扰素 γ(IFN γ)联合应用对胶质瘤细胞增殖、凋亡及侵袭力的协同影响。方法　ATRA和IFN γ共同处理人胶质瘤细胞系SHG 4 4 ,MTT比色法检测细胞增殖能力 ,流式细胞仪检测瘤细胞周期分布和凋亡率 ;根据瘤细胞穿过Matrigel胶的能力 ,检测瘤细胞体外侵袭力 ;以ATRA、IFN γ单独处理的细胞作为对照。结果　胶质瘤细胞经ATRA和IFN γ联合处理后增殖能力下降 ,凋亡率增加 ,细胞阻滞于G1期 ,其侵袭性降低 ,与单独处理组相比较差异有显著性 (P <0 .0 5 )。结论　ATRA和IFN γ联合应用具有协同抑制人胶质瘤细胞系SHG 4 4恶性表型和诱导凋亡的作用     

重组人松弛素-2对肝星状细胞增殖、Ⅰ型胶原合成及TGF-β_1与CTGF mRNA表达的影响

目的在细胞水平研究松弛素的抗肝纤维化作用,并初步探讨其分子机制,为肝纤维化的治疗提供实验依据。方法体外培养大鼠肝星状细胞(HSC-T6),分别用20、50、100ng/mL重组人松弛素-2(recombinant human relaxin-2,RLX-2)干预,采用噻唑蓝(MTT)比色实验检测RLX-2对HSC-T6增殖的影响,双抗体夹心酶联免疫吸附法(ELISA)检测对照组及RLX-2作用48h后的细胞培养基上清液Ⅰ型胶原水平,利用逆转录酶-聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测药物干预48h的结缔组织生长因子(CTGF)、转化生长因子-β1(TGF-β1)mRNA表达情况。结果 RLX-2对HSC的增殖具有抑制作用,可降低HSCⅠ型胶原水平,RLX-2抑制HSC的CTGF mRNA表达,对HSC的TGF-β1mRNA表达无明显影响。结论 RLX-2可能通过抑制体外培养大鼠HSC细胞的增殖、Ⅰ型胶原及CTGF mRNA的表达而发挥抗大鼠肝纤维化作用。     

重组人促红细胞生成素对兔缺血再灌注损伤视网膜结构的保护作用

目的 探讨皮下注射重组人促红细胞生成素(recombinant human erythropoietin, rhEPO)对兔眼缺血再灌注损伤视网膜结构的保护作用.方法 24只健康日本大耳白兔任选一眼造成视网膜缺血再灌注损伤模型(模型组,共24眼),对侧眼不作任何处理作为对照组(24眼).另24只健康日本大耳白兔任选一眼造模(EPO组,共24眼),于造模前第3天及造模结束时每只兔皮下注射rhEPO 100 IU/kg各1次.于造模后第1、3、7、14天分别摘除每组各6只兔眼,观察视网膜组织结构形态、测量内层视网膜(inner retina layer, IRL)厚度并计数视网膜节细胞(retinal ganglion cell, RGC).结果 自造模后第3天开始,模型组较对照组RGC数量减少、IRL厚度变薄(P<0.05,P<0.01).自造模后第3天开始EPO组IRL较模型组厚(P<0.05,P<0.01),自造模后第7天开始EPO组RGC数量较模型组多(P<0.05).结论 rhEPO可以显著改善缺血再灌注损伤兔眼视网膜结构,可能成为一种神经缺血再灌注损伤的保护剂.     

转化生长因子-β_1抗体对人翼状胬肉成纤维细胞增殖及TGF-β_1-Smad4信号转导通路的影响

目的探讨转化生长因子-β1(TGF-β1)抗体对体外培养的翼状胬肉成纤维细胞增殖的抑制作用及对TGF-β1-Smad4信号转导通路的影响,评估其在翼状胬肉发病机制中的作用。方法人翼状胬肉切除后,体外培养其成纤维细胞并传至4~6代时,分别用6.25、12.5、25、50mg/mL TGF-β1抗体处理24、48、72h,采用MTT法检测成纤维细胞的生长抑制率,RT-PCR检测TGF-β1mRNA表达,Western blot检测Smad4蛋白的表达。所得数据采用SPSS19.0统计软件处理。结果 TGF-β1抗体可不同程度抑制成纤维细胞的增殖;TGF-β1抗体处理组TGF-β1mRNA的表达明显低于对照组,且不同浓度组间差异有统计学意义(P<0.05),随着浓度增大和作用时间延长,TGF-β1抗体处理组TGF-β1 mRNA的表达量呈逐渐降低趋势。不同浓度的TGF-β1抗体对Smad4的蛋白表达具有明显增强作用,且各组间差异有统计学意义(P<0.05)。结论 TGF-β1抗体对人翼状胬肉体外培养的成纤维细胞生长具有明显抑制作用,其可能通过调节TGF-β1和Smad4的表达而实现。     

IL-18基因联合二萜生物碱对舌鳞癌细胞的增殖抑制与促凋亡作用

目的探讨人IL-18基因联合二萜生物碱对舌鳞癌细胞Tscca的增殖抑制与促凋亡作用。方法构建pEGFPN3-IL-18质粒,转染舌鳞癌细胞Tscca。荧光显微镜下观察质粒的转染效率;MTT检测pEGFPN3-IL-18联合二萜生物碱对舌鳞癌细胞Tscca生长的影响;流式细胞术检测细胞凋亡情况;蛋白质免疫印迹法检测细胞信号调节激酶Akt/p-Akt的蛋白水平。结果转染pEGFPN3-IL-18的舌鳞癌细胞Tscca较未转染细胞凋亡数增加,差异有统计学意义(P<0.05);0.2、0.4、0.6mg/mL二萜生物碱培养舌鳞癌细胞,随浓度增加,细胞凋亡数增多,差异有统计学意义(P<0.05);IL-18与二萜生物碱联合对Tscca细胞作用48h后,较单独使用二萜生物碱的增殖抑制作用明显,且呈浓度依赖性,差异有统计学意义(P<0.05);IL-18联合二萜生物碱还可剂量依赖性地降低p-Akt的蛋白水平。结论pEGFPN3-IL-18联合二萜生物碱对舌鳞癌细胞Tscca有协同抑制作用。     

NT4p53(C22)Ant融合基因重组腺病毒的构建及对肝癌细胞的杀伤作用

目的构建编码融合基因NT4p53(C22)Ant嵌合肽的重组腺病毒表达载体,并研究其对人肝癌HepG2细胞的杀伤作用。方法使用分子克隆技术,通过同源重组获得重组腺病毒rAVV-NT4p53(C22)Ant,收集上清、大量扩增并测定其滴度。感染人肝癌HepG2细胞,采用免疫组化法检测p53表达,MTT实验、流式细胞仪观察rAAVNT4p53(C22)Ant对肿瘤细胞的杀伤作用。结果成功构建重组腺病毒表达载体,感染人肝癌HepG2细胞后p53表达率为(44.88±2.45)%;MTT检测显示,细胞存活率随作用时间延长明显降低,与空病毒组及对照组比较差异均有统计学意义(P<0.05),流式细胞仪检测显示G0/G1期细胞比例及凋亡细胞较空病毒组及对照组增加。结论构建的NT4p53(C22)Ant重组腺病毒在肝癌细胞中能有效表达,对肝癌HepG2细胞有抑制增殖和促进凋亡的作用。     

NT4p53(N15)Ant重组腺病毒对肝癌细胞腹腔种植瘤的治疗作用

目的研究NT4p53(N15)Ant融合基因重组腺病毒预先感染ICR小鼠腹腔后,对肝癌细胞株H22腹腔种植瘤的治疗作用。方法将16只ICR小鼠随机平均分成2组,分别于腹腔内预先感染Ad-NT4p53(N15)Ant(治疗组)及等量空病毒(对照组)。将H22细胞悬液接种于小鼠腹腔,建立小鼠腹腔泛发性种植瘤模型。根据小鼠生长情况、生存期以及腹水瘤细胞形态、细胞凋亡率和小鼠腹腔内瘤体重量等结果,评价Ad-NT4p53(N15)Ant对H22细胞种植瘤及癌性腹水的治疗效果。结果成功构建了小鼠腹腔泛发性种植瘤动物模型。与对照组相比,Ad-NT4p53(N15)Ant组小鼠生存期延长、腹水的产生时间延迟,腹水中多核巨细胞减少,细胞凋亡及坏死的比率升高,腹腔内瘤体的质量减少。结论 Ad-NT4p53(15)Ant可有效抑制H22肝癌细胞腹腔移植瘤生长,延迟腹水形成,诱导体内腹水瘤细胞凋亡及坏死,延长小鼠生存期。     

雪莲黄酮总甙对人外周血单个核细胞功能的影响

研究了雪莲黄酮总甙对人外用血单个核细胞（PBMC）功能的影响，结果发现雪莲黄酮单独应用可诱导PBMC细胞毒活性，其浓度在0．6μg／ml时，作用最明显（p＜0．05）。且可显著增强亚适剂量HrIL－2诱导的PBMC的细胞毒活性，而对大剂量IL－2的诱导作用没有影响。