Survivin反义寡核苷酸增加A375细胞对顺铂的敏感性

目的研究Survivin反义寡核苷酸对人恶性黑色素瘤A375细胞顺铂治疗敏感性的影响。方法台盼蓝计数观察Survivin反义寡核苷酸和顺铂对A375细胞增殖的抑制作用。结果5μmol/L反义寡核苷酸与0.5 mg/L顺铂共同作用于A375细胞72 h,细胞生长抑制率为61.3%,高于单因素作用组,组间比较差异具有统计学意义(P<0.001)。用反义寡核苷酸预处理细胞24 h后加入顺铂对A375细胞的生长抑制率为68.0%,高于同时用药组,但组间差异无统计学意义。结论反义寡核苷酸和顺铂联合用药对A375细胞生存具有协同抑制效应,即Survivin反义寡核苷酸可增强A375细胞对顺铂治疗的敏感性。     

雷帕霉素联合顺铂对卵巢癌SKOV-3细胞增殖的抑制作用

目的 探讨雷帕霉素单独及联合顺铂应用对人卵巢癌SKOV-3细胞生长的影响及可能的分子机制.方法 体外培养人卵巢癌SKOV-3细胞,实验组分别采用不同浓度的雷帕霉素、顺铂及40nmol/L雷帕霉素+10μmol/L顺铂作用,MTT法检测上述药物对细胞的增殖抑制率;流式细胞仪检测分析细胞凋亡率及细胞周期分布变化.结果 雷帕霉素单独及联合顺铂应用均可显著抑制人卵巢癌SKOV-3细胞的增殖,其作用呈现时间-剂量依赖性,且两药联合作用时抑制率显著增高(P<0.05),显示两药有协同作用;流式细胞仪检测显示雷帕霉素能使卵巢癌SKOV-3发生G1期阻滞,同时可诱导细胞凋亡,其凋亡率随用药浓度增加而增加.结论 雷帕霉素和顺铂可显著地抑制人卵巢癌SKOV-3细胞的增殖,阻滞细胞周期并诱导细胞凋亡,且两药联合应用时呈现协同作用.     

小剂量顺铂增加人宫颈癌Hela和Siha细胞对光动力治疗敏感性的研究

目的 探讨小剂量顺铂增加入宫颈癌Hela和Siha细胞系对光动力治疗的敏感性及细胞凋亡的机理.方法 将Hela和Siha细胞分为空白对照组、单纯光动力治疗组、单纯顺铂治疗组和光动力加顺铂治疗组,MTT法检测各组入宫颈癌细胞株Hela和Siha的增殖情况.采用免疫细胞化学法检测各组Hela和Siha细胞受作用后P185c-erbB-2蛋白的表达情况.结果 顺铂和光动力治疗联合应用导致细胞凋亡的程度均明显强于单一顺铂作用或光动力作用,细胞中P185c-exbB-2蛋白的表达下降程度也与之相一致.但是先顺铂后光动力治疗和先光动力治疗后顺铂相比,作用效果差异不明显.结论 顺铂和光动力联合治疗在体外对人宫颈癌Hela和Siha细胞有明显增殖抑制作用,强于单独一种方法治疗,其机理可能与抑制P185c-erbB-2表达有关.     

蟾蜍灵对顺铂耐药胃癌SGC7901细胞增殖与凋亡的影响及其作用机制

目的探讨蟾蜍灵(bufalin)对顺铂耐药胃癌细胞(SGC7901/CDDP)增殖及凋亡的影响及其作用机制。方法采用MTT比色法检测bufalin对SGC7901/CDDP细胞增殖的抑制作用;应用流式细胞术PI染色检测细胞凋亡;应用Western blot检测凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax的表达。结果 Bufalin以时间和剂量依赖方式抑制SGC7901/CDDP细胞增殖,24、48、72h的IC50值分别为106.3、53.8、10.9nmol/L。选取10、50、100nmol/L的bufalin作用SGC7901/CD-DP细胞24h,凋亡率分别为7.3%、12.6%和26.4%,呈浓度依赖性。Western blot分析结果表明,SGC7901/CDDP细胞经10、50、100nmol/L的bufalin处理后,促凋亡基因Bax表达逐渐上调,抗凋亡基因Bcl-2表达逐渐减弱。结论 Bufalin在体外能够抑制对顺铂耐药的胃癌细胞(SGC7901/CDDP)的增殖,且通过调控Bcl-2、Bax的表达而诱导细胞凋亡。     

姜黄素联合顺铂对人卵巢癌SKOV-3细胞增殖的抑制作用

目的 探讨姜黄素及其联合顺铂对体外培养人卵巢癌SKOV-3细胞增殖的抑制作用.方法 将SKOV-3细胞培养并分别单独加入不同浓度姜黄素(5、10、20、40、80 μ mol/L)、顺铂(10 μmol/L)及联合作用后,用MTT法检测SKOV3细胞增殖情况.流式细胞术检测细胞凋亡率和细胞周期分布.结果 MTT法检测结果显示,不同浓度姜黄素组,随着药物浓度增加,作用时间延长,细胞的增殖抑制率上升(P＜0.05);联合用药组明显高于单一用药组(P＜0.05).流式细胞术结果显示,姜黄素能使卵巢癌SKOV-3细胞发生G2/M期阻滞,诱导细胞凋亡;随着姜黄素用药浓度增加,细胞凋亡率增高.结论 姜黄素对卵巢癌SKOV-3细胞增殖具有抑制作用,在一定范围内,这种抑制作用呈剂量-时间依赖性;姜黄素、顺铂联合应用具有协同作用.     

chk2反义寡核苷酸对顺铂作用下HeLa细胞凋亡的影响

目的观察宫颈癌HeLa细胞转染chk2反义寡核苷酸后,在顺铂作用下对凋亡的影响。方法采用MTT法检测不同浓度顺铂作用人宫颈癌细胞株HeLa 24、487、2 h后对细胞的生长抑制率。以脂质体为载体将chk2正义链和反义链转染HeLa细胞,用Western blot检测HeLa细胞中Chk2蛋白的表达,用流式细胞仪和TUNEL法检测顺铂作用后细胞凋亡率。结果顺铂对HeLa细胞有生长抑制作用,并有时间和浓度依赖性;反义chk2转染后可明显抑制Chk2蛋白表达(P<0.01),顺铂作用下细胞凋亡率明显高于转染正义链组(P<0.01)。结论反义寡核苷酸封闭chk2基因可增加HeLa细胞对顺铂的凋亡敏感性。     

人鼻咽癌放射抗拒性肿瘤干细胞的分离、筛选与鉴定

目的分离、筛选、鉴定人鼻咽癌CNE-2及放射耐受CNE-2R的肿瘤干细胞。方法免疫磁珠技术分选CNE-2及CNE-2R中鼻咽癌CD133+干细胞,分别用无血清培养法、平板克隆法、裸鼠成瘤试验检测分选的CD133+细胞体外增殖能力、克隆形成能力及成瘤能力,HE染色和电镜超微结构观察形态学变化。结果 CNE-2及CNE-2R细胞中CD133+表达分别为(1.79±0.16)%和(2.63±0.72)%;CNE-2-CD133+细胞及CNE-2R-CD133+细胞形成肿瘤干细胞球及体外增殖能力远高于CD133-表达者;CNE-2R-CD133+细胞克隆形成能力较CNE-2-CD133+细胞明显升高,而且CNE-2R-CD133+细胞的克隆形态与CNE-2-CD133+细胞相比较明显增大;形态学发现CNE-2R-CD133+细胞核大,异型,核仁大,细胞器肥大。结论分离、筛选出的鼻咽CNE-2R-CD133+肿瘤干细胞能形成干细胞球,其增殖能力、裸鼠成瘤能力更强,能为进一步探讨鼻咽癌放射抗拒的机制提供研究基础。     

人肝癌细胞HepG2和人正常肝细胞7702的差异蛋白质组学研究

目的应用蛋白质组学技术探讨人肝癌细胞HepG2和人正常肝细胞7702的蛋白质差异表达谱,筛选肝细胞癌的特异性标志物。方法应用双向电泳(2-DE)方法对细胞总蛋白进行分离和分析,用质谱(MS)鉴定差异表达蛋白,并用免疫组化方法验证部分差异表达蛋白。结果与7702细胞相比,在HepG2细胞中鉴定出17种差异表达蛋白,10种上调,7种下调,主要涉及物质代谢酶和抗凋亡、调节应激和细胞间信号传导的蛋白质;免疫组化结果验证了膜联蛋白A1(annexin A1)和亲环蛋白A(cyclophilin A)在肝细胞癌病理组织中均明显上调,且主要定位于胞质内。结论人肝癌细胞HepG2和人正常肝细胞7702的蛋白质表达差异显著,其中膜联蛋白A1和亲环蛋白A可作为肝细胞癌诊断及治疗的分子标志物。     

鸦胆子油脂质体对人肝癌细胞株HepG2抑制作用的体内外研究

目的通过体外体内实验探讨鸦胆子油脂质体对人肝癌细胞株HepG2的影响及可能机制。方法利用鸦胆子油脂质体高剂量(5mg/L)、低剂量(2.5mg/L)体外作用于人肝癌细胞株HepG2,MTT比色分析法分析HepG2细胞生长抑制程度,流式细胞仪检测不同药物浓度作用下细胞的凋亡率,透射电镜下观察HepG2细胞形态变化。通过腹腔注射荷瘤裸鼠进行体内试验,观察鸦胆子油脂质体小剂量(12.5mg/L)、大剂量(25mg/L)对其肝脏的病理改变;TUNEL法检测肝脏肿瘤组织凋亡细胞。结果 MTT比色分析法实验结果显示鸦胆子油脂质体可明显抑制HepG2细胞增殖;透射电镜下观察5mg/L鸦胆子油脂质体在体外作用于HepG2细胞6h后,可见明显凋亡细胞形态出现。流式细胞仪检测随鸦胆子油脂质体作用强度和时间的增加,细胞抑制率逐步由33.31%提升至90.62%(P<0.01)。鸦胆子油脂质体腹腔注射组较阴性对照组动物模型死亡时平均体重增加,肿瘤转移率下降(P<0.01);TUNEL法亦提示鸦胆子油脂质体组凋亡细胞率增加(P<0.01)。结论鸦胆子油脂质体对HepG2细胞在体内体外具有抑制增殖的作用,并可诱导肿瘤细胞凋亡。     

重组金属蛋白酶组织抑制因子-3与顺铂联合应用对肺癌细胞A549生长抑制与凋亡的影响

目的探讨重组金属蛋白酶组织抑制因子-3(rhTIMP-3)和顺铂(cis-platinum,DDP)联合应用对肺癌细胞株A549生长和凋亡的影响。方法分别或联合应用不同浓度的rhTIMP-3、DDP作用于A549细胞,用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法分析细胞生长抑制作用,流式细胞术测定细胞周期分布和凋亡率。结果 rhTIMP-3与DDP均可抑制A549细胞的增殖,rhTIMP-3作用结果呈时间、浓度依赖性,DDP的作用结果呈浓度依赖性,二者都可以诱导A549细胞凋亡。rhTIMP-3使细胞阻滞在S和G2/M期,DDP可造成细胞S期的阻滞,当两者联合应用时对A549细胞的生长抑制作用明显加强,对诱导凋亡有明显协同作用。结论 rhTIMP-3、DDP均可抑制A549细胞的增殖,并可诱导其凋亡;二者联合应用不仅能增加细胞生长的抑制作用,而且有协同诱导细胞凋亡作用。     

奥曲肽对人肝癌细胞株MHCC97-H的影响

目的探讨奥曲肽对人高转移潜能肝癌细胞株MHCC97-H的影响及其机制。方法奥曲肽体外作用于生长对数期人高转移潜能肝癌细胞株MHCC97-H,观察生长曲线的变化;应用MTT比色分析法分析细胞的生长抑制作用;透射电镜下观察细胞形态变化。结果奥曲肽在0.2 mg/L质量浓度下体外干预MHCC97-H细胞使生长受抑;透射电镜下观察呈现凋亡形态改变;在0.05-0.8 mg/L质量浓度范围内呈剂量依赖关系抑制人高转移潜能肝癌细胞株MHCC97-H增殖(P<0.01),并出现饱和现象。结论奥曲肽对人高转移潜能肝癌细胞株MHCC97-H增殖具有抑制作用,在一定范围内呈剂量依赖关系,其机制与诱导肿瘤细胞凋亡有关。     

Peroxiredoxin1基因沉默对肝癌细胞HepG2和SMMC-7721放射增敏的研究

目的 探讨Peroxiredoxin (Prx)1基因的小分子干扰RNA(siRNA)对人肝癌细胞系HepG2和SMMC-7721的放射增敏作用及机制.方法 通过逆转录PCR方法研究Prx家族(Prx1～6)在人肝癌细胞HepG2和SMMC-7721中的mRNA表达谱;使用siRNA敲低HepG2和SMMC-7721细...     

Hypoxia-induced enhancement of cell invasiveness in SMMC7721 hepatocellular carcinoma cells

Objective To explore the effects of hypoxia (1% O2) on the ability of cell invasiveness and expression of KAI1/CD82 in SMMC7721 hepatocellular carcinoma cells. Methods SMMC7721 hepatocellular carcinoma cells were cultured by hypoxia ( 1% O2) in vitro, and the ability of cell invasiveness was analyzed by cell invasion assay.Immunohistochemistry staining technique was used to evaluate the protein expression of KAI1/CD82. Results Cell invasion assay revealed that hypoxia enhanced the ability of invasiveness of hepatocellular carcinoma cells. In addition,KAI1/CD82 protein expression was positive in cultured SMMC7721 hepatocellular carcinoma cells, and it was located diffusedly in the cytoplasm and on the membrane. KAI1/CD82 protein expression was down-regulated when mediated by hypoxia; at the same time, it showed a time-effect relationship. Conclusion Hypoxia can enhance invasiveness of hepatocellular carcinoma cells. The down-regulation of KAI1/CD82 expression may play a certain role in those courses.     

Changes of the cell cycle regulators and cell cycle arrest in cervical cancer cells after cisplatin therapy

Objective To investigate the changes of the cell cycle regulators ATM, Chk2 and p53 and cell cycle arrest in HeLa cells after cisplatin therapy. Methods The proliferation-inhibiting rates of HeLa cells induced by eisplatin of different concentrations were measured by MTT assays. The mRNA and protein expressions of ATM, Chk2 and p53 of HeLa cells with and withont cisplatin were detected by RT-PCR and Western blot, respectively. The cell cycle analysis was conducted by flow cytometric analysis. Results Cisplatin inhibited the proliferation of HeLa cells in a dose- and time-dependent manner. The mRNA and protein expressions of ATM, Chk2 and p53 were increased in HeLa cells treated with cisplatin. The cell cycle was arrested in G2/M phase in HeLa cells treated with cisplatin. Conclusion Activation of ATM, Chk2 and p53 might be critical in determining whether cells survive or undergo apoptesis. Targeting ATM, Chk2 and p53 pathway might he a promising strategy for reversing chemoresistance to clsplatin in cervical cancer.     

EGCG对肝癌细胞HepG2凋亡及脂肪酸合酶表达的影响

目的观察表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)对人肝癌HepG2细胞增殖抑制、凋亡诱导及对凋亡相关基因和脂肪酸合酶(FASN)表达的影响,明确其可能的抗肝癌作用机制。方法体外培养HepG2人肝癌细胞株,随机分为对照组(无药物干预)及80、120、160μmol/L EGCG组,作用48h后,荧光显微镜观察Hoechst33258染色结果并用流式细胞术定量分析细胞凋亡发生情况;用RT-PCR方法检测FASN及凋亡相关基因Bcl-2和Bax的表达。结果EGCG组Hoechst33258染色可见凋亡细胞核浓染,亮度明显加深或有染色质边集现象,亦可见典型的凋亡小体;流式细胞术检测发现,经160μmol/L EGCG作用48h后,肝癌细胞凋亡率最高可达28.6%;半定量RT-PCR结果显示,经EGCG作用48h后肝癌细胞中凋亡相关基因Bcl-2表达量明显下降,同时FASN表达量亦随EGCG浓度的增大而显著降低。Bax表达无明显变化。结论 EGCG可抑制人肝癌细胞HepG2的细胞增殖,并诱导凋亡发生,此作用可能与其抑制细胞凋亡相关基因Bcl-2以及内源性FASN的表达有关。     

尼美舒利对肝癌细胞增殖及Smad4表达的影响

目的观察选择性环氧化酶-2抑制剂尼美舒利对人肝癌细胞(HepG2)生长及Smad4蛋白表达的影响。方法 MTS法检测不同浓度尼美舒利(25、50、100、200、400μmol/L)作用于HepG2后,对照组和实验组HepG2细胞增殖的变化;TUNEL法检测尼美舒利对HepG2凋亡的影响;荧光显微镜观察尼美舒利干预后,肝癌细胞Smad4蛋白表达的变化。结果尼美舒利对肝癌细胞HepG2的增殖有抑制作用,且随着尼美舒利浓度的增高,其对HepG2增殖的抑制作用逐渐增强;同时可以促进肝癌细胞核固缩、碎裂,诱导其凋亡;尼美舒利干预组肝癌细胞Smad4蛋白的荧光标记量明显高于对照组。结论尼美舒利可以通过上调肝癌细胞Smad4蛋白的表达来抑制肝癌细胞的增殖、促进其凋亡。     

尾型同源盒基因-2过表达对结肠癌细胞生物学性状的影响

目的观察尾型同源盒基因-2(CDX2)对结肠癌细胞生物学性状的影响,探讨CDX2基因在结肠癌发生发展中的作用。方法克隆人结肠CDX2基因,构建含CDX2的pEGFP-C1-CDX2表达载体,同时设pEGFP-C1空载体组及空白对照组。利用脂质体法将pEGFP-C1-CDX2和pEGFP-C1质粒分别转染Lovo细胞,应用Western blotting技术检测Lovo细胞中CDX2基因的表达;应用MTT法及流式细胞仪检测CDX2对Lovo细胞增殖、凋亡及周期的影响;应用ELISA法检测CDX2过表达对Lovo细胞基质金属蛋白酶-2(MMP-2)表达的影响。结果成功构建含CDX2真核表达载体。瞬时转染pEGFP-C1-CDX2的Lovo细胞48 h有较高水平的CDX2蛋白的表达;与pEGFP-C1空载体组及空白对照组比较,转染pEGFP-C1-CDX2组的Lovo细胞在转染72 h时生长未见明显抑制,G1期及S期所占比例无明显改变,凋亡率亦无明显增加(P均>0.05),但MMP-2分泌明显减少(P<0.05)。结论 CDX2过表达对Lovo细胞增殖、凋亡及周期无明显影响,但能够明显减弱Lovo细胞的侵袭力,从而对结肠癌浸润转移起抑制作用。