SH-SY5Y细胞基因片段文库及其数据库的建立

目的　建立SH SY5Y细胞基因片段文库和一种对大量cDNA片段数据管理系统的方法。方法　采用RD PCR技术构建SH SY5Y细胞基因片段文库 ,并对每一个克隆进行测序。应用FOXPRO编制一个软件对其大量的信息进行系统化管理。结果　应用RD PCR技术建立了细胞的cDNA片段文库 ,由 12 0 0余个片段克隆组成 ;应用FOXPRO制作了基因片段数据信息管理系统的软件 ,对此文库片段的测序数据进行管理。结论　采用RD PCR技术是一个很好的建立基因片段文库的方法 ;建立了基因片段数据信息管理系统的软件进行这个文库数据的管理。     

自人脑胶质瘤cDNA文库克隆与鼠SH2—B同源基因片段

自人脑胶质瘤文库克隆新的表达序列标签。方法以人脑胶质瘤文库为模板,利用生长休止特异基因的５’特异引物与载体特异引物组合进行ＰＣＲ扩增,对目的片段进一步克隆,测序。结果扩增出一个３２８ｂｐ的片段,同源性分析发现该片段与鼠ＳＨ２－Ｂ有８６％的同源性。     

羟基红花黄色素A对MPP~+诱导的SH-SY5Y细胞凋亡的保护作用

目的观察羟基红花黄色素A(HSYA)对MPP+诱导的SH-SY5Y细胞凋亡的保护作用,并探讨其作用机制。方法采用MTT法检测细胞存活率,流式细胞术检测细胞凋亡率;二乙酸二氯荧光素盐(DCFH-DA)法检测细胞内活性氧(ROS)含量;罗丹明123(Rhodamine123)染色法检测细胞线粒体膜电位;Western blot法检测Cyt-C、Bcl-2、Bax、Caspase-3和Caspase-9的表达。结果 1mmol/L MPP+处理SH-SY5Y细胞48h后,细胞存活率显著降低,并诱导细胞产生凋亡,凋亡率达(38.6±1.8)%。而HSYA(15、60、120μmol/L)预处理1h,可明显增加SH-SY5Y细胞存活率(P<0.001),并能有效抑制MPP+诱导的细胞调亡(P<0.01);可明显抑制MPP+诱导的细胞内ROS的增加(P<0.001);也能有效抑制MPP+诱导的细胞线粒体膜电位的降低(P<0.01)。120μmol/L HSYA预处理能显著性增加Bcl-2/Bax比值(P<0.01);能够明显抑制MPP+诱导的胞质Cyt-C的释放(P<0.05)和Caspase-3、Caspase-9的高表达(P<0.05,P<0.05)。结论 HSYA预处理能明显提高MPP+诱导的SH-SY5Y细胞损伤的细胞存活率,可有效抑制细胞调亡的发生,其机制可能与抑制细胞线粒体凋亡途径有关。     

基于数据库分析肾透明细胞癌中DLG5的表达及预后判定作用

目的通过研究DLG5(discs large homolog 5)在肾透明细胞癌(ccRCC)临床组织中的表达,阐明其对ccRCC诊断与预后的作用。方法结合癌症基因组图谱(TCGA)数据库与基因表达综合(GEO)数据库、免疫组织化学法分析DLG5在ccRCC组织与正常肾组织中的表达差异,运用LinkedOmics、GEPIA、String-DB等分析DLG5表达与ccRCC临床病理指标、预后的关系及与其可能发生相互作用的蛋白网络。结果 ccRCC中DLG5 mRNA表达高于正常组织,LinkedOmics网站分析发现,其高表达患者总生存率低于低表达者(P=2.997×10~(-5));DLG5表达随TNM分期等级升高而增加;DLG5与增殖细胞核抗原(PCNA)表达的相关系数R=0.19(P=1.1×10~(-6)),与RAD1表达的相关系数R=0.18(P=5.7×10~(-6)),均呈正相关。结论 DLG5高表达是ccRCC不良预后的指标,有望作为预测患者转移、复发、预后等的分子靶标。     

胃癌细胞株SGC—790l及MGC—803中SURVIVIN基因转录与表达的鉴定

目的 探讨胃腺癌细胞株SGC-7901及MGC-803中survivin基因转录与表达情况，为胃癌与survivin基因的相关研究提供帮助。方法 ①利用反转录聚合酶链反应(RT—PCR)及DNA序列测定技术检测两种细胞株中survivin基因mRNA转录情况。②采用免疫组织化学染色鉴定两种细胞株survivin基因有无蛋白表达及其表达程度。结果 从提取的胃癌细胞总RNA中扩增出612bp的DNA片段，与预期的扩增片段大小相符；序列测定显示两细胞株的DNA扩增片段序列与基因库survivin基因mRNA序列完全一致；免疫组织化学染色显示两细胞株中均有survivin蛋白表达产物。结论 中国人胃腺癌细胞株SGC-7901及MGC-803中均存在survivin基因的mRNA转录及蛋白的高表达。