氟对小鼠釉鞘蛋白基因表达的影响

目的探讨氟对小鼠釉鞘蛋白基因表达的影响。方法在建立小鼠中度及重度氟斑牙模型的基础上,应用原位杂交技术观察对照组(饮用去离子水)、低氟组(饮水F-为50 mg/L)、高氟组(饮水F-为150 mg/L)小鼠下切牙发育过程中,釉鞘蛋白mRNA在成釉细胞增殖分化期、分泌期及成熟期的表达情况。结果对照组小鼠下切牙形态正常,牙齿表面呈半透明、乳白色,光滑而有光泽。镜下釉鞘蛋白mRNA在成釉细胞增殖分化期表达为阴性;分泌初期细胞内及新生釉基质中开始出现弱阳性表达;至分泌期,细胞内及新生釉基质中均呈强阳性表达;成熟釉质中无釉鞘蛋白mRNA的阳性表达。低氟组小鼠下切牙表面有或宽或窄的白垩色釉质矿化不良区与矿化较好的釉质条带相交替,镜下釉鞘蛋白mRNA在釉牙本质界附近的釉基质中有弱阳性表达。高氟组小鼠的下切牙表面大面积白垩色区域伴局灶性釉质缺损,镜下成釉细胞排列紊乱;在成釉细胞分泌期,釉基质分泌几乎中断;釉鞘蛋白mRNA在新生釉基质表面及釉牙本质界处阳性表达,在成釉细胞分泌期,其表达多次中断,并且在深层釉基质中也可见到釉鞘蛋白mRNA的较强阳性表达。结论氟影响釉鞘蛋白mRNA在成釉细胞、釉基质中的表达,过高浓度的氟周期性抑制成釉细胞分泌釉基质的功能,从而导致釉质的矿化不全、矿化不均及局灶性缺损。     

釉基质蛋白酶与氟牙症的发病机制

目前认为,釉原蛋白降解延迟和清除障碍是氟牙症形成的关键。一些研究表明,氟可减少在釉原蛋白被水解、清除过程中发挥重要作用的釉基质蛋白酶的表达。釉基质蛋白溶解酶包括基质金属蛋白酶(MMP-20)和丝氨酸蛋白酶(KLK4)。本文从分子结构和生物学功能等方面对两种酶的研究现状进行了系统回顾,同时分析了氟对釉基质蛋白酶的可能影响及其与氟牙症发病机制间的关系。     

高氟对小鼠磨牙牙胚发育的影响

目的 探讨高氟环境对小鼠磨牙牙胚发育的影响.方法 建立小鼠急性氟中毒动物模型,采用HE染色方法,观察高氟环境下颌第一磨牙牙胚发育的蕾状期、帽状期、钟状形态发生期、分化期、分泌期、成熟期成釉细胞形态的变化,并同时观察正常对照小鼠的牙胚发育情况.结果 对照组磨牙发育为钟状期时,实验组仍处于帽状期.实验组钟状分化、分泌期成釉细胞细胞变矮,部分细胞极性消失,细胞排列紊乱.结论 过量氟的摄入可使磨牙发育明显延迟.过量氟对钟状分化、分泌期成釉细胞的细胞形态有较强影响.     

hGDF5基因转染对骨髓间充质干细胞增殖和分化的影响

目的探讨人生长分化因子5(hGDF5)基因转染对骨髓间充质干细胞(BMSCs)增殖及分化的影响。方法采用脂质体介导方法将hGDF5基因转入体外培养的兔BMSCs,用逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)、间接免疫荧光检测hGDF5 mRNA和蛋白质的表达,并通过检测碱性磷酸酶活性、细胞增殖能力(MTT法)、Ⅱ型胶原(ColⅡ)以及蛋白多糖(PG)的表达,分析转染hGDF5对BMSCs增殖、分化的影响。结果hGDF5 mRNA及蛋白在基因转染细胞内得到正确表达;hGDF5基因转染组和对照组相比,ColⅡ、PG表达水平显著增高(P<0.01,P<0.01),而碱性磷酸酶活性和细胞增殖能力无明显变化(P>0.05)。结论外源基因转染可以使BMSCs表达有生物活性的hGDF5。高表达的hGDF5可以促进BMSCs向软骨表型分化,但对细胞增殖和碱性磷酸酶活性无明显影响。     

低氧促进体外培养的星形胶质细胞内β-catenin积聚的机制

目的 探讨低氧对星形胶质细胞内β-catenin积聚的机制.方法 体外分离昆明小鼠海马星形胶质细胞,分别置于常氧和低氧条件下培养12h和24h后,利用RT-PCR和Western blot法检测星形胶质细胞内Wnt通路相关蛋白Wnt3、Wnt3a及磷脂酰肌醇-3激酶/Akt(PI3K/Akt)通路中磷酸化Akt(p-Akt)和磷酸化糖原合成酶激酶-3β(p-GSK-3β)蛋白的表达情况.结果 常氧培养的海马星形胶质细胞内存在Wnt3的表达,低氧对海马星形胶质细胞内Wnt3的表达无影响(P>0.05);常氧和低氧培养的海马星形胶质细胞内均不存在Wnt3a表达;低氧增加海马星形胶质细胞的p-Akt和p-GSK-3β蛋白水平(P<0.05).结论 低氧通过增加海马星形胶质细胞的p-Akt蛋白和p-GSK-3β蛋白水平促进β-catenin积聚.     

大骨节病差异表达基因PAPSS2对成骨细胞矿化及碱性磷酸酶活性的影响

目的探讨大骨节病差异表达基因PAPSS2在MC3T3-E1细胞成骨样分化过程中的表达及其对碱性磷酸酶(ALP)活性和细胞矿化的影响。方法培养MC3T3-E1细胞并诱导成骨分化,观察PAPSS2在成骨细胞分化过程中的基因及蛋白表达情况;用慢病毒介导的RNA干扰(RNAi)技术或逆转录病毒转染高表达载体,分别构建PAPSS2低表达慢病毒及逆转录病毒高表达载体包装,滴度测定,验证细胞转染效率;分别转染MC3T3-E1细胞并设空白对照组,观察PAPSS2沉默或高表达后ALP活性的变化及细胞成骨矿化的影响。结果 PAPSS2在成骨细胞分化过程中mRNA及蛋白均随着矿化过程表达增加。用慢病毒介导的RNAi技术,成功降低了MC3T3-E1成骨细胞中PAPSS2的表达,使用逆转录病毒转染高表达载体显著增加PAPSS2基因的表达。PAPSS2沉默表达时,ALP活性和细胞矿化作用显著降低,高表达后其作用相反。结论 PAPSS2可调节成骨细胞ALP活性和细胞矿化作用,其异常表达可能与大骨节病骨骼病变相关。     

AngⅡ对腹膜间皮细胞ROS和NADPH氧化酶亚基p47phox表达的影响及黄芪的干预作用

目的 探讨AngⅡ对腹膜间皮细胞ROS和NADPH氧化酶亚基p47phox表达的影响及二代腹膜间皮细胞经黄芪注射液(AGI)预处理后的干预作用.方法 体外培养SD大鼠原代腹膜间皮细胞至2代,静止24h后,随机分为:正常对照组(A组),AngⅡ(10-7mol/L)组(B组),AngⅡ+AGI(2g/mL)组(C组),AngⅡ+AGI(1g/mL)组(D组).用荧光染料(DCF)及激光共聚焦显微镜检测细胞内活性氧(ROS).RT-PCR检测NADPH氧化酶亚基p47phox的表达.Western印迹检测p47phox的蛋白表达.结果 ①AngⅡ可显著增加大鼠腹膜间皮细胞ROS产生,刺激20min后,ROS的表达较对照组显著上升(P<0.05).AGI可显著抑制AngⅡ刺激后ROS的产生,且AGI对ROS的抑制程度与AGI的浓度呈正相关,B组、C组、D组三组比较后差异显著(P<0.05);②大鼠腹膜间皮细胞经AngⅡ刺激后,NADPH氧化酶亚基p47phox mRNA和蛋白的表达均上升,AGI可抑制AngⅡ诱导的p47phox mRNA的表达上调,C、D两组分别与B组比较后差异显著(P<0.05).结论 AngⅡ可诱导大鼠腹膜间皮细胞产生的ROS增加、NADPH氧化酶亚基p47phox表达上调;AGI可抑制NADPH氧化酶的表达和活性及ROS的产生,从而为AGI防治腹膜纤维化提供了理论依据.     

整合素β1在小鼠两种不同发育模式的切牙和磨牙牙胚中的表达

目的 探讨整合素β1在小鼠切牙和磨牙牙胚发育中的作用.方法 采用免疫组织化学方法,观察整合素β1在小鼠切牙发育的分泌前期、分泌期、转换期、成熟期以及磨牙胚发育的蕾状期、帽状期、钟状形态发生期、分化期、分泌期、成熟期的表达.结果 整合素β1在小鼠切牙发育的分泌前期、分泌期、转换期、成熟期成釉细胞表达阳性.中间层、星网层表...     

基质细胞衍生因子在哮喘小鼠气道中的表达

目的 观察基质细胞衍生因子-1(stromal-derived factor-1, SDF-1)在鸡卵清蛋白(OVA)诱导小鼠哮喘模型中的表达,探索哮喘气道重塑的发生机制.方法 40只雌性SPF级C57BL/6小鼠,体重18～22g,随机分为哮喘组和对照组.按照文献方法建立OVA小鼠哮喘模型.两组动物于末次雾化结束后24h处死,取肺组织行病理切片,苏木精-伊红染色(HE)观察肺脏的组织病理学变化;逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)、免疫印迹法(Western blot)、免疫组织化学(immunohistochemistry,IH)技术检测肺组织SDF-1的表达.结果 ①哮喘组支气管上皮细胞脱落、气道壁增厚,细支气管和血管周围有大量炎细胞浸润;②哮喘组肺组织SDF-1在RT-PCR、Western blot及IH中均为阳性表达,而对照组则否.结论 小鼠哮喘时肺组织分泌大量细胞趋化因子SDF-1,可能是哮喘气道重塑的重要因素之一.     

葛根素抑制强直性脊柱炎患者成纤维细胞的增殖和成骨分化

目的探讨葛根素对强直性脊柱炎(ankylosing spondylitis, AS)患者成纤维细胞增殖和成骨分化的影响及其机制。方法从AS患者和股骨颈骨折患者髋关节囊组织中分离培养成纤维细胞,采用不同浓度的葛根素(25、50、100、150、200 mg/L)处理细胞,CCK-8检测细胞增殖,Western blot检测IL-6、TNF-α、骨钙素(OCN)和骨桥蛋白(OPN)的蛋白表达,检测细胞的ALP活性,qRT-PCR检测ColⅠ基因的mRNA表达。结果在正常成纤维细胞中,150 mg/L和200 mg/L的葛根素能够明显抑制细胞增殖。在AS成纤维细胞中,100、150、200 mg/L的葛根素对细胞增殖有明显抑制作用,并且200 mg/L的葛根素对两种细胞增殖的抑制作用最强。葛根素降低正常成纤维细胞和AS患者成纤维细胞中致炎性细胞因子IL-6和TNF-α的蛋白表达,减弱细胞ALP活性,降低ColⅠ基因的mRNA表达,并抑制OCN和OPN的蛋白表达。结论葛根素可以抑制正常成纤维细胞和AS患者成纤维细胞的增殖和成骨性分化。