S355J2W耐候钢焊接接头显微组织与力学性能

通过拉伸、疲劳和金相检验试验,对S355J2W耐候钢、空冷状态焊接接头和退火状态焊接接头进行了显微组织和力学性能的研究.结果表明：两种状态焊接接头的力学性能都达到了要求,S355J2W耐候钢退火状态焊接接头的强度低于空冷状态焊接接头的强度;退火状态焊接接头的塑性好于空冷状态焊接接头的塑性;退火状态焊接接头的疲劳寿命低于空冷状态焊接接头的疲劳寿命;退火状态焊接接头与空冷状态焊接接头相比,每个区域的晶粒都有明显的细化和均匀化,空冷状态的焊接接头显微组织的晶界比较清晰.     

抗CUEDC2单克隆抗体的制备及小鼠组织CUEDC2表达谱的检测

目的 制备特异性识别CUE结构域蛋白2(CUE domain containing 2, CUEDC2)的单克隆抗体(mAb),并检测CUEDC2蛋白在小鼠组织中的表达.方法 在大肠杆菌中融合表达GST-hCUEDC2蛋白,纯化后免疫小鼠,制备mAb.采用Western blot方法检测mAb的特异性以及小鼠组织中CUEDC2蛋白的表达.结果 获得了可同时识别人源和鼠源CUEDC2 mAb,利用此mAb检测小鼠组织CUEDC2蛋白的表达水平,发现该蛋白的表达在不同小鼠组织中存在差异.结论 制备的CUEDC2 mAb特异性好,并可检测CUEDC2蛋白在小鼠组织中的表达,该mAb的制备为进一步研究CUEDC2的功能奠定了基础.     

先天性长QT综合征相关人类HERG基因真核表达载体的构建及其功能表达

目的构建先天性长QT综合征相关HERG基因的真核表达载体,观察其在真核细胞中的表达,建立稳定的细胞系,探讨基因的功能。方法原核克隆载体pGEM-HERG经限制性内切酶获得HERG cDNA,将HERG cDNA亚克隆到真核表达载体pcDNA3中,用Lipofectamin2000转染试剂介导将pcDNA3-HERG及荧光真核表达载体pRK5-GFP共转染至HEK-293细胞,利用G-418进行细胞筛选,并用稀释法建立稳定的HEK-HERG细胞系。用全细胞膜片钳技术检测HERG基因的功能表达情况。结果在原核克隆载体pGEM-HERG的基础上构建了HERG的真核表达载体pcDNA3-HERG,并使其在HEK-293细胞中成功表达,建立的HEK-HERG细胞系稳定传代。膜片钳技术检测到了HERG通道电流的表达。结论该方法可成功构建及表达HERG的真核表达载体,为今后突变型HERG的研究奠定了基础。     

应用基因芯片技术筛选克山病差异表达基因

目的应用基因芯片技术筛选克山病(Keshan disease,KD)患者和正常对照者外周血差异表达基因并对其进行分析,探讨KD发病的分子机制。方法收集16例KD患者和16例病区健康对照外周血样品,提取总RNA,纯化后合成cRNA探针;采用Agilent全基因组表达芯片检测基因表达的差异,以SAM4.0软件,结合IPA软件比较KD患者和正常对照个体外周血中的基因表达谱差异、功能及通路分析。结果与对照组相比,KD患者血样中差异表达基因上调的有59个,下调的有19个,基因功能主要涉及代谢、转录、离子通道与运输蛋白、蛋白质的合成与修饰、信号转导等;生物功能主要涉及细胞凋亡、细胞功能修复、分子转运、细胞增殖和分化、细胞间信号转导等。网络蛋白介导的内吞作用是差异最显著的通路。结论 KD患者外周血单核淋巴细胞多个差异表达基因显著不同于正常人,主要涉及细胞增殖、细胞凋亡、细胞功能修复等,这些基因可能在克山病发生发展中发挥重要的作用。     

Zbtb7基因mRNA在佛波酯诱导的白血病细胞分化中表达上调

目的 分析白血病细胞系分化前后Zbtb7基因mRNA表达水平的变化情况.方法 50 nmol/L佛波酯(PMA)刺激6孔板培养的U937、K562白血病细胞系,在诱导刺激的0、1、3、5 d,荧光定量PCR检测细胞内Zbtb7基因mRNA表达量的改变.结果 相对于正常培养的细胞,U937、K562细胞在PMA刺激后Zbtb7 mRNA表达增高,差异有统计学意义(P<0.01, P<0.05),且增高量存在时间依赖性.结论 白血病细胞分化过程中伴随有Zbtb7基因表达的改变.     

着丝粒蛋白W在脑胶质瘤中的表达及其对侵袭的作用

目的探讨着丝粒蛋白W(centromere protein W,CENP-W)在人脑胶质瘤中的表达水平及与预后的相关性,并探讨其对脑胶质瘤细胞侵袭作用的影响。方法在高级别胶质瘤组织、低级别胶质瘤及瘤旁正常脑组织中,采用蛋白质印迹法、实时荧光定量PCR法检测CENP-W的表达水平,并统计分析表达水平与胶质瘤临床病理特征及预后的相关性,应用特异性siRNA干扰U251细胞中CENP-W表达使其下调后,通过Transwell侵袭实验观察转染CENPW siRNA对U251细胞侵袭能力的影响。结果胶质瘤组织CENP-W表达水平明显高于正常脑组织,并且与胶质瘤的病理级别呈正相关性;转染成功后,与空白对照组及阴性对照组比较,转染CENP-W-siRNA组的细胞侵袭及迁移能力均下降,Kaplan-Meier生存分析及Log-rank检验显示低表达CENP-W患者的PFS明显长于高表达组。结论CENP-W表达与胶质瘤的病理级别呈正相关,CENP-W可以促进脑胶质瘤的侵袭,预示CENP-W可作为胶质瘤治疗新靶点。     

宫颈癌组织中erbB3、erbB4的表达及意义

目的　探讨erbB3、erbB4在宫颈癌中的表达及意义。方法　应用免疫组织化学HGH SABC方法检测了 5 0例宫颈癌组织 (鳞癌、腺癌各 2 5例 )、15例正常宫颈上皮组织中erbB3、erbB4的表达。结果　宫颈癌组织中erbB3、erbB4阳性表达率显著高于正常宫颈上皮组织 (P <0 .0 5 ) ,两者表达呈显著正相关关系 (r =0 .5 872 ,P <0 .0 0 1)。鳞癌中erbB3、erbB4的表达高于腺癌 ,但无统计学差异 (P >0 .0 5 )。erbB3、erbB4的表达与癌细胞分化程度呈负相关、与临床分期 (FIGO分期 )呈正相关 ,但无论erbB3、erbB4单独表达或同时表达均与宫颈癌预后无统计学意义。结论　erbB3、erbB4在宫颈癌发生发展中可能起到一定作用 ,可以预测宫颈癌恶性程度 ,但不能作为宫颈癌预后独立评价指标     

自然流产者绒毛组织中印记基因H19的表达及意义

目的探讨印记基因H19在自然流产者绒毛组织中的表达及意义。方法采用逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)技术检测45例自然流产患者和30例正常早孕妇女的绒毛组织中H19特殊等位基因表达。结果自然流产患者杂合子绒毛组织21例中19例表达双等位基因,表达率为90.47%(19/21),而正常早孕妇女杂合子绒毛组织13例中H19皆表达单等位基因,无双等位基因表达,表达率为0(0/13),两组比较,双等位基因表达率有统计学意义(P<0.05)。结论H19基因印记丢失可能是造成自然流产的重要原因。     

W-Mo梯度飞片的显微组织特征研究

利用电子探讨和扫描电镜对W－Mo梯度飞片的化学元素分布，显微组织和断口形貌进行了研究。结果表明：W－Mo梯度材料整体致密，成分分布呈梯度变化特征；富钨区，富钼区主要表现为脆性断裂，界面处具有明显的韧性断裂特征。     

丙型肝炎病毒NS3-NS4基因的表达及鉴定

目的　构建丙型肝炎病毒 (HCV)非结构蛋白NS3 NS4全长基因重组质粒并诱导表达 ,鉴定NS3 NS4蛋白的抗原性。方法　应用PCR技术从pUC19/HCV中扩增目的基因 ,构建重组表达质粒 ,进行原核表达 ,用SDS PAGE、ELISA技术对表达产物的抗原性进行鉴定。结果　成功构建、表达了重组质粒pBV2 2 0 /NS3 NS4 ,用 5 0份质控标准血清对表达蛋白质进行抗原性检测 ,与第二代诊断试剂相比 ,总符合率为 96 %。结论　全长NS3 NS4蛋白是一个优势免疫原性区 ,应该是HCVEIA诊断试剂的有效成分。     

W12的传承

模型是对汽车艺术的一种诠释,对经典的一种传承,就像奥迪的粉丝钟情于W12一样,在两代德意志战车新老交替之时,让我们去品味奥迪这两件艺术品带给我们的震撼吧。     

乳腺癌nm23与组织蛋酶D蛋白表达及其预后意义

目的 探讨ｍｍ２３、组织蛋白酶Ｄ蛋白表达在乳腺癌预后及转移中的价值。方法 应用免疫组织化学方法,观察随访３年以上的５２例乳腺癌组织中ｎｍ２３和Ｃａｔｈ－Ｄ蛋白 表达。结果 癌组织ｎｍ２３高表达２４例（４６．２％）,Ｃａｔｈ－Ｄ阳性３０例（５７．７％）。ｎｍ２３的表达与淋巴结转移及预后相关;Ｃａｔｈ－Ｄ的表达与预后相关;ｎｍ２３的表达与Ｃａｔｈ－Ｄ的表达呈负相关。结论 ｎｍ２３与Ｃａｔｈ－Ｄ蛋白表达     

HBV-TF抗原特异性的研究

应用抗原特异性玫瑰花结试验对比研究HBV-TF、N-TF及TMP的生物活性及抗原特异性。实验发现经HBV-TF作用的绵羊淋巴细胞与HBsAg包被的绵羊红血球形成的抗原特异性玫瑰花结阳性率最高,为4.5%,而经N-TF及TMP作用的绵羊淋巴细胞仅形成极少的玫瑰花结,分别为0.35%和0.33%与HBV-TF作用组相比有非常显著的差异(P<0.01)。     

HBV preS1基因酵母表达载体的构建及表达

目的 构建HBV preS1基因的酵母表达载体,探讨HBV preS1蛋白的功能.方法 以HBV ayw亚型全长质粒PCP10为模板,聚合酶链反应(polymerase chain reaction, PCR)扩增HBV preS1基因,克隆到pGEM-T载体中命名为T-preS1,以NcoⅠ和MluⅠ双酶切T-preS1后回收与酵母表达载体pSos连接,对重组质粒进行序列测定后命名为pSos-preS1,经醋酸锂法将其转化酵母菌cdc25(a),提取酵母蛋白质进行Western免疫印迹分析.结果 成功构建了HBV preS1基因的酵母表达载体,Western免疫印迹分析显示HBV preS1基因在酵母细胞中正确表达.结论 pSos-preS1的构建为通过SOS招募系统(sos-recruitment system, SRS)筛选与HBV preS1蛋白相互作用的蛋白和进一步探讨HBV preS1蛋白在HBV致病中的作用奠定了基础.     

双重特异性磷酸酶15基因对吗啡敏化的调控作用

目的研究小鼠伏隔核(nucleus accumbens, NAc)中双重特异性磷酸酶15(dual-specificity phosphatase 15,DUSP15)在吗啡敏化中的作用。方法观察吗啡对小鼠自主活动及急性吗啡诱导小鼠活动的增强效应。采用Western blotting检测小鼠NAc中细胞外调节蛋白激酶(extracellular regulated protein kinases, ERK)、p-ERK和DUSP15的表达。利用脑立体定位微量注射技术向小鼠NAc注射DUSP15过表达病毒(AAV-DUSP15),免疫荧光染色明确病毒表达。Western blotting检测AAV-DUSP15对DUSP15、ERK与p-ERK表达的影响;旷场实验评估小鼠自主活动情况。结果 小鼠腹腔连续注射10 mg/kg吗啡7 d(连续注射1针/d),停药1周可诱导小鼠敏化行为。与盐水对照组相比,吗啡组小鼠ERK活化水平增高(p-ERK/ERK),DUSP15表达水平降低。与盐水对照组相比,向吗啡小鼠NAc注射AAV-DUSP15,DUSP15表达水平显著增高,ERK活化水平显著降低;...     

原位杂交检测CD44v6和P16基因在食管癌组织中的表达

目的　探讨CD4 4v6和P16基因表达与食管癌生物学行为的关系。方法　应用催化信号放大原位杂交技术 ,对6 5例食管癌组织进行CD4 4v6mRNA和P16mRNA检测 ,结合肿瘤的病理生物学行为和临床随访资料分析。结果　在食管癌组织中 ,CD4 4v6mRNA和P16mRNA的阳性表达率分别为 6 1.5 %和 4 3.1%。CD4 4v6mRNA高表达和P16mRNA低表达与食管癌浸润、淋巴结转移和患者预后密切相关 (P <0 .0 5 )。食管癌中CD4 4v6表达与P16mRNA表达呈负相关性 (r=- 0 .39,P <0 .0 0 5 )。结论　CD4 4v6和P16基因异常表达与食管癌的生物学行为密切相关 ,可作为预测食管癌转移潜能和评估食管癌预后的客观指标     

构建SLE患者novel microRNA差异性表达谱及其靶基因的功能分析

目的构建系统性红斑狼疮(SLE)患者与健康对照者(NC)新小核糖核酸(novel microRNA)的差异性表达谱;对显著性差异表达的novel microRNA进行靶基因预测,对靶基因的GO(gene ontology)及KEGG(kyoto encyclopedia of genes and genomes)的功能进行分析,探讨SLE的发病机制。方法运用高通量测序技术(high-throughput sequencing)获得SLE与NC总的RNA,对总RNA进行长度分布、基因比对、RNA分类注释、RNA特有及公共序列统计后,运用Mireap软件预测novel microRNA。得到novel microRNA进行差异性表达分析,寻找两组之间具有显著性表达的novel microRNA。采用Targetscan软件对差异性表达的novel microRNA进行靶基因预测,并选取靶基因借用DAVID功能注释软件对其参与的生物学过程进行GO富集及KEGG通路分析。结果 61个novel microRNAs在SLE与NC组之间具有显著差异性表达,其中43个上调表达,18个下调表达。差异性表达novel microRNA的靶基因主要富集在细胞与小分子结合、细胞器官与细胞膜、细胞代谢中。靶基因KEGG通路主要体现在粘附复合体通路中。结论 SLE与NC的novel microRNA存在差异性表达。差异性表达novel microRNA的靶基因可能在SLE的发病机制与临床症状中起着重要作用,可能作为特异性靶点深入研究。     

胰腺癌转移相关基因的生物信息学分析

目的通过对胰腺癌转移相关基因芯片数据进行生物信息学分析,为探索胰腺癌转移的分子机制提供理论依据。方法从基因芯片公共数据库(GEO)下载胰腺癌转移相关基因芯片数据,经R语言数据预处理及筛选差异表达基因后,分别通过DAVID在线分析软件、STRING在线数据库、Cytoscape软件和GEPIA在线分析工具进行差异表达基因的功能注释、通路分析、蛋白互作网络分析及预后分析。结果共筛选出109个胰腺癌转移差异表达基因,其中上调49个,下调60个;功能注释和通路分析发现,这些基因主要集中在急性炎症反应、蛋白质活化级联、细胞外基质构建、细胞外基质分解等生物学过程,以及补体和凝血级联、PPAR信号通路、PI3K-Akt信号通路、ECM受体相互作用等通路。蛋白互作网络分析获得2个关键模块和10个关键基因,分别为ORM1、IGFBP1、HPX、F2、APOA1、ALB、PLG、SERPINC1、KNG1和INS。预后分析得到4个基因的表达水平与胰腺癌患者总生存时间显著相关,分别是SCG5、CRYBA2、CPE和CHGB。结论通过生物信息学的方法对胰腺癌转移相关基因芯片数据进行数据挖掘,为深入研究胰腺癌转移的相关分子机制提供了理论依据。     

双特异性磷酸酶1在乳腺癌及他莫昔芬耐药病例中的表达变化

目的初步探讨双特异性磷酸酶1(DUSP1)在乳腺癌患者以及乳腺癌他莫昔芬(TAM)耐药患者中的表达变化及其与临床预后的关系。方法使用TCGA数据库分析DUSP1在1 215名不同临床病理特点的乳腺癌患者中的分布和表达情况,使用生存分析数据库分析DUSP1表达水平与乳腺癌患者生存情况的关系;收集8例乳腺癌TAM耐药前后的配对标本进行免疫组化染色,分析DUSP1在耐药前后肿瘤标本中蛋白表达的变化情况。结果 DUSP1在乳腺癌组织中的表达水平显著低于正常乳腺组织(P<0.001),且在Luminal A亚型中的表达高于其他亚型(P<0.001);DUSP1的表达水平与乳腺癌患者的总生存(P<0.05)和无复发生存(P<0.001)呈正相关,与接受内分泌治疗的乳腺癌患者的无复发生存呈正相关(P<0.001);DUSP1在8例TAM耐药患者的配对标本中表达变化未见统计学差异(P>0.05)。结论在接受内分泌治疗的患者中DUSP1高表达的患者有更好的无复发生存,但是在8例配对标本的检测中未发现DUSP1的表达差异有统计学意义。提示DUSP1与TAM耐药之间关系的探索有待更大样本的临床研究和更深入的细胞和分子生物学实验。