雷帕霉素联合顺铂对卵巢癌SKOV-3细胞增殖的抑制作用

目的 探讨雷帕霉素单独及联合顺铂应用对人卵巢癌SKOV-3细胞生长的影响及可能的分子机制.方法 体外培养人卵巢癌SKOV-3细胞,实验组分别采用不同浓度的雷帕霉素、顺铂及40nmol/L雷帕霉素+10μmol/L顺铂作用,MTT法检测上述药物对细胞的增殖抑制率;流式细胞仪检测分析细胞凋亡率及细胞周期分布变化.结果 雷帕霉素单独及联合顺铂应用均可显著抑制人卵巢癌SKOV-3细胞的增殖,其作用呈现时间-剂量依赖性,且两药联合作用时抑制率显著增高(P<0.05),显示两药有协同作用;流式细胞仪检测显示雷帕霉素能使卵巢癌SKOV-3发生G1期阻滞,同时可诱导细胞凋亡,其凋亡率随用药浓度增加而增加.结论 雷帕霉素和顺铂可显著地抑制人卵巢癌SKOV-3细胞的增殖,阻滞细胞周期并诱导细胞凋亡,且两药联合应用时呈现协同作用.     

来那度胺对人宫颈癌SiHa细胞生长的影响

目的探讨来那度胺及其联合顺铂对体外培养的人宫颈癌SiHa细胞增殖的抑制作用。方法体外培养SiHa细胞,实验设对照组、来那度胺组、顺铂组和来那度胺+顺铂联合组,各组药物处理后,用MTT法检测细胞生长抑制率,流式细胞术检测细胞周期分布。结果 MTT法检测结果显示,来那度胺与顺铂联用后对SiHa细胞的生长抑制作用较单用顺铂强(P<0.05),但来那度胺单独作用对SiHa细胞生长的影响与对照组比较无明显差异(P>0.05);流式细胞周期分析结果显示,来那度胺作用于SiHa细胞后,与对照组相比G1期细胞百分比增高(P<0.05),与顺铂联用后细胞周期阻滞作用增强(P<0.05)。结论来那度胺与顺铂联用可增强顺铂对SiHa细胞的生长抑制作用;来那度胺作用于SiHa细胞后可将细胞周期阻滞于G1期,与顺铂联用后细胞周期阻滞作用增强。     

5-氮杂-2’-脱氧胞苷对HepG2中抑癌基因MIA2表达的影响

目的应用甲基化酶抑制剂5-氮杂-2’-脱氧胞苷(5-Aza-2’-deoxycytidine,5-Aza-CdR)作用肝癌细胞株HepG2,观察其对细胞增殖和凋亡的影响,并观察用药后肝癌细胞中黑色素瘤抑制蛋白2(melanoma inhibitory activity 2,MIA2)表达的变化情况。方法分别以浓度0、1、2、4、8、10、20、40μmol/L的5-Aza-CdR作用HepG2细胞,MTT法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡。再以0μmol/L和10μmol/L的5-Aza-CdR作用HepG2细胞,细胞免疫组化和Western blot检测细胞中MIA2蛋白表达。结果 5-Aza-CdR作用HepG2后,MTT结果显示细胞增殖受到抑制,在一定药物浓度范围内,细胞增殖抑制率和药物浓度呈正相关;流式细胞术结果显示细胞早期凋亡增加,在一定药物浓度范围内,早期凋亡率和药物浓度呈正相关;细胞免疫组化和Western blot结果显示与对照组(0μmol/L)比较,10μmol/L组中MIA2蛋白表达增强。结论 5-Aza-CdR作用HepG2细胞后,MIA2蛋白表达明显增强,细胞增殖受到抑制,早期凋亡增加。     

Celecoxib对乳腺癌MCF-7细胞增殖和凋亡的影响

目的 探讨选择性环氧化酶 2(cyclooxygenase-2, COX2)抑制剂Celecoxib对乳腺癌MCF7细胞增殖和凋亡的影响及其机制.方法 用不同浓度(10、20、40μmol/L)的Celecoxib处理MCF7细胞,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测Celecoxib对MCF7细胞增殖的影响;流式细胞仪测定细胞周期和细胞凋亡;RT-PCR法检测COX2基因表达;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测前列腺素E2(PGE2)释放水平.结果 Celecoxib对乳腺癌MCF7细胞增殖的抑制作用呈时间和剂量依赖性;Celecoxib可下调MCF7细胞COX2-mRNA表达.流式细胞仪结果显示:细胞周期各时相中,Celecoxib各浓度组G0/G1期阻滞,S期细胞所占的比例明显减少,有明显的诱导凋亡作用.Celecoxib可明显抑制MCF7细胞PGE2释放水平.结论 Celecoxib可有效抑制乳腺癌细胞增殖,并诱导凋亡.其机制可能与COX2表达下调、PGE2水平下降有关.     

Survivin反义寡核苷酸增加A375细胞对顺铂的敏感性

目的研究Survivin反义寡核苷酸对人恶性黑色素瘤A375细胞顺铂治疗敏感性的影响。方法台盼蓝计数观察Survivin反义寡核苷酸和顺铂对A375细胞增殖的抑制作用。结果5μmol/L反义寡核苷酸与0.5 mg/L顺铂共同作用于A375细胞72 h,细胞生长抑制率为61.3%,高于单因素作用组,组间比较差异具有统计学意义(P<0.001)。用反义寡核苷酸预处理细胞24 h后加入顺铂对A375细胞的生长抑制率为68.0%,高于同时用药组,但组间差异无统计学意义。结论反义寡核苷酸和顺铂联合用药对A375细胞生存具有协同抑制效应,即Survivin反义寡核苷酸可增强A375细胞对顺铂治疗的敏感性。     

三氧化二砷诱导卵巢癌细胞株COC1发生G_1期阻滞

目的研究三氧化二砷(As2O3)诱导卵巢癌细胞株COC1凋亡的作用机理。方法用不同浓度的As2O3溶液作用人卵巢癌细胞株COC1,于不同时间点收集细胞,MTT法检测细胞生长抑制率,原位末端标记法(TUNEL)观察细胞凋亡形态学特征,流式细胞仪检测细胞凋亡率及分析细胞周期的变化。结果随着药物浓度的升高、作用时间的延长,As2O3对COC1细胞的生长抑制率逐渐升高,具有浓度和时间依赖性;COC1细胞在1.5μmol/LAs2O3作用48h就出现了凋亡形态学改变,且随着作用时间的延长凋亡细胞数量增多;在3.0μmol/L、1.5μmol/LAs2O3作用下COC1出现了明显的凋亡峰,细胞周期也出现了随着药物作用时间的延长G1期细胞比例逐渐上升,S期、G2/M期细胞的比例同时降低的现象,提示As2O3对人卵巢癌细胞株COC1有明显周期特异性生长抑制作用。结论As2O3可以诱导卵巢癌细胞株COC1发生凋亡,诱导细胞发生G1期阻滞是As2O3抑制卵巢癌细胞生长作用的可能机制之一。     

5-氨基乙酰丙酸光动力疗法对人卵巢癌细胞的杀伤作用

目的 探讨5-氨基乙酰丙酸(5-aminolevulinic acid,5-ALA)介导的光动力疗法(photodynamic therapy,PDT)对体外培养的人卵巢癌3AO细胞的杀伤效应.方法 显微镜观察细胞形态;MTT法检测5-ALA介导的PDT(5-ALA-PDT)对3AO细胞增殖的抑制作用;PI染色及Annexin V-PI双染结合流式细胞术分析5-ALA-PDT对3AO细胞的细胞周期及死亡方式的影响.结果 5-ALA-PDT后3AO细胞出现典型的凋亡形态学改变;细胞抑制率随着5-ALA浓度及激光能量密度的升高而升高(P<0.01),当光敏剂浓度达到一定水平时,抑制率不再相应升高,该作用存在浓度饱和现象;流式细胞术显示PDT后细胞发生了G0/G1期生长停顿(P<0.05),有明显的晚期凋亡和继发性坏死(P<0.01).结论 5-ALA对卵巢癌3AO细胞有杀伤作用;凋亡是5-ALA-PDT杀伤卵巢癌细胞的一种机制.     

姜黄素对人骨肉瘤U-2OS细胞增殖的抑制作用

目的 观察不同浓度的姜黄素对人骨肉瘤U-2OS细胞增殖的抑制作用.方法 将不同浓度的姜黄素(0、10、20、40μmol/L)作用于人骨肉瘤U-2OS细胞12、24、48h,采用四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法检测U-2OS细胞的增殖.结果 姜黄素可显著抑制U-2OS细胞的体外增殖,并且随着浓度增加,抑制作用明显增强(10、20、40μmol/L的r值分别为-0.9638、-0.9778、-0.9764,P均<0.05);作用时间愈长,对U-2OS细胞的抑制作用也愈明显(12、24、48h的r值分别为-0.9325、-0.9780、-0.9705,P均<0.05), 呈明显浓度和时间依赖性.结论 姜黄素能明显抑制人骨肉瘤U-2OS细胞的体外增殖,可能为临床治疗骨肉瘤提供了一种新的方法.     

姜黄素对多巴胺诱导PC12细胞凋亡的保护作用

目的探讨姜黄素对多巴胺(dopamine,DA)氧化应激损伤PC12细胞(肾上腺嗜铬细胞瘤细胞株)的拮抗作用的分子机制。方法以DA损伤PC12细胞为氧化应激损伤的模型,依次分成空白对照组、姜黄素组(20μmol/L)、DA组(200μmol/L)及DA(20μmol/L)+姜黄素组(200μmol/L),细胞培养24h后,采用MTT法检测细胞的增殖状况,采用Western blotting检测Bcl-2、Cyt-c及Caspase-3等蛋白的表达水平。结果①姜黄素可使DA对PC12细胞的抑制率明显下降。②姜黄素抑制DA诱导的细胞内抗凋亡蛋白Bcl-2的表达下调。姜黄素本身能上调细胞内Bcl-2的蛋白表达水平。③姜黄素抑制DA诱导的细胞凋亡蛋白Cyt-c表达上调。④姜黄素抑制DA上调细胞内裂解型Caspase-3蛋白的表达,但姜黄素本身对裂解型Caspase-3的表达无影响。结论姜黄素对DA氧化应激损伤PC12细胞的拮抗作用是通过抑制抗凋亡蛋白Bcl-2的表达下调及抑制Cyt-c及Caspase-3的上调来实现的。     

顺铂对Hela细胞辐射增敏的体外实验观察

目的探讨顺铂对宫颈癌细胞系Hela的细胞毒性和辐射增敏作用,并研究射线与顺铂联合应用的效应关系。方法 MTT法检测Hela细胞在不同浓度药物和不同辐射剂量下的细胞抑制作用;辐射与顺铂联合应用时,MTT法检测细胞抑制率,绘制细胞抑制率曲线,研究顺铂与辐射联合应用时协同效应的条件;克隆形成法研究药物的辐射增敏作用,多靶单击拟合模型方程测定各组细胞辐射增敏比。结果顺铂作用于Hela细胞的半数致死质量浓度(IC50)为10μg/mL,药物与辐射共同作用于Hela细胞时,12 Gy辐射剂量下,顺铂1~5μg/mL对Hela的细胞毒性显示出明显的浓度依赖性和48 h内的时间依赖性,5μg/mL以上浓度顺铂对Hela的细胞毒性未见明显增加;集落形成法结果显示,顺铂辐射增敏比为1.320;辐射剂量小于10 Gy时,放射线与药物联合应用具有协同效应,而当辐射剂量大于10 Gy时,呈现相加效应或次相加效应。结论顺铂与辐射并用时对宫颈癌Hela细胞增殖具有显著抑制作用,药物具有最佳的辐射增敏剂量;且应尽早应用顺铂增敏化疗,以保证协同效应。     

粉防己碱诱导宫颈癌细胞凋亡的定性定量研究

目的 从定性定量角度探讨粉防己碱诱导宫颈癌HeLa细胞凋亡的作用.方法 采用MTT法检测不同浓度粉防己碱作用不同时间对人宫颈癌HeLa细胞株的增殖抑制作用.通过流式细胞仪和激光共聚焦显微镜检测细胞凋亡情况.结果 粉防己碱对宫颈癌HeLa细胞具有增殖抑制作用,且呈时间、浓度依赖性.应用流式细胞仪检测到15μmol/L粉防己碱诱导HeLa细胞产生的凋亡率为(51.8±0.97)%,显著高于对照组凋亡率(24.3±1.23)%(P<0.05).通过激光共聚焦显微镜观察,与对照组比较,粉防己碱作用后HeLa细胞具有明显的凋亡形态.结论 粉防己碱能够抑制HeLa细胞的增殖并诱导其凋亡.     

Induction of apoptosis and inhibition of proliferation of C6 glioma cells in vitro by tamoxifen

Objective To investigate the anti-tumor effect and mechanism of tamoxifen on rat C6 glioma cells. Methods C6 cells were cultured in Dulbecco＇s modified Eagle＇s medium （DMEM） with 3% fetal calf serum （FCS）, and treated with tamoxifen of different concentrations, i.e. group A （1.25 μmol/L）, group B （2.50 μmol/L）, group C （5. 00 μmol/L）, group D （10. 00 μmol/L）, group E （20. 00 μmol/L） and control group （0. 00 μmol/L）. Morphological changes, MTT assay and 5-bromo-2＇-deoxyuriding labeling ratio were assessed. Apoptosis was observed by flow cytometry. Results C6 cells treated with different doses of tamoxifen for 24, 48, and 72 hours became irregular in shape, while cells treated with vehicle grew normally. MTT assay showed that tamoxifen did not suppress C6 cell growth until 72 hours after treatment. Seventy-two hours after treatment, there were significant differences in cell viable rate between group A versus groups C, D and E; so did group B versus group D as well as group E （P〈 0.05 ）. BrdU incorporation assay indicated significant difference of BrdU labbled index （BrdU LI） among groups A, C, E and control group 48 hoers after treatment （P〈0.05）. And the BrdU LI decreased with the increased concentration of tamoxifen. Flow cytometry （FCM） showed significant difference between treated group and control group at 24, 48, and 72 hours after treatment （P〈0.05）. Conclusion Tamoxifen significantly suppresses the growth of C6 glioma cells in a time- and dose-dependent manner. The mechanism of tamoxifen suppressing C6 glioma cells may be inhibiting proliferation and inducing apoptosis. Therefore, tamoxifen can be a candidate as a chemotherapy agent for glioma.     

Study of the mechanism on the apoptosis induced in Human leukemia cell line K562 by the combination of indole-3-acetic acid and horseradish peroxidase

Objective To investigate the mechanisms of apoptosis induced in Human leukemia cell line K562 by the combination of indole-3-acetic acid and horseradish peroxidase. Methods Human leukemia cell line K562 were exposed to indole-3-acetic acid （IAA） at 20, 40, 60, 80 or 100 mol/L and horseradish peroxidase（HRP） at 1.2 g/mL for varying times. MTT assay was applied to detect the cell proliferation. Flow cytometry was performed to detect the arrest of cell cycle. Terminal deoxynucleotidyl transferase-mediated dUTP nick end labeling （TUNEL） assay was used to measure apoptosis. 2, 7-dichlorofluorescin diacetate （DCFH-DA） uptake was measured to determine free radical by confocal microscope. Content of malondiadehyde （MDA） and activity of superoxide dismutase （SOD） were measured by biochemical methods. Results IAA/HRP initiated growth inhibition of K562 cells in a dose- and time-dependent manner. Flow cytometry revealed that cell cycle arrested at G1/G0 after 24 hours treatment. After 72 hours treatment, apoptotic rate of 100 mol/L IAA group increased to 43.9 %, which was 5 times that of control（P〈0.01）. Content of MDA and activity of SOD increased respectively in treatments compared with control. Meanwhile, IAA/HRP stimulated the formation of free radical, which was increased by IAA concentration-dependently. Conclusion The combination of IAAand HRP can inhibit the growth of Human leukemia cell line K562 in vitro by inducing apoptosis which is associated with the increase of free radical. The combination of IAA and HRP might be a promising chemopreventive and chemotherapeutic agent against human leukemia.     

体外观察紫杉醇对人胆管癌细胞QBC939凋亡的诱导作用

目的观察微管稳定剂紫杉醇对胆管癌QBC939细胞的作用。方法MTT法检测紫杉醇对QBC939细胞的抑制作用;光镜和电镜观察紫杉醇作用后细胞形态的变化;流式细胞仪分析细胞周期的改变。结果随着药物作用时间的延长及浓度的增加,紫杉醇对QBC939细胞的增殖抑制作用就越明显。形态学及流式细胞仪分析显示S期及G2/M期阻滞和细胞凋亡。结论紫杉醇诱发的人胆管癌细胞的凋亡与细胞DNA合成期及分裂期阻滞密切相关。这一作用机制将为临床治疗提供理论依据。     

蟾蜍灵对顺铂耐药胃癌SGC7901细胞增殖与凋亡的影响及其作用机制

目的探讨蟾蜍灵(bufalin)对顺铂耐药胃癌细胞(SGC7901/CDDP)增殖及凋亡的影响及其作用机制。方法采用MTT比色法检测bufalin对SGC7901/CDDP细胞增殖的抑制作用;应用流式细胞术PI染色检测细胞凋亡;应用Western blot检测凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax的表达。结果 Bufalin以时间和剂量依赖方式抑制SGC7901/CDDP细胞增殖,24、48、72h的IC50值分别为106.3、53.8、10.9nmol/L。选取10、50、100nmol/L的bufalin作用SGC7901/CD-DP细胞24h,凋亡率分别为7.3%、12.6%和26.4%,呈浓度依赖性。Western blot分析结果表明,SGC7901/CDDP细胞经10、50、100nmol/L的bufalin处理后,促凋亡基因Bax表达逐渐上调,抗凋亡基因Bcl-2表达逐渐减弱。结论 Bufalin在体外能够抑制对顺铂耐药的胃癌细胞(SGC7901/CDDP)的增殖,且通过调控Bcl-2、Bax的表达而诱导细胞凋亡。     

外源磷脂酰乙醇胺诱导人宫颈癌HeLa细胞凋亡的研究

目的 磷脂酰乙醇胺(phosphatidylethanolamine, PE)在细胞凋亡的早期由细胞膜内侧翻转到外侧,与磷脂酰丝氨酸共同成为细胞凋亡的早期信号,但是其在凋亡中的作用尚不清楚.本研究探讨了PE对HeLa细胞凋亡的影响.方法 实验以人宫颈癌HeLa细胞系为材料,分别设置了空白对照组、0.125、0.25、0.5和1 mmol/L PE处理组.以MTT检测细胞生长情况,PI-流式细胞仪法检测细胞周期,Annexin V-PI法检测细胞凋亡.结果 与对照组相比,PE各处理组对HeLa细胞生长的抑制作用呈剂量与时间依赖性,并诱导细胞凋亡发生,但不影响细胞周期.结论 PE通过诱导细胞凋亡而抑制HeLa细胞的生长.     

IAA与HRP联合作用对人胰腺癌BXPC-3的细胞毒效应

目的　研究吲哚乙酸(IAA)与辣根过氧化物酶(HRP)在体外共同作用于人胰腺癌BXPC 3 细胞所产生的细胞毒效应。方法　MTT法测定IAA/HRP对BXPC 3细胞增殖的影响;流式细胞仪分析BXPC 3 细胞周期时相变化;胎盘兰(曲利本兰)排斥试验,研究IAA/HRP对BXPC 3 细胞死亡率的影响;原位细胞凋亡检测试剂盒检测IAA/HRP作用后BXPC 3细胞的凋亡。结果　IAA/HRP体外对BXPC 3 细胞有抑制生长的效应,且这种效应有浓度和时间依赖性;BXPC 3细胞在IAA/HRP作用48 h后细胞周期被阻滞在G1期和G2期;IAA/HRP作用72 h后对照组和药物组的凋亡细胞数存在着显著性差异,且凋亡细胞数有浓度依赖性。结论　IAA/HRP对胰腺癌BXPC 3 细胞有细胞毒作用,可体外抑制细胞的增殖,诱导凋亡。     

奈达铂体外诱导肺腺癌A549细胞凋亡及其作用机制

目的探讨奈达铂(NDP)体外对人肺腺癌A549细胞的影响及其作用机制。方法采用四氮甲唑蓝(MTT)比色法检测不同浓度的NDP对A549细胞的杀伤作用,计算半数抑制浓度(IC50);流式细胞术(FCM)测定给药前后细胞凋亡率及周期分布变化;半定量PCR分析凋亡基因Bax、Caspase-3、Caspase-9的表达情况。结果 NDP能显著抑制A549细胞的生长;FCM结果显示,10μg/mL NDP作用A549细胞48h后,与对照组相比,细胞凋亡明显增加[(25.14±3.97)%vs.(8.01±1.46)%];S期细胞的比例增加[(52.73±1.66)%vs.(38.38±3.91)%],差异均有统计学意义(P<0.05)。与对照组相比,Bax、Caspase-3、Caspase-9表达增加(P<0.05)。结论 NDP可抑制A549细胞增殖,其机制可能与诱导细胞凋亡、细胞S期阻滞及上调Bax、Caspase-3和Caspase-9的表达有关。     

结缔组织生长因子对视网膜色素上皮细胞增生和黏附的调节作用

目的观察重组人结缔组织生长因子(rhCTGF)对视网膜色素上皮(RPE)细胞增生和黏附的影响。方法用CTGF蛋白、多聚赖氨酸(PLL)和胶原分别包被培养板,观察CTGF促进RPE细胞黏附的作用;用四唑盐(MTT)比色试验和流式细胞仪(FCM)测定RPE细胞增生反应。结果10-30 mg/L的CTGF蛋白提高RPE细胞的贴壁黏附能力,与未包被的对照组相比,差异有统计学意义(P<0.05);30 mg/L CTGF促进RPE细胞黏附的能力与0.1 g/L胶原的作用一致,但略低于0.1 g/L PLL的作用。MTT实验显示CTGF刺激RPE细胞生长,CTGF作用24 h刺激RPE细胞增生的能力最强。FCM测定细胞周期结果显示S期百分比随着CTGF浓度增加而逐渐增加,无血清培养的对照组S期百分比为(7.5±0.4)%,60μg/LCTGF刺激24 h后,S期百分比上升至(16.1±2.0)%。结论CTGF可以促进RPE细胞的黏附和增生,在增生性玻璃体视网膜病变等眼内增生性疾病中可能有重要意义。