微量PCR法快速鉴定重组质粒

微量ＰＣＲ法快速鉴定重组质粒郭晏海，赵君庸，苏成芝，闫小君，肖乐义（西安生物化学教研室西安７１００６１）在分子生物学技术中，应用菌落原位杂交筛选目的基因的重组ＤＮＡ，由于它敏感而且特异性较高，已逐渐成为一种较为普遍的方法。但是该方法费时而且步骤繁琐，...     

一种简单快速的血清HBV－DNA模板的制备方法

一种简单快速的血清ＨＢＶ－ＤＮＡ模板的制备方法党双锁，徐仓宝，歧天茂，顾晓慧（医学分子生物学研究室西安７１００６１）ＰＣＲ技术已被广泛用于检测血清乙肝病毒（ＨＢＢ）ＤＮＡ［１］，以便确定是否有ＨＢＶ感染和有无传染性。在ＰＣＲ中，模板制备至关重要，优质...     

人白细胞介素-2 cDNA导入对卵巢癌耐药细胞株耐药性的逆转

为了构建ｐｃＤＮＡ－ＩＬ－２真核表达质粒，并探讨白细胞介素－２（ＩＬ－２）ｃＤＮＡ导入对顺铂诱导的卵巢癌耐药细胞株耐药性的影响。我们采用ＰＣＲ技术扩增人ＩＬ－２ｃＤＮＡ片段，构建ｐｃＤＮＡ－ＩＬ－２真核表达质粒。导入顺铂诱导的人卵巢癌耐药细胞株，观察其耐药性的改变。结果成功构建了ｐｃＤＮＡ－ＩＬ－２真核表达质粒，并在Ｃｏｓ－７细胞高效表达，导入卵巢癌耐药细胞后其对顺铂的敏感性显著升高。说明转导ｐｃＤ－ＮＡ－ＩＬ－２基因的人卵巢癌耐药细胞株其耐药性有明显逆转，而且ＩＬ－２亦可逆转非ｍｄｒ１依赖的耐药性     

一种改良式质粒DNA提取方法的建立与应用

目的建立一种稳定、可靠的质粒DNA提取改良方法,探讨其在分子生物学实验研究中的应用价值。方法将含有目的质粒的菌株扩增后,运用改良后的碱裂解法进行质粒DNA小量提取,微量核酸仪测定提取质粒DNA的产量及纯度;采用琼脂糖凝胶电泳、内切酶酶切及质粒转染真核细胞鉴定提取质粒DNA的质量及转染效率。结果改良式质粒提取方法获得质粒DNA产量为3.2 mg/L菌液,A260/280=1.91;内切酶酶切完全;质粒DNA以超螺旋结构为主;真核细胞转染效率为20%左右。结论改良式质粒DNA抽提方法操作简单、实用,获得质粒DNA产量多、质量高,能达到分子生物学常规实验的要求。     

血清中结核菌DNA的PCR扩增及其意义

血清中结核菌ＤＮＡ的ＰＣＲ扩增及其意义王香玲，李妙羡，何谦，田增爵（西安第二附属医院检验科西安７１０００４）近年来应用ＰＣＲ技术诊断结核病的报道越来越多，但用血清作为标准来源较少，为此我们对临床确诊的６３例结核病患者的血清用ＰＣＲ技术扩增其结核菌特异...     

DNA水平产前诊断先天性遗传性疾病研究进展

ＤＮＡ水平产前诊断先天性遗传性疾病研究进展李小明综述曹缵孙审校（法医学系法生物学教研室西安７１００６１）分子生物学的发展已使人们对人类疾病的许多方面的认识发生了变革。随着ＤＮＡ诊断学，即在核酸水平上分析疾病的发展，不久将为与遗传疾病、恶性肿瘤及感染性...     

PCR法区别HBVRC－和CCC－DNA

乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）的基因组为一松弛环状、部分双链的ＤＮＡ（ＲＣ－ＤＮＡ）。在其负链的５＇与３＇端之间存在一缺口。当ＨＢＶ进入宿主细胞后，基因组转变为共价闭合环状ＤＮＡ（ＣＣＣ－ＤＮＡ）。我们根据ＨＢＶＲＣ－和ＣＣＣ－ＤＮＡ的结构特点，设计了ＰＣＲ区别ＲＣ－和ＣＣＣ－ＤＮＡ。实验表明，该方法可有效地区别两种形式的ＨＢＶＤＮＡ。     

核糖酶与肿瘤基因治疗

核糖酶与肿瘤基因治疗司履生（西安免疫病理学研究室７１００６１）已经公认，肿瘤的发生是一个涉及多个癌基因活化和／或抑癌基因失活的多阶段过程，基于这一认识，加上基因工程技术的巨大成就，一个试图将有关基因的ｃＤＮＡ或其片段（寡核苷酸）导人肿瘤细胞，以纠正其...     

福氏2a志贺菌301株染色质基因文库的构建

目的　构建福氏 2a志贺氏菌 3 0 1株染色质DNA基因文库 ,为下一步全基因组序列测定打下基础。方法　Murry法提取福氏 2a志贺氏菌染色质DNA ,采用鸟枪法策略 ,分别经 8种限制性内切酶消化后克隆至载体质粒中 ,并经双脱氧链末端终止法测序后计算重组质粒重复率。结果　Murry法提取福氏 2a志贺氏菌染色质DNA大小为 3 0Kb以上 ,共构建 86 3 2个重组质粒 ,质粒重复率为 1 %。结论　本研究在国际上首次成功构建了福氏 2a志贺氏菌株染色质DNA基因文库 ,文库全长为福氏 2a志贺氏染色质的 6倍 ,已足够全基因组序列测定所需。     

纸层析发校法检测结核杆菌PCR扩增产物

目的 建立一种新的快速纸层析杂交技术，用于特异性检测带有生物素标记的合酶链式反应（ＰＣＲ）扩增产物。方法 将特异性捕获探针固定在聚酯砜膜上，扩增产物置膜一端，经毛细作用，带有生物素标记的特异性ＤＮＡ分子固定于反应区，非特异性分子被洗脱，杂交物通过链霉亲和素硷性磷酸酶偶联物及底物（ＢＣＩＰ－ＮＢＴ）显色后判断结果，结果 这一技术允许在２５ｍｉｎ内交将结核杆菌经ＰＣＲ扩增后的ＤＮＡ１０ｐｇ检出，结论     

硝苯吡啶和维拉帕米治疗肝纤维化细胞学研究

研究硝苯吡啶和维拉帕米对人胚肺在纤维细胞的ＤＮＡ和胶原合成的影响，从细胞水平评价钙拮抗剂防治器官纤维化并提供实验依据。方法采用ＭＴＴ比２色法，＾３Ｈ－ＴｄＲ和＾３Ｈ－脯氨酸掺入法测定细胞增殖，ＤＮＡ合成和胶原合成。     

pcDNA3.1(+)/caveolin-1真核表达质粒的构建及其在MCF-7乳腺癌细胞株中的表达

目的明确正常组织和人乳腺癌细胞株MCF-7中caveolin-1的表达情况,构建pcDNA3.1(+)/caveolin-1表达质粒,并鉴定其表达。方法 RT-PCR法检测9种正常人体组织及人乳腺癌细胞株MCF-7中caveolin-1基因的扩增情况;Western blotting法检测MCF-7细胞中caveolin-1蛋白的表达情况。设计克隆引物和表达引物,RT-PCR法扩增caveolin-1基因,用EcoRⅠ+XbaⅠ内切酶消化回收PCR产物和质粒pcDNA3.1(+),连接后构建pcDNA3.1(+)/caveolin-1重组表达质粒。挑选pcDNA3.1(+)/caveolin-1转染感受态细菌后的单菌落进行PCR鉴定,阳性菌落培养后提取质粒行酶切鉴定及测序鉴定。瞬时转染MCF-7细胞后Western blotting检测caveolin-1蛋白的表达情况。结果①9种正常组织中均有caveolin-1基因扩增,MCF-7细胞中无caveolin-1基因扩增且无蛋白表达;②pcD-NA3.1(+)/caveolin-1重组表达质粒转染MCF-7细胞后caveolin-1蛋白表达良好。结论成功构建了pcDNA3.1(+)/caveolin-1重组表达质粒,瞬时转染乳腺癌MCF-7细胞后caveolin-1表达稳定。     

用PCR法检测胸液中结核杆菌DNA

利用聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术检测了３２例结核性渗出性胸膜炎和２０例非结核性疾病患者胸液中结核杆菌的６５ＫＤａ抗原蛋白编码基因的特异ＤＮＡ片段。结果表明，其检出率为７８．１３％，并具高度特异性。提示ＰＣＲ扩增ＤＮＡ技术对结核性渗出性胸膜炎是高度敏感和特异的早期、快速诊断方法。     

SSH法获取大鼠小脑特异表达cDNA片段

目的 获取大鼠小脑特异表达的ｃＤＮＡ序列,比较ＳＳＨ方法的特点。方法 以大鼠大脑和脑干ｍＲＮＡ逆转录ｃＤＮＡ作为ｄｒｉｖｅｒ（驱动）ｃＤＮＡ,大鼠小脑ｍＲＮＡ逆转录ｃＤＮＡ作为Ｔｅｓｔｅｒ（测试）ｃＤＮＡ,经抑制性消减杂交法,去除与大脑及脑干相同的ｃＤＮＡ,从而获得大鼠小脑特异表达基因。然后克隆制备成大鼠小脑特异表达ｃＤＮＡ文库。结果 经消减杂交、克隆,挑选出３２个阳性质粒。最后用反Ｎｏｒｔｈｅｒ     

公交车行驶工况开发过程中试验线路的提取研究

提出了一种公交车实际行驶工况开发过程中代表性试验线路的提取方法，通过对广州市公交车代表性试验线路的提取，阐述了代表性试验线路的提取过程，通过对结果的分析，验证了这种代表性试验线路提取方法的合理性和科学性．     

23例急性重症病毒性肝炎的直接死因探讨

２３例急性重症病毒性肝炎的直接死因探讨谢雅琴，刘清珍（西安第一临床医学院传染病学教研室西安７１００６１）病毒性肝炎是严重危害人民生命健康的一种常见传染病，其中１％～３％的病例可发展为重症肝炎。而急性重症肝炎病情凶险，进展迅速，治疗困难，病死率很高，现...     

企业快讯

中铁电气化局西安电化公司中标西安地铁一号线供电系统工程 10月14日，从西安建设工程交易中心传来喜讯：中铁电气化局西安电化公司中标西安地铁一号线后卫寨至纺织城段一期供电系统工程。这是继公司2009年中标西安地铁二号线供电系统工程后，在西安地铁市场又一中标项目。     

人神经生长因子的基因克隆和序列分析

目的　克隆人神经生长因子基因编码区。方法　由人末梢血白细胞中提取细胞总DNA ,利用PCR法 ,从DNA中扩增出人神经生长因子编码区基因DNA片段 ;将获得的基因片段插入 pGEM T Easy质粒中 ,转化到大肠杆菌DH5α后挑选阳性克隆 ,利用限制性内切酶酶切核苷酸序列分析技术鉴定重组质粒。结果　经质粒DNA酶切分析及序列测定 ,获得了人神经生长因子DNA片段序列。结论　首次由人白细胞DNA中克隆获得了人神经生长因子基因 ,为神经生长因子的基因治疗提供了前提条件。     

国人D17S30遗传多态性研究

采用基因扩增结合电泳银染技术分析１３０名汉族群体ＤＮＡＤ１７Ｓ３０遗传多态性，发现了１３个等位基因，基因频率为０．００７８～０．３５３８，有４２种基因型，其观察值和期望值经Ｘ２检验符合Ｈａｒｄｙ－Ｗｅｉｎｂｅｒｇ平衡定律；３个家系的９名成员Ｄ１７Ｓ３０遗传学分析，符合孟德尔遗传学规律。表明ＤＮＡＤ１７Ｓ３０在国人汉族群体具有高度多态性，在医学基因诊断、遗传学研究和法科学个人识别、亲权鉴定等领域是非常有价值的遗传标记。     

西安公交世园措施到位、保障有力初战告捷

西安世界园艺博览会是西安承办的国际性盛会。为了给四方宾客提供方便、周到的服务，西安市公交总公司全力以赴，为西安世园会的成功举办做出了突出的贡献。