大鼠视觉相关脑区表达序列标签的克隆与鉴定

目的 分析视觉相关脑区基因的差异表达并获取新的表达序列标签。方法 利用差异显示反转录ＰＣＲ（ＤＤＲＴ－ＰＣＲ）技术分析大鼠外侧膝状体与视皮层基因差异表达情况，并筛选差异表达基因片段。结果 经ＤＤＲＴ－ＰＣＲ筛选并通过反Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交法除假阳性，最终获得１个差异表达基因片段。对其进行克隆、测序和同源性比较发现，该片段为一新的表达序列标签，并与心肌集钙蛋白的ｍＲＮＡ具有７４％的同源性。结论 视觉     

人类乳头状甲状腺癌TGF—βmRNA表达

目的 探讨转化生长因子－β１（ＴＧＦ－β１）在人乳头状甲状腺癌和良性腺瘤、桥本氏甲状腺炎及正常组织中的表达差别。方法 利用逆转录多聚酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）及表达峰度定量法，检测４处新鲜甲状腺手术标本组织中ＴＧＦ－β１ ｍＲＮＡ的表达。结果ＴＧＦ－β１ ｍＲＮＡ在４种甲状腺组织中的表达均有较高的阳性率（＞８３．３％），乳头状甲状腺癌中ＴＧＦ－β１ ｍＲＮＡ的表达量较良性腺瘤、桥本氏炎及正常组织均增     

转化生长因子—β1对大鼠肺成纤维细胞Ⅰ,Ⅲ型前胶？…

观察转化生长因子－β１对大鼠肺大纤维细胞Ⅰ、Ⅲ型前胶原和ＴＧＦ－β表达的影响。方法应用Ｎｏｒｔｈｅｒｎ印迹杂交和免疫细胞化学法。结果经ＴＧＦ－β１作用后，肺成纤维细胞Ⅰ、Ⅲ型前胶原ｍＲＮＡ及其蛋白的表达增强，也可见ＴＧＦ－β的ｍＲＮＡ杂交信号和其蛋白阳性反应。     

小鼠乳腺癌细胞系IL—2基因转导及成瘤性研究

研究白细胞介素２转基因乳腺癌组织在小鼠体内成瘤性。方法 用感染法将人ＩＬ－２基因体外导入乳腺癌细胞系４Ｔ１。转基因细胞４Ｔ１－ＩＬ＝２培养上清内ＩＬ－２分泌量，ＤＮＡ，ＲＮＡ分别ＥＬＩＳＡ，Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交及逆转录ＰＣＲ法分析。体内实验将动物区分４Ｔ１，ＲＴ１／ＩＬ－２混合接种或单独接种三组。     

VitE和硒对白血病细胞凋亡及c—myc基因表达的影响

目的 研究ＶｉｔＥ和硒对人髓系白血病细胞株ＨＬ－６０细胞凋亡和ｃ－ｍｙｃ基因表达的影响。方法应用体外细胞培养法,ＤＮＡ凝胶电泳技术、Ｎｏｒｔｈｅｒｎ印迹杂交技术。结果 ＶｉｔＥ（１００μｍｏｌ／Ｌ）和Ｓｅ（８μｍｏｌ／Ｌ）作用２４ｈ后,ＨＬ－６０细胞出现细胞凋亡现象。ＶｉｔＥ（１００μｍｏｌ／Ｌ）可以抑制ｃ－ｍｙｃ基因的表达,作用有显著性（Ｐ＜０．０５）。Ｓｅ（８μｍｏｌ／Ｌ）无此作用。结论 抑制     

人白细胞介素-2 cDNA导入对卵巢癌耐药细胞株耐药性的逆转

为了构建ｐｃＤＮＡ－ＩＬ－２真核表达质粒，并探讨白细胞介素－２（ＩＬ－２）ｃＤＮＡ导入对顺铂诱导的卵巢癌耐药细胞株耐药性的影响。我们采用ＰＣＲ技术扩增人ＩＬ－２ｃＤＮＡ片段，构建ｐｃＤＮＡ－ＩＬ－２真核表达质粒。导入顺铂诱导的人卵巢癌耐药细胞株，观察其耐药性的改变。结果成功构建了ｐｃＤＮＡ－ＩＬ－２真核表达质粒，并在Ｃｏｓ－７细胞高效表达，导入卵巢癌耐药细胞后其对顺铂的敏感性显著升高。说明转导ｐｃＤ－ＮＡ－ＩＬ－２基因的人卵巢癌耐药细胞株其耐药性有明显逆转，而且ＩＬ－２亦可逆转非ｍｄｒ１依赖的耐药性     

人白细胞介素18cDNA的克隆及序列测定

获取人ＩＬ－１８ｃＤＮ克隆。方法用ＲＴ－ＰＣＲ方法从人外周血单个核细胞中获取人ＩＬ－１８ｃＤＮＡ，将其克隆至天然蛋白表达载体ＰＢＶ２２０中，并进一步亚克隆至融合蛋白表达载体ＰＧＥＸ－４Ｔ－３中，对其进行酶切分析及序列测定。结果测序结果表明克隆至ＰＢＶ２２０中的ＩＬ－１８ｃＤＮＡ包含成熟ＩＬ－１８蛋白的全部编码序列，酶切分析表明一约４７０ｂｐ的基因片段克隆至ＰＧＥＸ－４Ｔ－３中，与理论预计的一致。结     

Zfhag的锌指结构和同结构域的基因重组、表达和功能研究

报道了成功地亚克隆Ｚｆｈａｇ的锌指结构和同结构域基因，并将其在细菌体内表达成麦芽糖结合蛋白的融合蛋白的方法和结果，使用这些表达蛋白进行了蛋白－ＤＮＡ相互作用的研究。结果表明：ＭＢＰ－ＺＤ１和ＭＢＰ－ＺＤ２蛋白能与糖蛋白激素的α亚基基因、鼠生长激素（γ－ＧＨ）基因和促甲状腺激素β亚基（ＴＳＨ－β）基因的甲状腺激素反应成分（ＴＲＥ）结合，而不能结合含有天然ＴＲＥ的ＭＨＣ和Ｆ２Ｈ基因，及含有合成ＴＲＥ的ＤＲ４和ＰＡＬ寡核苷酸。     

原发性高血压患者氨苯喋啶敏感性钠通道β亚单位基因12外显子的PCR-SSCP分析

为确定原发性高血压患者是否存在氨苯喋啶敏感性钠通道（Ａｍｉｌｏｒｉｄｅｓｅｎｓｉｔｉｖｅｓｏｄｉｕｍｃｈａｎｎｅｌ，ＡＳＳＣ）β亚单位基因第１２外显子ＤＮＡ片段突变，本研究采用ＰＣＲ－ＳＳＣＰ技术对１４８例确诊型高血压病患者的ＡＳＳＣβ亚单位基因第１２外显子进行了分析。结果在原发性高血压患者中检出了３例有ＡＳＳＣβ亚单位基因第１２外显子突变的个体。提示原发性高血压的发生与ＡＳＳＣβ亚单位基因第１２外显子突变有关，它可能是原发性高血压发生的分子基础之一。     

P~(53)蛋白和PCNA在恶性纤维组织细胞瘤中的表达与预后的关系

为探讨恶性纤维组织细胞瘤（Ｍａｌｉｇｎａｎｔｆｉｂｒｏｕｓｈｉｓｔｉｏｃｙｔｏｍａ,ＭＦＨ）中Ｐ５３蛋白和增殖细胞核抗原（Ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｎｇｃｅｌｎｕｃｌｅａｒａｎｔｉｇｅｎ,ＰＣＮＡ）的表达强度与预后的关系,应用免疫组化ＬＳＡＢ法及彩色图像分析系统定量检测了４６例ＭＦＨ细胞中Ｐ５３蛋白和ＰＣＮＡ的表达强度。结果显示ＭＦＨ的Ｐ５３蛋白与ＰＣＮＡ表达间呈正相关,Ｐ５３蛋白阳性表达组ＰＣＮＡ的表达强度高于Ｐ５３蛋白阴性表达组（Ｐ＜０．０５）。Ｐ５３蛋白表达阳性和ＰＣＮＡ表达强度值高组较Ｐ５３表达阴性和ＰＣＮＡ表达强度值低组的生存期短、肿瘤转移率高、组织学分级高（Ｐ＜０．０５）;肿瘤位置深在组Ｐ５３蛋白和ＰＣＮＡ表达强度高于肿瘤位置浅表组（Ｐ＜０．０５）。结果提示定量检测ＭＦＨ的Ｐ５３蛋白和ＰＣＮＡ对于评估ＭＦＨ患者的预后具有较可靠的应用价值。     

PERFORMANCE ANALYSIS OF HYBRID DS SFH/SSMA SYSTEMS OVER MULTIPATH FADING CHANNELS

ＩｎｔｒｏｄｕｃｔｉｏｎＤｉｒｅｃｔｓｅｑｕｅｎｃｅｓｐｒｅａｄｓｐｅｃｔｒｕｍｍｕｌｔｉｐｌｅａｃｃｅｓｓ（ＤＳ／ＳＳＭＡ）ｓｙｓｔｅｍｃａｎｏｆｆｅｒｈｉｇｈｅｒｃａｐａｃｉｔｙｔｈａｎｆｒｅｑｕｅｎｃｙｈｏｐｐｉｎｇｓｐｒｅａｄｓｐｅｃｔｒｕｍｍｕｌｔｉ－ｐｌｅａｃｃｅｓｓ（ＦＨ／ＳＳＭＡ）ｓｙｓｔｅｍ,ｂｕｔｔｈｅｃａｐａｃｉｔｙｏｆｔｈｅｓｙｓｔｅｍｄｅｐｅｎｄｓｇｒｅａｔｌｙｏｎｔｈｅｐｏｗｅｒｏｆｔｈｅｕｓｅｒ＇ｓｒｅｃｅｉｖｅｄｓｉｇｎａｌｓ,ｔｈａｔｉｓｓｏ－ｃａｌｌｅｄｎｅａ…     

应用抑制性消减杂交技术筛选NS5ABP37的反式调节基因

目的 应用抑制性消减杂交(SSH)技术构建NS5ABP37反式激活相关基因差异表达的cDNA文库,筛选NS5ABP37蛋白反式激活相关基因.方法 以表达质粒pcDNA3.1(-)-NS5ABP37转染HepG2细胞,以空载体pcDNA3.1(-)为对照,从转染后的细胞裂解液中提取mRNA并合成cDNA,经RsaⅠ酶切消化后将实验组cDNA分成两组,分别衔接两种不同接头,再与对照组cDNA进行两次消减杂交及两次抑制性PCR反应;第2次PCR产物与pGEM-T easy克隆载体连接,构建cDNA消减文库,并转化大肠杆菌进行文库扩增,随机挑选克隆经PCR鉴定后进行测序及同源性分析.结果 成功构建了人NS5ABP37蛋白反式激活相关基因差异表达的cDNA文库.扩增后得到60个200～1000bp插入片段的克隆,随机挑选其中20个测序,并通过生物信息学分析获得其全长基因序列,结果共获得9种已知功能编码基因.结论 NS5ABP37基因功能涉及细胞生长调节、信号转导和能量代谢.     

逆转录病毒转移的β－半乳糖苷酶基因在成纤维细胞中的表达

为了研究逆转录病毒载体转移外源基因的实用性，我们采用小鼠白血病病毒（ＭｏＭＬＶ）载体将大肠杆菌的β－半乳糖苷酶基因（ｌａｃＺ）和抗新霉素（ＮｅｏＲ）基因转移到大鼠成纤维细胞内，对整合后的前病毒结构和基因表达进行了酶活性测定和ＤＮＡ分析。结果表明：ｌａｃＺ基因可以在大鼠皮肤成纤维细胞和２０８Ｆ细胞株中较长时间地表达；前病毒整合位点、靶细胞特性和整合后的载体结构与转入基因表达的稳定性紧密相关。     

基因重组人HSC73在大肠杆菌中的表达和纯化

目的 用基因工程方法表达人的热休克类似蛋白７３（ＨＳＣ７３）并提纯ＨＳＣ７３蛋白,为研究该蛋白提供条件。方法 用人ＨＳＣ７３基因构建原核细胞表达载体ｐＥＴＨＳＣ７３,在大肠杆菌ＢＬ２１中用异丙基硫代－β－Ｄ半乳糖苷（ＩＰＴＧ）诱导表达,ＡＴＰ亲和层析法提取ＨＳＣ７３。经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ、３．ａ．３抗体Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ作ＥＣＬ检测。结果 人ＨＳＣ７３基因构建的载体ｐＥＴＨＳＣ７３能很好地在大     

Becker型肌营养不良一家系分子遗传学研究

目的 应用分子遗传学方法对患者在基因水平上作出诊断。方法 应用ｄｙｓｔｒｏｐｉｎ ｃＤＮＡ１４ｋｂ探针（包括６个亚探针１－２ａ，２ｂ－３，４－５ａ，５ｂ－７、８、９－１４）与一名１８岁的临床表现温和肌营养不良患者及２例对照者（１例正常２５岁男性及１例１２岁ＤＭＤ患者）的基因组ＤＮＡ／Ｈｉｎｄ Ⅲ片段进行Ｓｏｕｔｈｅｒｎ印迹分析。结果 前者在与亚探针５ｂ－７杂交中，发现其１．５ｋｂ，０．５ｋｂｖｓｕ     

应用抑制性消减杂交技术筛选HBxAg蛋白结合蛋白XBP1的上调基因

目的应用酵母双杂交及生物信息学(bioinformatics)技术获得HBxAg蛋白结合蛋白XBP1,为了解该基因的反式调节机制,利用抑制性消减杂交技术筛选并克隆XBP1蛋白反式激活的靶基因。方法以XBP1表达质粒pcD-NA3.1(-)-myc-his(A)-XBP1转染HepG2细胞,以空载体pcDNA3.1(-)-myc-his(A)为对照;制备转染后的细胞裂解液,提取mRNA并合成cDNA,经RsaⅠ酶切后将实验组cDNA分成两组,分别衔接两种不同接头,再与对照组cDNA进行两次消减杂交及两次PCR反应,产物与T/A克隆载体连接,构建cDNA消减文库,并转染大肠杆菌进行文库扩增,随机挑选克隆经PCR鉴定后进行测序及同源性分析。结果成功构建人XBP1蛋白反式激活相关基因差异表达的cDNA。扩增后得到80个200～1 000bp插入片段的克隆,随机挑选其中30个插入片段测序,并通过生物信息学分析获得其全长基因序列,结果共获得28个已知编码序列基因和2个未知的新基因。结论 XBP1在肝细胞内表达后能够上调HepG2细胞中许多不同基因表达的变化,这些基因与细胞信号转导、细胞增殖与分化、免疫应答、能量代谢、细胞凋亡、肿瘤发生等生物过程密切相关。     

用表达重组TSH受体的CHO细胞测定Graves'甲亢病人血清中的TSAb

用表达重组人ＴＳＨ受体的中国仓鼠卵细胞（Ｃｈｉｎｅｓｅｈａｍｓｔｅｒｏｖａｒｙｃｅｌ,ＣＨＯ）细胞代替传统的ＦＲＴＬ－５细胞测定Ｇｒａｖｅｓ甲亢病人的血清甲状腺刺激抗体（ＴｈｙｒｏｉｄＳｔｉｍｕｌａｔｉｎｇＡｎｔｉｂｏｄｙ,ＴＳＡｂ）水平,方法相对简单,特异性强,敏感性高,未治疗的Ｇｒａｖｅｓ病人９２．７％阳性,治疗后迅速下降,恢复期的阳性率为３５％,该方法对Ｇｒａｖｅｓ甲亢的诊断、治疗后效果的判断有重要意义。     

局灶脑缺血再灌流后c-fos和bcl-2基因的表达

为探讨短暂局灶脑缺血后不同灌流期即刻早期基因（ＩＥＧｓ）与凋亡抑制基因在同一脑区的表达状况,采用不开颅血管腔内置线法制作鼠大脑中动脉阻塞（ＭＣＡ０）的局灶缺血再灌流模型,通过免疫组化法观察原癌基因ｃ－ｆｏｓ和ｂｃｌ－２蛋白在缺血３０ｍｉｎ再灌６ｈ和２４ｈ的表达。结果显示∶再灌６ｈ,二者在缺血同侧梨状皮层显著表达,而底节区表达很弱（Ｐ＜０．０１）;再灌２４ｈ,ｃ－ｆｏｓ蛋白在梨状皮层表达显著减弱（Ｐ＜０．０１）;ｂｃｌ－２蛋白表达仍显著（Ｐ＞０．０５）,且在底节区的表达有增强（Ｐ＞０．０５）。因而推论∶ｃ－ｆｏｓ与ｂｃｌ－２蛋白的表达可能与缺血损害的内源性保护机制有关。     

SCADA系统的综合图形设计

介绍ＳＣＡＤＡ（Ｓｕｐｅｒｖｉｓｏｒｙ Ｃｏｎｔｒｏｌ Ａｎｄ Ｄａｔａ Ａｃｑｕｉｓｉｔｉｏｎ）系统的综合图形系统开发的概念和实现方法,介绍图形对象与工程数据库的关联及建模方法,通过－ＳＣＡＤＡ系统的综合图形系统开发的实例,叙述了工控系统中综合图形系统开发的程序设计技术。     

BAEP转颈试验对VB·TIA的临床意义

对５８例临床诊断为椎－基底动脉短暂性脑缺血发作（Ｖｅｒｔｅｂｒａ－ｂａｓｉｆｉｘ　ａｒｔｅｒｙ　ｔｒａｎｓｉｅｎｔ　ｉｓｃｈｅｍｉｃ　ａｔｔａｃｋ，ＶＢ·ＴＩＡ）患者进行发作间歇期的脑干听觉诱发电位（Ｂｒａｉｎｓｔｅｍ　ａｕｄｉｔｏｒｙ　ｅｖｏｋｅｄ　ｐｏｔｅｎｔｉａｌ，ＢＡＥＰ）转颈试验研究，发现转颈试验后较试验前ＢＡＥＰ异常率显著增高（Ｐ＜０．００５），提示本病发病机制中血液动力学因素起着重要的作用。