诊断超声对人早孕绒毛细胞DNA影响的定量研究

目的　探讨诊断超声经腹照射子宫内孕囊对人早孕绒毛细胞DNA的影响。方法　 60名拟行人流的早孕妇女随机分为照射 1 0min组和未照射组 ,各 3 0例。取绒毛组织后 ,以紫外分光光度法和3 2 P标记Alu探针打点杂交法定量检测绒毛细胞DNA单、双链断裂。结果　两种方法检测结果显示 ,照射组与对照组绒毛细胞单、双链DNA的量均无显著性差异 (P >0 .0 5 )。结论　诊断超声宫内照射孕囊 1 0min ,未引起人绒毛细胞DNA单、双链断裂 ,提示未引起绒毛细胞DNA损伤     

单细胞凝胶电泳技术检测小鼠成纤维细胞DNA的氧化损伤及修复

目的观察小鼠成纤维细胞由过氧化氢(H2O2)引起的DNA损伤及其修复,并详细介绍单细胞凝胶电泳技术。方法培养NIH3T3细胞,H2O2造成细胞氧化损伤,单细胞凝胶电泳技术(SCGE,Comet Assay)检测细胞DNA的损伤情况。结果①建立了H2O2致NIH3T3细胞DNA损伤的分级图谱;②H2O2引起的小鼠成纤维细胞DNA单链断裂与H2O2的浓度呈依赖性关系;③细胞在除去H2O2后15 min已出现明显修复,多数修复可在1 h内完成,但少数修复可能需要较长时间才能完成。结论单细胞凝胶电泳技术是一种简便、敏感的检测DNA氧化损伤的方法。     

尖锐湿疣中人乳头瘤病毒DNA检测及存在情况初探

尖锐湿疣的发病与人乳头瘤病毒密切相关。本文用打点杂交法检测了28例尖锐湿疣病理标本,其中14例与HPV-11探针杂交阳性,阳性率50%(14/28)。对其中杂交信号较强的9例进一步分别用BamI Ⅱ、PstI酶解,Southem转印后与HPV-11探针杂交,对病毒DNA存在形式进行分析,结果证实HPV-11在尖锐湿疣细胞中主要以游离形式存在。     

超声及超声微泡介导基因转染的可行性研究

目的探讨超声、超声造影剂微泡介导基因转染的可行性及所需超声照射时间。方法选择超声能量在MI=1.5、超声频率f=8MHz,向人脐静脉内皮细胞(HUVEC)悬液加入微泡后分别超声辐照20s、1、5、10、15、30min,继续培养24h。然后用台盼蓝拒染法计数活细胞,各组与对照组(无辐照)行统计学分析,选择超声辐照的最佳时长。然后,微泡与增强型绿色荧光蛋白(EGFP)质粒充分孵育后,采用该时长进行超声微泡介导基因转染试验,细胞继续培养48h后,通过荧光显微镜观察EGFP的表达。结果超声辐照10、15、30min组细胞计数比对照组降低,差异有统计学差异(P<0.05)。利用超声能量在MI=1.5、超声频率f=8MHz条件下辐照5min,继续培养48h后荧光显微镜观察,有EGFP表达,细胞生长良好。结论超声微泡能够促进质粒进入细胞并转染基因。超声能量MI=1.5、超声频率f=8MHz时,超声微泡介导基因转染的最佳辐照时长为5min。     

经宫颈活取早孕绒毛作产前诊断方法的研究

本文对155例早孕妇女进行了经宫颈获取绒毛方法的研究,并对三种不同来源与直径的抽吸管效果进行了对比。临床实验研究证实在B超指示下取材的成功率较盲吸法高,可达99%。改进后的Ⅱ型吸管将钢丝固定在吸管外,操作时不用抽管芯,比进口管操作简便,取一次检材成功率可达85%,实验结果表明,胚胎着床在子宫后壁较易取材成功。孕期7～8周时,在B超指示下取材一次成功率最高,且取到的组织量也最多。20例孕妇在活取绒毛后观察了3～7天后行人流术。近期观察无一例发生流产和胚胎宫内死亡,证明了本操作的安全性。     

CLONING AND SEQUENCING OF MATURED FRAGMENT OF HUMAN NEVER GROWTH FACTOR GENE

Humannervegrowthfactor (hNGF)istheear liestrevealedcellulargrowthregulator.Researchershaveattainedafairlygoodunderstandingofthisnu tritionalfactorthatisessentialtothesurvival,growthanddifferentiationofcentralandperipheralnerves.Theclinicaluseofnerve growthfactor(NGF)hasapotentialtorepairorregrowdamagednerves,topreventandtreatretrogradeneurologicaldiseases,andto promotedifferentiationofneuro blast .Thepreviousstudieshaveshownthatdirectpu rificationofNGFisdifficultandoflessproductionwhilegen…     

乙型肝炎病毒x抗原在HBV宫内感染中的作用机制

目的研究高复制水平HBV血清感染人绒毛膜滋养细胞株JEG-3后细胞内乙型肝炎病毒x抗原(HBxAg)及其下游蛋白在细胞内的表达情况,探讨HBxAg在HBV宫内感染中的作用。方法对人早孕绒毛膜滋养细胞株JEG-3进行传代培养,将高复制水平乙型肝炎病毒血清(HBV-DNA定量为107～108拷贝/mL)与传代培养的JEG-3细胞共同孵育48～72h;逆转录-聚合酶链式反应检测细胞内HBx-mRNA水平;Western blot检测细胞内HBxAg的表达;免疫组化检测细胞内HBxAg表达以及细胞内磷脂酰肌醇激酶3(PI3K)的表达;流式细胞仪检测细胞内pAKT的表达。结果 HBV感染JEG-3细胞后,在细胞中检测到HBx-mRNA,并检测到HBxAg的表达,同时发现细胞内PI3K及pAKT的表达水平明显增加,经统计学分析,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 HBxAg/PI3K/pAKT抗细胞凋亡途径是高复制水平HBV宫内感染的可能机制。     

胎儿SRY基因用于产前诊断的初步研究

采用ＰＣＲ技术，对５０例胎儿组织ＤＮＡ进行了Ｙ染色体特异的ＳＲＹ基因扩增。扩增片段长度为２５０ｂｐ。结果显示：３２例早孕绒毛ＤＮＡ中，有１７例扩增出特异性片段．１５例未扩增出特异性片段，有、无特异性片段比例为１．１３３：１，接近胎儿自然出生性别之比；１８例中孕引产胎盘ＤＮＡ中８例阳性，１０例阴性，与引产胎儿实际性别完全一致。因ＰＣＲ扩增胎儿ＳＲＹ基因特异性强、灵敏度高，可用于早期胎儿性别的产前诊断。     

2型腺伴随病毒生物安全性的初步形态学观察

用野生型AAV－2感染宿主293细胞后对细胞进行了形态学观察，并采用AAVCap基因探针检测了感染细胞标本中的野生型AAVDNA；采用携带β-半乳糖苷酶基因，而不含AAVrep基因及其表达产物的重组AAV作对照，感染293细胞后检测细胞内β-半乳糖苷酶表达产物，同时对细胞作形态学观察。结果显示野生型AAV－2感染宿主细胞后24～48h，多数细胞胞体收缩、变形，部分细胞死亡、脱落，用Cap基因探针从病变的293细胞基因组DNA中检测到了野生AAVDNA；而被重组AAV感染的293细胞表达了β-半乳糖苷酶，而未出现细胞病变，本结果提示野生型AAV对敏感宿主细胞可表现出毒性作用，其原因可能与rep产物的作用有关。     

DETECTION AND SIGNIFICANCE OF HBV IN RENAL TISSUE OF HBV ASSOCIATED GLOMERULONEPHRITIS PATIENTS

ＳｉｎｃｅＣｏｍｂｅｓ[1] ｆｉｒｓｔｌｙｒｅｐｏｒｔｅｄｏｎｅｃａｓｅｏｆｔｈｅＨＢＶ ａｓｓｏｃｉａｔｅｄｍｅｍｂｒａｎｏｕｓｎｅｐｈｒｏｐａｔｈｙ (ＨＢＶ ｍＧＮ )ｉｎ 1971,ｔｈｅｒｏｌｅｏｆｈｅｐａｔｉｔｉｓＢｖｉｒｕｓ (ＨＢＶ)ｐｌａｙｅｄｉｎ ｇｌｏｍｅｒｕｌｏｎｅｐｈｒｉｔｉｓｗａｓ ｇｅｎｅｒａｌｌｙ ｐａｉｄｃｌｏｓｅａｔｔｅｎｔｉｏｎｗｈｅｎｉｔｓｍｅｃｈａｎｉｓｍｗａｓｉｎｖｅｓｔｉｇａｔ ｅｄ .Ｉｔｒｅｍａｉｎｓｕｎｃｅｒｔａｉｎａｔｐｒｅｓｅｎｔ,ｈｏｗｅｖｅｒ ,ｈｏｗＨＢＶｐｌ…     

DETECTION OF BCL-2 GENE MAJOR BREAKPOINTREGION REARRANGEMENT IN HUMAN B-CELL LYMPHOMAS

Thet(l4;18)chromosomaltranslocationsarerecognizedasacytogeneticabnormalityinB-celllymphomas,especiallyinfollicularlymphomas',>.Aputativeoncogeneonchromosome18bandq2ltermedB-cellleukemia-lymphoma-2(bcl-2)isjux-taposedtosegmentsoftheimmunog1obulin(Ig)heavy-chaingenelocatedonchromosome14bandq32.Bcl-2rearrangementsarecommonlyfoundinfollicularlymphomasintheAmericant2i.Howev-er,theconflictingresultsregardtoincidenceofthetranslocationinJapaneseB-ce1llymphomashasyieldedusingcytogeneticana1ysisandSo…     

人乳头瘤病毒16型转化基因的筛选及次级克隆

人乳头瘤病毒16型转化作用在宫颈癌发生中可能起重要作用,其转化基因主要位于基因组早期区域E6、E7开放阅读框架内。为了进一步研究HPV16转化作用,我们以Pstl+ECoRI酶解HPV16DNA,以pUC-19为载体,大肠杆菌JM103细胞为宿主菌,经两次定向次级克隆,组建了质粒pEP-8。经限制性核酸內切酶和Southem转印杂交证实,其插入片段为-1.43Kb带有E6、E7 ORF的DNA片段。在E6区上游序列还含有两个TATA盒,1个Cat盒和1个细胞特异性增强子。该质粒的组建为检测HPV感染细胞中mRNA转录提供了特异性的早期基因探针,同时为进一步研究HPV转化作用及转化蛋白打下了基础。     

致癌物染毒大鼠体内DNA加合物的检测

本文报道了我们用联苯胺以及联苯胺衍生偶氮染料刚果红,依文思蓝经口染毒大鼠后用~(32)P后标记方法对其肝脏中的DNA加合物的检测结果,3种物质均检出1种DNA加合物,其含量分别为18.17,1.03,1.74μmol/kgDNA。结果表明联苯胺衍生偶氮染料经偶氮还原产生的联苯胺或联苯胺衍生物,能同联苯胺样在大鼠肝内形成加合物,这种DNA加合物很可能是接触联苯胺衍生偶氮染料的人群膀胱癌发病高的原因。     

用聚合酶链反应检测口腔癌组织中人乳头状瘤病毒的E_6转化基因

作者采用聚合酶链反应（ＰＣＲ），并对照核酸斑点杂交法对１０例口腔恶性肿瘤组织中ＨＰＶ１６Ｅ６转化基因进行了检测。这些肿瘤包括６例口腔粘膜鳞癌（ＳＣＣ），２例涎腺腺样囊性癌（ＡＣＣ），１例涎腺恶性多形性腺瘤（ＭＰＡ）和１例腭部软组织胚胎性横纹肌肉瘤（ＥＲ）。对照组为１０例非肿瘤组织，包括唇裂、腭裂粘膜组织标本各５例。结果表明两种方法检测结果基本一致，肿瘤组阳性６例（６／１０），包括４例ＳＳＣ，１例ＡＣＣ和１例ＥＲ（除外１例ＡＣＣ用核酸杂交法检测为弱阳性），其余为阴性；对照组用核酸杂交法检测４例，除１例唇裂标本为弱阳性以外，均为阴性（０／４）；用ＰＣＲ法检测１０例均为阴性结果（０／１０）。两组间ＨＰＶ１６Ｅ６转化基因的检出率有明显差异（Ｐ＜０．０５）。这一结果为开展口腔癌的ＨＰＶ病因学研究提供了参考资料。     

人神经营养素-3成熟蛋白基因克隆及序列分析

应用 PCR技术 ,分别以 2个健康成人末梢血白细胞染色体 DNA为模板 ,扩增出人神经营养素 - 3( h NT- 3)成熟蛋白基因 ,并克隆至原核质粒 p UC1 9中进行基因序列测定。将所得序列与 Gen Bank提供的序列 ( M6 1 1 80 )进行对比 ,结果显示一序列与已知序列完全一致 ,另一序列中第 1 41、2 0 4和 2 1 9位碱基发生了改变 ,但改变的碱基不影响其编码的氨基酸。     

低增生性急性白血病的诊断与治疗(附9例报告)

本文分析了低增生性急性白血病(HAL)与胃烟性白血病(SAL)低原始细胞性白血病(OBL)及MDS的异同点,提出HAL的诊断标准:①初诊病例骨髓呈灶性增生减低或重度减低,原+早(幼)≥本系细胞30%;②骨髓活检印片有核细胞增生亦呈减低现象,病理切片示造血组织减少。应取消SAL及OBL的命名,以防止分类上的混乱。     

THE ANALYSIS OF HUMAN CYTOMEGALOVIRUS INFECTION DURING PREGNANCY IN QINBA MOUNTAINOUS AREA

Humancytomegalovirus (HCMV )isoneofthemostcommoncongenitalvirusinfectioninhu manandalsousuallythecauseofmentalretardationandhearinglossofchildreninthedevelopedworld .TheactiveinfectionpercentageofHCMVisabout0 .3% - 12 .0 %there ,butwithregardtothedevel opingcountries ,especiallythepovertymountainousareas,the percentageofCMVinfectionisun known .QinbamountainousareainShaanxiisapoverty strikingarea ,wheretheeconomicconditionandtheculturearebackwardandtheincidenceofMRishigh .TostudyCMVinfec…     

APPLICATION OF DIGOXIGENIN LABELED PROBES TO DETECTION AND TYPING OF HERPES SIMPLEX VIRUS

ＣｈｕＹｏｎｇｌｉｅ（楚雍烈）；ＬｉｕＱｉａｏｆａｎｇ（刘巧芳）；ＬｉｕＺｈｅｎｇｆｅｎｇ（刘正风）；ＤｕＹｉｈｕａ（杜忆华）；ＬｉｕＹａｎｎａ（刘延娜）ＡＰＰＬＩＣＡＴＩＯＮＯＦＤＩＧＯＸＩＧＥＮＩＮＬＡＢＥＬＥＤＰＲＯＢＥＳＴＯＤＥＴＥＣＴＩＯＮ...     

用分子杂交法探讨HSV、HPV与宫颈癌的相关性

宫颈癌的流行病学特点提示癌的发生与感染因素有关。主要涉及两组病毒:单纯疱疹病毒(HSV)和人乳头瘤病毒(HPV)。为了探讨HSV、HPV 与宫颈癌的关系,我们以~(32)P 标记HSV—2DNA 和HPV DNA,分别用Southern 转印和打点杂交技术,同时检测了73例宫颈癌和14例正常宫颈活检标本。在严格状态下杂交,65例宫颈癌中未发现HSV—2DNA,其中19例癌组织RNA 与HSV—2DNA 杂交阳性。研究发现与宫颈癌组织RNA 杂交阳性的HSV—2DNA 位于0.2～0.33,0.58～0.625图谱单位。此外,在25例宫颈癌中检出了HPV_(16) DNA,2例标本检出了HPV_(18) DNA。在非严格状态下杂交,8例经PstⅠ酶切的宫颈癌组织DNA,Southern 转印后分别与HPV_(16) DNA 和HSV—2BglⅡ克隆片段杂交。结果,6例检出了HPV_(16)DNA,1例既检出了HPV_(16)DNA,又检出了HSV—2DNA。初步结果说明HPV、HSV—2与宫颈癌的发生可能有关。     

胸腔积液中脱落细胞p53基因突变的检测及其意义

目的　探讨聚合酶链反应 -单链构象多态性分析 (PCR- SSCP)检测胸液脱落细胞 p53基因突变在恶性胸腔积液 (MPE)诊断中的可行性及价值。方法　用 PCR- SSCP分别检测了 1 9例MPE及 1 2例结核性胸腔积液中新鲜脱落细胞标本的抑癌基因— p53基因 5～ 8外显子的突变情况 ,并与正常胸膜组织进行对照。结果　 7例 MPE有 p53基因突变 ,突变率为 36.84%。其中5例发生在第 5外显子 ,2例发生在第 7外显子 ,第 6、8外显子未检出突变 ,有 2例突变检出早于临床病理诊断。结核性胸液无 1例突变。结论　提示 p53基因突变在 MPE脱落细胞中较常见 ;PCR- SSCP分析胸液脱落细胞中 p53基因突变可以作为 MPE的一种辅助诊断方法