硝酸亚铈对培养的正常细胞的毒性作用及对肿瘤细胞的抑瘤效应

目的 探讨硝酸亚铈体外毒性、抑瘤率及其对细胞周期的影响.方法 采用MTT法检测硝酸亚铈对正常细胞系FL、L929体外毒性,对肿瘤细胞系Hela、SGC-7901、B16、Lewis、K562、H_(22)的体外抑瘤效应.采用流式细胞仪检测硝酸亚铈对SGC-7901的细胞周期影响.结果 硝酸亚铈在0.64 mmol/L以下时对FL、L929无任何毒副作用;硝酸亚铈在0.64 mmol/L以上时对以上6种肿瘤细胞均有明显的抑制增殖作用,在0.08 mmol/L时对HeLa、SGC-7901、B16及K562肿瘤细胞表现出显著的抑制增殖作用,在0.01、0.04 mmol/L时,对H_(22)亦有显著抑制作用;0.08 mmol/L硝酸亚铈作用48 h,能显著延长SGC-7901细胞株的G0/G1期,缩短S期;1.28 mmol/L硝酸亚铈作用48 h,除了能够显著延长SGC-7901细胞株的G0/G1期,显著缩短S期以外,还能延长G2/M期.结论 硝酸亚铈对正常细胞具有低毒性和高度选择性,在体外通过影响细胞周期来抑制多种肿瘤细胞的生长和增殖.     

高压静电场对丝裂霉素C抗癌作用的协同效应

以体外培养的人肝癌细胞SMMC7721和小鼠Lewis肺癌细胞为靶细胞,采用MTT比色法分别检测HVEF和MMC单独使用及联合应用对癌细胞增殖的抑制效果,并根据抑制率判定协同效应,从而探讨高压静电场（HVEF）与丝裂霉素C（MMC）联合应用对癌细胞生长是否具有协同抑制作用.结果表明：经HVEF与MMC联合作用后,两种癌细胞的增殖活性均低于单独使用MMC组,人肝癌细胞SMMC7721下降了20%~38%（P〈0.01）,小鼠Lewis肺癌细胞下降了7%~15%（P〈0.01）,且两种方法具有协同效应,说明一定强度的高压静电场能够增强丝裂霉素C的抗癌作用.     

抗氧化剂吡咯烷二硫代氨基甲酸有助于提高卡铂对宫颈癌SiHa细胞化疗的敏感性

目的探讨抗氧化剂吡咯烷二硫代氨基甲酸(PDTC)提高人宫颈癌SiHa细胞对卡铂化疗的敏感性及其可能的机制。方法体外培养SiHa细胞,分为空白组、PDTC组、卡铂组和PDTC+卡铂联合组。MTT检测细胞生长抑制率、流式细胞术检测细胞凋亡率和细胞周期、免疫细胞化学方法观察了NF-κBp65在细胞质和细胞核中的表达变化。结果 PDTC能够有效地抑制宫颈癌SiHa细胞的增殖,呈时间和剂量依赖关系;小剂量PDTC(12.5μmol/L)和卡铂联合应用与单用卡铂相比,能明显增加细胞生长抑制率(P<0.01)。流式细胞仪检测示,各药物组与对照组比较及PDTC+卡铂联用组与单用卡铂组比较宫颈癌SiHa细胞凋亡率的差异有显著性(P<0.01)。SiHa细胞经PDTC作用后G0/G1期比例较空白组明显增加,卡铂单用组使细胞周期阻滞于G2/M期,PDTC+卡铂组使细胞周期进一步阻滞于G2/M期,同时降低S期比例。免疫细胞化学显示,NF-κBp65在宫颈癌SiHa中主要表达于细胞质中,卡铂诱导24 h后细胞质中的NF-κBp65转移至细胞核,其活性增强,PDTC能够抑制此作用。结论卡铂能够诱导NF-κBp65的活化,小剂量PDTC(12.5μmol/L)和卡铂联合应用与单用卡铂相比,能明显增加细胞生长抑制率和细胞凋亡率,提高宫颈癌SiHa细胞对卡铂的敏感性。     

Changes of the cell cycle regulators and cell cycle arrest in cervical cancer cells after cisplatin therapy

Objective To investigate the changes of the cell cycle regulators ATM, Chk2 and p53 and cell cycle arrest in HeLa cells after cisplatin therapy. Methods The proliferation-inhibiting rates of HeLa cells induced by eisplatin of different concentrations were measured by MTT assays. The mRNA and protein expressions of ATM, Chk2 and p53 of HeLa cells with and withont cisplatin were detected by RT-PCR and Western blot, respectively. The cell cycle analysis was conducted by flow cytometric analysis. Results Cisplatin inhibited the proliferation of HeLa cells in a dose- and time-dependent manner. The mRNA and protein expressions of ATM, Chk2 and p53 were increased in HeLa cells treated with cisplatin. The cell cycle was arrested in G2/M phase in HeLa cells treated with cisplatin. Conclusion Activation of ATM, Chk2 and p53 might be critical in determining whether cells survive or undergo apoptesis. Targeting ATM, Chk2 and p53 pathway might he a promising strategy for reversing chemoresistance to clsplatin in cervical cancer.     

REAL-TIME DETECTION OF SURVIVIN mRNA EXPRESSION IN CERVICAL CANCER CELL LINES USING MOLECULAR BEACON IMAGING

Objective To detect the expression of survivin mRNA in cervical cancer cell lines using molecular beacon imaging technology. Methods Human cervical cancer cells （HeLa and SiHa） and human fetal lung fibroblast HFL-I were cultured in vitro. After adding 100 nmol/L survivin mRNA molecular beacon, the fluorescent signals were observed under fluorescent microscope. The expressions of survivin in cervical cancer cells and HFL-I cell were examined by immunocytochemical streptravidin-biothin peroxidase （SP） assay at the same time. Results Two kinds of survivin mRNA molecular beacon, with different color fluorescence, had strong fluorescent signal in cervical cancer cell lines, and the signal in SiHa cell line was stronger, but these signals were not found in HFL-I ; Immunocytochemical staining of positive survivin was located in the cytoplasm of cervical cancer cell lines HeLa and SiHa, whereas, no expression of survivin was detected in HFL-I cell line. Conclusion The technology of molecular beacon imaging can be used to detect the expression of survivin mRNA in viable cells successfully, and may provide a new approach to the diagnosis of early stage cervical cancer and the following-up in the clinic.     

热疗对膀胱癌细胞BIU-87/HCPT耐药相关基因的影响

目的观察热疗对耐羟基喜树碱膀胱癌细胞株BIU-87/HCPT多药耐药的逆转作用,并探讨其逆转肿瘤多药耐药的机制。方法不同温度条件下热疗、化疗、热疗联合化疗处理耐药膀胱癌细胞株BIU-87/HCPT后,用MTT法检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞周期、细胞凋亡、P-gp、多药耐药相关蛋白1(MRP1)、谷胱甘肽硫-转移酶π(GST-π)和survivin表达的变化。结果热疗对BIU-87/HCPT细胞具有抑制作用,呈温度依赖性且在43℃时最强。热疗可显著增加羟基喜树碱对BIU-87/HCPT细胞的抑制率,作用呈温度依赖性,热疗明显增加化疗的作用。热疗联合化疗明显减少P-gp、MRP1、GST-π和survivin的表达并呈温度依赖性。结论热疗可促进膀胱癌细胞株BIU-87/HCPT凋亡,增强化疗药物作用,部分逆转膀胱癌细胞的耐药性,减少P-gp、MRP1、GST-π和survivin的表达。     

粉防己碱诱导宫颈癌细胞凋亡的定性定量研究

目的 从定性定量角度探讨粉防己碱诱导宫颈癌HeLa细胞凋亡的作用.方法 采用MTT法检测不同浓度粉防己碱作用不同时间对人宫颈癌HeLa细胞株的增殖抑制作用.通过流式细胞仪和激光共聚焦显微镜检测细胞凋亡情况.结果 粉防己碱对宫颈癌HeLa细胞具有增殖抑制作用,且呈时间、浓度依赖性.应用流式细胞仪检测到15μmol/L粉防己碱诱导HeLa细胞产生的凋亡率为(51.8±0.97)%,显著高于对照组凋亡率(24.3±1.23)%(P<0.05).通过激光共聚焦显微镜观察,与对照组比较,粉防己碱作用后HeLa细胞具有明显的凋亡形态.结论 粉防己碱能够抑制HeLa细胞的增殖并诱导其凋亡.     

人宫颈癌细胞凋亡的研究

目的　观察顺铂、60 Co在宫颈癌细胞凋亡的作用及其引起的细胞形态学、DNA及细胞周期变化。方法　将人宫颈癌细胞株Hela,SiHa和RJC进行体外培养 ,用不同强度的放射线60 Co照射 ,观察照射后不同时间内肿瘤细胞形态变化 ,并采用末端脱氧核苷酰转移酶标记法 (TDT法 )检查细胞DNA有无断裂 ,用流式细胞仪记录细胞周期的改变和Bcl 2蛋白表达情况。同时将顺铂处理的宫颈癌细胞作为对照组 ,观察放射线和药物对宫颈癌细胞的联合作用。结果　经60 Co照射的三株细胞均出现凋亡的典型形态学改变 ,TDT法染色见受照细胞核内均有DNA断裂表现 ;细胞周期进展受到阻滞 ;Bcl 2蛋白表达在Hela细胞升高 ,而在SiHa和RJC细胞则降低 ,SiHa细胞对60 Co照射最为敏感 ,40 0CGy即可出现细胞凋亡的改变。顺铂单独处理可使宫颈癌细胞凋亡 ,与放射线联用有明显的增强细胞凋亡的效果。并在RJC细胞的G1 峰前出现凋亡峰。结论　宫颈癌细胞受到60 Co照射后 ,凋亡是其主要死亡形式 ,不同的宫颈癌细胞株对放射线的敏感性存在明显差异 ,与细胞凋亡有关的Bcl 2表达与宫颈癌细胞凋亡的发生呈负相关 ,放射线照射与化疗药物联合可以增加抑制宫颈癌生长的作用。     

5-氮胞苷对宫颈癌细胞系DAPK1异常甲基化的影响

目的　观察宫颈癌细胞系SiHa及HeLa中凋亡相关蛋白激酶 1(DAPK1)的表达与甲基化修饰之间的相关性,以及5 氮胞苷对细胞DAPK1表达和生长的影响。方法　应用甲基化特异性PCR法分析细胞中DAPK1的甲基化状态;采用RT- PCR及免疫组化SABC法检测不同浓度 5- 氮胞苷干预对宫颈癌细胞 DAPK1 mRNA及蛋白表达的影响;MTT法观察5 -氮胞苷对细胞增殖的影响。结果　DAPK1基因在宫颈癌细胞 SiHa中有甲基化修饰,5- 氮胞苷干预能使其甲基化的DAPK1基因重新表达并抑制细胞生长。结论　DAPK1 的甲基化修饰是宫颈癌发生重要机制之一,5 -氮胞苷能使甲基化的DAPK1去除甲基化修饰,重新表达并恢复抑癌作用。     

Cyclin D_1反义寡核苷酸对人黑色素瘤细胞周期的影响及对细胞增殖抑制作用的研究

目的　探讨cyclinD1反义寡核苷酸对人黑色素瘤的潜在治疗作用。方法　合成针对cyclinD1翻译起始部位序列的 2 0bp硫代反义寡核苷酸 (AS ODN)。采用流式细胞仪检测细胞周期的分布 ,用台盼蓝计数、集落形成抑制试验体外观察AS ODN对人黑色素瘤细胞增殖的影响。结果　cyclinD1反义寡核苷酸能增加G1期细胞百分比 ,降低S期细胞百分比 ,且明显抑制人黑色素瘤细胞生长和集落形成。结论　CyclinD1反义寡核苷酸能有效抑制人黑色素瘤细胞的增殖。     

褪黑素对人食道磷癌Eca-109细胞的生长抑制作用

目的　研究国产褪黑素对人食道磷癌Eca 10 9细胞的生长抑制作用及其作用机理。方法　采用不同浓度的褪黑素通过体外细胞培养、MTT显色技术研究其抑制作用 ,通过流式细胞仪和透射电子显微镜技术观察 ,对其作用机理进行探讨。结果　褪黑素对人食道磷癌Eca 10 9细胞具有抑制作用 ,其IC30 、IC50 分别为 0 .89、1.6 0mmol·L- 1 。以IC30 的褪黑素处理Eca 10 9细胞 ,使其倍增时间由 33.6h延长到 39.4h。流式细胞仪观察到褪黑素可导致Eca 10 9细胞G0 G1 期比例升高 ,S期比例降低。透射电镜可观察到以IC30 的褪黑素处理的细胞 ,其超微结构发生了退行性改变。结论　褪黑素对人食道磷癌Eca 10 9细胞具有抑制作用 ,其作用机理可能是褪黑素导致细胞周期从G1 到S阶段的推迟进行     

INHIBITION AND RADIATION SENSITIZING EFFECT OF INDOLEACETIC ACID COMBINED WITH HORSERADISH PEROXIDASE ON HELA CELLS

Indoleaceticacid (IAA )isagrowthhormoneforplants.ResearchinrecentyearshasshownthatIAApresentsacytotoxiceffectonhumancancersaf teritisoxidizedbyhorseradishperoxidase (HRP) .Becauseoflowtoxicityandstrongeffectonanaero biccells ,ithasattractedpeople sattentionasapro drugfortargettreatmentofcancers .ItsmechanismmightberelatedwiththefactthatIAAisoxidizedinthecellsofthelivingbodytoproducefreeradi cals.Theanaerobiccellgroupsincancersareoneofthemaincausesforradiationresistance .Therehavebeenfewr…     

IAA与HRP联合作用对人胰腺癌BXPC-3的细胞毒效应

目的　研究吲哚乙酸(IAA)与辣根过氧化物酶(HRP)在体外共同作用于人胰腺癌BXPC 3 细胞所产生的细胞毒效应。方法　MTT法测定IAA/HRP对BXPC 3细胞增殖的影响;流式细胞仪分析BXPC 3 细胞周期时相变化;胎盘兰(曲利本兰)排斥试验,研究IAA/HRP对BXPC 3 细胞死亡率的影响;原位细胞凋亡检测试剂盒检测IAA/HRP作用后BXPC 3细胞的凋亡。结果　IAA/HRP体外对BXPC 3 细胞有抑制生长的效应,且这种效应有浓度和时间依赖性;BXPC 3细胞在IAA/HRP作用48 h后细胞周期被阻滞在G1期和G2期;IAA/HRP作用72 h后对照组和药物组的凋亡细胞数存在着显著性差异,且凋亡细胞数有浓度依赖性。结论　IAA/HRP对胰腺癌BXPC 3 细胞有细胞毒作用,可体外抑制细胞的增殖,诱导凋亡。     

短发卡RNA抑制survivin表达并诱导CNE-2细胞凋亡

目的观察以短发卡RNA(shRNA)抑制鼻咽癌细胞survivin表达对细胞凋亡与增殖的影响。方法构建特异性survivin shRNA,转染CNE-2细胞。分组:A组为空白对照组;B组为阴性干扰组,转染pSIREN-survivin/nonsenseshRNA;C组为阳性干扰24h组,转染pSIREN-survivin/shRNA;D组为阳性干扰48h组,转染pSIREN-survivin/shRNA。以RT-PCR、Western-blot分别测定细胞survivin mRNA及蛋白,PI、TUNEL及MTT检测细胞周期、凋亡率、细胞增殖。结果转染效率约(70.90±4.76)%;C组survivin mRNA和蛋白抑制率分别为(41.58±0.63)%、(68.29±0.52)%;D组抑制率分别为(63.64±0.96)%、(70.83±0.48)%。C组凋亡率为(36.24±0.78)%,D组为(50.37±0.85)%,显著高于B组和A组;S期细胞减少,G2/M期比例增高;MTT结果提示细胞增殖受到明显抑制。结论特异性shRNA可有效干扰CNE-2内survivin的表达,诱导细胞凋亡并抑制其过度增殖。     

外源磷脂酰乙醇胺诱导人宫颈癌HeLa细胞凋亡的研究

目的 磷脂酰乙醇胺(phosphatidylethanolamine, PE)在细胞凋亡的早期由细胞膜内侧翻转到外侧,与磷脂酰丝氨酸共同成为细胞凋亡的早期信号,但是其在凋亡中的作用尚不清楚.本研究探讨了PE对HeLa细胞凋亡的影响.方法 实验以人宫颈癌HeLa细胞系为材料,分别设置了空白对照组、0.125、0.25、0.5和1 mmol/L PE处理组.以MTT检测细胞生长情况,PI-流式细胞仪法检测细胞周期,Annexin V-PI法检测细胞凋亡.结果 与对照组相比,PE各处理组对HeLa细胞生长的抑制作用呈剂量与时间依赖性,并诱导细胞凋亡发生,但不影响细胞周期.结论 PE通过诱导细胞凋亡而抑制HeLa细胞的生长.     

全反式维甲酸和干扰素-γ协同作用对人胶质瘤细胞系SHG-44增殖、凋亡及侵袭力的影响

目的　研究全反式维甲酸 (ATRA)和干扰素 γ(IFN γ)联合应用对胶质瘤细胞增殖、凋亡及侵袭力的协同影响。方法　ATRA和IFN γ共同处理人胶质瘤细胞系SHG 4 4 ,MTT比色法检测细胞增殖能力 ,流式细胞仪检测瘤细胞周期分布和凋亡率 ;根据瘤细胞穿过Matrigel胶的能力 ,检测瘤细胞体外侵袭力 ;以ATRA、IFN γ单独处理的细胞作为对照。结果　胶质瘤细胞经ATRA和IFN γ联合处理后增殖能力下降 ,凋亡率增加 ,细胞阻滞于G1期 ,其侵袭性降低 ,与单独处理组相比较差异有显著性 (P <0 .0 5 )。结论　ATRA和IFN γ联合应用具有协同抑制人胶质瘤细胞系SHG 4 4恶性表型和诱导凋亡的作用     

雷帕霉素对小鼠H_(22)肝癌细胞生长增殖的影响

目的 研究雷帕霉素(rapamycin, RPM)对H_(22)肝癌细胞生长增殖的影响.方法 体外培养小鼠H_(22)肝细胞癌株,分别与RPM、CsA、FK506和5-Fu共同孵育48 h,进行MTT实验.流式细胞仪测定各组H_(22)细胞的细胞周期变化,ELISA法测定各组上清液中VEGF含量.体内实验建立H_(22)肝细胞癌皮下移植瘤模型,同时完成C57BL/6→BALB/c小鼠异体皮肤移植模型.给予RPM、CsA、FK506和5-Fu灌胃,观察皮片存活情况.获取实验小鼠血清及肿瘤组织.计算各组肿瘤体积,通过CD34免疫组化染色测定各组肿瘤组织的微血管密度(MVD).结果 剂量为0.01、0.1、1 mg/L的RPM对对数生长的H_(22)肝细胞具有细胞毒性,抑制H_(22)小鼠肝癌细胞增殖,培养上清液中的VEGF浓度较对照组显著降低(P<0.05),细胞周期分析显示S期细胞数较其他免疫抑制剂组显著减少(P<0.05).体内实验显示给予1.5 mg/(kg·d)和4.5 mg/(kg·d)的RPM与5 mg/(kg·d) FK506、20 mg/(kg·d) CsA的皮片存活时间相等,而肿瘤体积显著减小(P<0.05).与对照组相比,实验剂量RPM显著降低了荷瘤小鼠血清中的VEGF含量(P<0.05),同时瘤组织内的MVD显著减少(P<0.05).结论 体外实验研究和动物实验证实,RPM具有抗免疫排斥和抗肿瘤增殖的特点,可能在肝移植治疗肝脏恶性肿瘤方面发挥优势.     

奈达铂体外诱导肺腺癌A549细胞凋亡及其作用机制

目的探讨奈达铂(NDP)体外对人肺腺癌A549细胞的影响及其作用机制。方法采用四氮甲唑蓝(MTT)比色法检测不同浓度的NDP对A549细胞的杀伤作用,计算半数抑制浓度(IC50);流式细胞术(FCM)测定给药前后细胞凋亡率及周期分布变化;半定量PCR分析凋亡基因Bax、Caspase-3、Caspase-9的表达情况。结果 NDP能显著抑制A549细胞的生长;FCM结果显示,10μg/mL NDP作用A549细胞48h后,与对照组相比,细胞凋亡明显增加[(25.14±3.97)%vs.(8.01±1.46)%];S期细胞的比例增加[(52.73±1.66)%vs.(38.38±3.91)%],差异均有统计学意义(P<0.05)。与对照组相比,Bax、Caspase-3、Caspase-9表达增加(P<0.05)。结论 NDP可抑制A549细胞增殖,其机制可能与诱导细胞凋亡、细胞S期阻滞及上调Bax、Caspase-3和Caspase-9的表达有关。     

THE INHIBITORY EFFECT OF MELATONIN ON THE GROWTH OF HUMAN BLADDER CARCINOMA T24 CELL LINE

Melatonin(Mel) ,anindoleamineprimarilyderivedfromthepinealgland ,issecretedduringthehoursofdarkness.Melactsasahormonalconduc tionof photoperiodinfluencedbytheseasonanddailyphysiologicalrhythms.Thefunctionofmelinhumansisobscure .However ,melhasattainedprominenceasatreatmentfordisturbedcircadianrhythmsandsleeppatterns ,hasenhancedthefunc tionofimmunitysystem[1] andhasinhibitedtumorgrowth[2 ] .Thepreviousstudieshaveindicatedthatmelcombinedwithotheranticancerdrugscanin creasetheefficiencyanddecre…