应用PCR方法检测人乳头瘤病毒的E_7转化基因

应用聚合酶链反应技术（ＰＣＲ）检测５４份子宫颈癌活检标本中人乳头瘤病毒１６型（ＨＰＶ－１６）Ｅ７转化基因的存在情况，结果显示阳性率为７２．２％（３９／５４）。ＨＰＶ－１６Ｅ７转化基因在人子宫颈癌组织中的高检出率，证实该转化基因与其发生关系密切。本研究同时证明，ＰＣＲ方法具有敏感、特异、快速和实用特点，值得推广。     

PCR技术对两个Huntington舞蹈病家系的遗传学分析

本文对两个Ｈｕｎｔｉｎｇｔｏｎ舞蹈病家系进行调查并应用ＰＣＲ技术作了基因检测，所用引物５’－ＣＴ－ＧＴＧＧＧＡＣＣＴＣＧＧＣＴＡＡＧＣ－３‘及５’－ＧＴＣＡＧＣＡＣＣＴＣＡＧＡＣＣＡＧＡＧ－３‘，合成了ＰＹＮＺ－３２标志基因，经多态性连锁分析提示它对国人Ｈｕｎｔｉｎｇｔｏｎ舞蹈病进行基因检测和临床应用具有可能性。     

散发性帕金森病α—synuclein基因突变的检测

目的 探讨α－ｓｙｎｕｃｌｅｉｎ基因右突变与散发性帕金森病人的关系。方法 分离ＰＤ组和对照组的外围血基因组ＤＮＡ，采用α－ｓｙｎｕｃｌｅｉｎｘ基因特异引物对其第四外显子进行ＰＣＲ扩增，扩增产物用Ｔｓｐ４５Ⅰ酶切鉴定。结果 两组ＰＣＲ均可扩增出２１６ｂｐ的片段，ＰＣＲ产物不能被Ｔｓｐ４５Ⅰ酶切。结论α－ｓｙｎｕｃｌｅｉｎ基因已知点突变与散发性帕金森病可能无明确关系。     

PCR介导化学合成广谱细胞生长因子基因半分子

建立一种通过ＰＣＲ介导的单链法人工合成基因的新方法。方法采用固相亚磷酰胺法，化学合成广一长因子基因５’端半分子各寡核苷酸片段，其间按搭桥方式相接，通过重叠ＰＣＲ扩增的方法以获得全长半分子基因，再通过带酶切位点的两端引物扩增，以获得大量特异的半分子基因。     

大鼠视觉相关脑区表达序列标签的克隆与鉴定

目的 分析视觉相关脑区基因的差异表达并获取新的表达序列标签。方法 利用差异显示反转录ＰＣＲ（ＤＤＲＴ－ＰＣＲ）技术分析大鼠外侧膝状体与视皮层基因差异表达情况，并筛选差异表达基因片段。结果 经ＤＤＲＴ－ＰＣＲ筛选并通过反Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交法除假阳性，最终获得１个差异表达基因片段。对其进行克隆、测序和同源性比较发现，该片段为一新的表达序列标签，并与心肌集钙蛋白的ｍＲＮＡ具有７４％的同源性。结论 视觉     

小鼠乳腺癌细胞系IL—2基因转导及成瘤性研究

研究白细胞介素２转基因乳腺癌组织在小鼠体内成瘤性。方法 用感染法将人ＩＬ－２基因体外导入乳腺癌细胞系４Ｔ１。转基因细胞４Ｔ１－ＩＬ＝２培养上清内ＩＬ－２分泌量，ＤＮＡ，ＲＮＡ分别ＥＬＩＳＡ，Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交及逆转录ＰＣＲ法分析。体内实验将动物区分４Ｔ１，ＲＴ１／ＩＬ－２混合接种或单独接种三组。     

内皮素受体基因在冠心病患者外周血中表达及意义

目的 研究内皮素受体基因（ｅｎｄｏｔｈｅｌｉｎ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ｇｅｎｅ Ａ，ＥＴＡ）在冠心病患者外周血中的表达情况，探讨其临床意义，并建立外周血ＥＴＡ基因的ＲＴ－ＰＣＲ检测方法。方法 应用ＲＴ－ＰＣＲ技术检测外周血循环中ＥＴＡ基因表达水平。结果 ３５例冠心病患者中有３０例出现阳性条带，阳性率为８５％。对照组２０例中有１６例阳性，阳性率为８０％。对两组中出现的阳性条带应用义作半定量分析，冠心病患     

AT1受体基因型和环境因素对高血压病人群脑梗？…

目的 探讨血管紧张素Ⅱ１型受体基因（ＡＴ１Ｒ基因）Ａ／Ｃ＾１１６６多态性与高血压病并发脑梗死的关系，评价ＡＴ１Ｒ基因以及１０余种侯选危险因素对高血压病人群脑梗死发生的危险贡献。方法 随机收集高血压病例２４０例，按合并脑梗死的无分为两组，采集临床病史资料，留取血标本进行临床生化指标检验和ＡＴ１Ｒ基因分析。基因分析采用ＰＣＲ－ＡＳＯ点杂交法。结果 ①２４０例病例ＡＴ１Ｒ基因的检测，未发现ＣＣ型，两种基     

自人脑胶质瘤cDNA文库克隆与鼠SH2—B同源基因片段

自人脑胶质瘤文库克隆新的表达序列标签。方法以人脑胶质瘤文库为模板,利用生长休止特异基因的５’特异引物与载体特异引物组合进行ＰＣＲ扩增,对目的片段进一步克隆,测序。结果扩增出一个３２８ｂｐ的片段,同源性分析发现该片段与鼠ＳＨ２－Ｂ有８６％的同源性。     

人工合成广谱细胞生长因子全基因

目的 利用ＰＣＲ介导的半酶促半化学法人工合成经改造的广谱细胞生长因子基因。方法 将基因依据其限制性内切酶切点分为左中右三个区段。化学合成若干寡核苷酸小片段,利用ＰＣＲ的方法介导寡核苷酸小片段之间的连接。最后将三条基因区段基因区段组合为完整的基因。结果 各区段及全基因的序列经测定与设计方案相符。结论 广谱细胞茵子基因的成功合成为将来的表达与应用研究创造了条件,同时证明ＰＣＲ介导的人工基因合成法是一种     

用PCR-SSCP方法研究子宫颈癌组织中人乳头瘤病毒E_7基因的变异

运用核酸杂交和聚合酶链式反应（ＰＣＲ）对临床确诊的６１份子宫颈癌Ⅱ～Ⅲ期标本进行了人乳头瘤病毒（ＨＰＶ）１６型Ｅ７基因的检测。非同位素地高辛标记探针斑点杂交阳性检出率为４５．９％，ＰＣＲ检测阳性率为５４．１％，两种检测结果证实ＨＰＶ－１６型感染与子宫颈癌的发生密切相关。进一步用灵敏的单链构象多态性分析法（ＳＳＣＰ）对３３例阳性标本进行分析，发现有２７例单链ＤＮＡ迁移率与正常对照有不同，推测均发生了ＤＮＡ序列的改变，提示ＨＰＶ－１６Ｅ７基因的变异在子宫颈癌组织中是较常见的现象，其与子宫颈癌的发生有一定的关系。     

用PCR技术标记双链DNA探针

利用ＰＣＲ技术制备生物素或地高辛标记的ＤＮＡ探针，经原位杂交试验及敏感性和特异性检测，均取得满意效果。ＰＣＲ标记法具有经济、快速、简易和标记量大等优点。实践中发现Ｂｉｏ／Ｄｉｇ－１１－ｄＵＴＰ的质量、ｄＴＴＰ和Ｂｉｏ／Ｄｉｇ－１１－ｄＵＴＰ的比例及起始ＤＮＡ模板浓度是标记成败的关键。     

聚合酶链反应检测弓形虫核酸的研究

应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术，设计了一对寡核苷酸引物，对弓形虫Ｂ１基因的保守序列进行体外扩增，显示该引物只对弓形虫核酸扩增，可对４个或４个以上弓形虫扩增出明显条带，检测弓形虫核酸的最低量为２．５ｐｇ。该ＰＣＲ对急性感染弓形虫的小鼠，于４８ｈ后就可从部分小鼠（２／５）的外周血中检测到弓形虫核酸，９６ｈ后全部小鼠（５／５）外周血中均检测到弓形虫核酸，而感染２４ｈ后可从其肝、脾、肾等组织中扩增到弓形虫核酸。对３４例孕妇外周血分别用ＥＬＩＳＡ及ＰＣＲ平行检测，ＥＬＩＳＡ测ＩｇＭ阳性者３例，ＰＣＲ扩增阳性者６例（其中３例ＩｇＭ亦阳性），表明ＰＣＲ具有较高的敏感性和特异性。     

人类乳头状甲状腺癌TGF—βmRNA表达

目的 探讨转化生长因子－β１（ＴＧＦ－β１）在人乳头状甲状腺癌和良性腺瘤、桥本氏甲状腺炎及正常组织中的表达差别。方法 利用逆转录多聚酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）及表达峰度定量法，检测４处新鲜甲状腺手术标本组织中ＴＧＦ－β１ ｍＲＮＡ的表达。结果ＴＧＦ－β１ ｍＲＮＡ在４种甲状腺组织中的表达均有较高的阳性率（＞８３．３％），乳头状甲状腺癌中ＴＧＦ－β１ ｍＲＮＡ的表达量较良性腺瘤、桥本氏炎及正常组织均增     

人白细胞介素18cDNA的克隆及序列测定

获取人ＩＬ－１８ｃＤＮ克隆。方法用ＲＴ－ＰＣＲ方法从人外周血单个核细胞中获取人ＩＬ－１８ｃＤＮＡ，将其克隆至天然蛋白表达载体ＰＢＶ２２０中，并进一步亚克隆至融合蛋白表达载体ＰＧＥＸ－４Ｔ－３中，对其进行酶切分析及序列测定。结果测序结果表明克隆至ＰＢＶ２２０中的ＩＬ－１８ｃＤＮＡ包含成熟ＩＬ－１８蛋白的全部编码序列，酶切分析表明一约４７０ｂｐ的基因片段克隆至ＰＧＥＸ－４Ｔ－３中，与理论预计的一致。结     

胎儿SRY基因用于产前诊断的初步研究

采用ＰＣＲ技术，对５０例胎儿组织ＤＮＡ进行了Ｙ染色体特异的ＳＲＹ基因扩增。扩增片段长度为２５０ｂｐ。结果显示：３２例早孕绒毛ＤＮＡ中，有１７例扩增出特异性片段．１５例未扩增出特异性片段，有、无特异性片段比例为１．１３３：１，接近胎儿自然出生性别之比；１８例中孕引产胎盘ＤＮＡ中８例阳性，１０例阴性，与引产胎儿实际性别完全一致。因ＰＣＲ扩增胎儿ＳＲＹ基因特异性强、灵敏度高，可用于早期胎儿性别的产前诊断。     

一种简单快速的血清HBV－DNA模板的制备方法

一种简单快速的血清ＨＢＶ－ＤＮＡ模板的制备方法党双锁，徐仓宝，歧天茂，顾晓慧（医学分子生物学研究室西安７１００６１）ＰＣＲ技术已被广泛用于检测血清乙肝病毒（ＨＢＢ）ＤＮＡ［１］，以便确定是否有ＨＢＶ感染和有无传染性。在ＰＣＲ中，模板制备至关重要，优质...     

PCR法区别HBVRC－和CCC－DNA

乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）的基因组为一松弛环状、部分双链的ＤＮＡ（ＲＣ－ＤＮＡ）。在其负链的５＇与３＇端之间存在一缺口。当ＨＢＶ进入宿主细胞后，基因组转变为共价闭合环状ＤＮＡ（ＣＣＣ－ＤＮＡ）。我们根据ＨＢＶＲＣ－和ＣＣＣ－ＤＮＡ的结构特点，设计了ＰＣＲ区别ＲＣ－和ＣＣＣ－ＤＮＡ。实验表明，该方法可有效地区别两种形式的ＨＢＶＤＮＡ。     

早期复极综合症心率变异性改变

观察了３１例早期复极综合症（ＥａｒｌｙｒｅＰｏｌａｒｉｚａｔｉｏｎｓｙｎｄｒｏｍｅ，ＥＲＳ）Ａ２９例正常对照组·Ｃ率变异（Ｈｅａｒｔｒａｔｅｖａｒｉａｂｉｌｉｔｙ，ＨＲＶ）五个时域指标的改变。结果发现，ＥＲＳ组相邻正常Ｒ－Ｒ问期差值的均万根ＧｅｑｕａｒｅｒｏｏｔｄｔｈｅｍｅａｎｓｑｕａｒｅｄｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅｓｄＳｕｅ－ｃｅｓｓｉｖｅＮＮｉｎｔｅｒｖａｌｓ，ｒＭＳＳＤ）及相邻Ｗ常Ｒ－Ｒ问期至值大于５０ｍｓｉ６数占总Ｒ－Ｒ间期数的百分比（ＰｒｏＰｏｒｔｉｏｎｏｆＮＮ　ｉｎｔｅｒｖａｌｇｒｅａｔｅｒｔｈａｎ５０ｍｓ，ＰＮＮｓ。）较对照增高，其余指标无明显差异。提示ＥＲＳ存在到交感神经活性增高。ＥＲＳ·Ｏ率变异的特征性改变对于该症的诊断及鉴别诊断具有一定意义。     

婴儿型脊肌萎缩症的产前基因诊断

对一婴儿型脊肌萎缩症家系统进行前基因诊断。；方法用ＰＣＲ－酶切技术对一家系孕１７ｗ的风险的胎进行ＳＭＮ基因外显子７缺失的检测。结果此风险胎儿ＳＭＮ基因外显子７缺失可继续妊娠。结论婴儿型脊肌萎缩症可通过产前基因诊断避免患儿出生。