宫颈癌患者人乳头瘤病毒16型E6基因的克隆及序列分析

目的　分析中国陕西地区宫颈癌患者人乳头瘤病毒 16型 (HPV16型 )E6基因的结构特点。方法　采用PCR技术扩增了 1例HPV16阳性宫颈癌患者癌组织中HPV16E6基因 ,并对其进行了克隆及全序列分析。结果　成功地克隆了HPV16E6基因 ,与GenBank收录的原型相比 ,E6基因中有 2个碱基发生突变 ,推导其编码的氨基酸有 1个发生了变化。结论　中国人宫颈癌HPV16E6基因结构有一定的变异     

人宫颈癌FHIT基因的表达改变与HPV16感染的关系

目的探讨FHIT基因表达改变和HPV16感染与人宫颈癌发生的关系。方法采用反转录-巢式聚合酶链反应方法测定5种人宫颈癌细胞株(SiHa、HeLa、RJC-1、CS1213、C4-1)和58例宫颈癌组织与18例正常宫颈对照中FHIT mRNA的表达;回收7例FHIT基因不同的转录扩增产物,纯化后进行DNA测序;PCR技术检测组织中HPV16型的感染状况。结果SiHa、HeLa和C4-1宫颈癌细胞中有FHIT基因转录异常;宫颈癌组织中39例(67.2%)存在FHIT基因异常表达,显著高于正常对照组0例(0%)(P<0.05);37例(63.8%)有HPV16感染,显著高于正常对照组1例(5.0%)(P<0.05)。宫颈癌组织中有HPV16感染患者的FHIT基因表达异常数(30/37)显著高于HPV16未感染的患者(9/21),二者之间存在相关性(P<0.01);FHIT基因的异常表达和HPV16的感染与患者的年龄、临床分期、肿瘤直径、病理分级及是否伴淋巴结转移无相关性(P>0.05)。序列分析发现FHIT基因转录本主要存在不同程度的外显子的缺失,以第5位和第6位外显子的缺失为主,未见未知序列的插入和点突变。结论FHIT基因在人宫颈癌组织中的异常表达率明显增高,且与HPV16的感染有关,这些改变可能在人宫颈鳞癌的发生中起着重要作用。     

TDI-FP法检测宫颈癌组织中人乳头瘤病毒16、18型别感染

目的通过模板介导的染料终止子掺入-荧光偏振技术(TDI-FP)检测宫颈癌组织中人乳头瘤病毒(HPV)16、18感染情况,以初步探讨本地区HPV流行特点。方法基于TDI-FP的基本原理,以HPV16、18 L1克隆重组质粒为模板,用HPV通用引物GP5+/6+PCR扩增,再通过检测探针杂交后掺入的特异荧光素标记碱基的不同来判断病毒的类型。结果在宫颈癌组织中HPV16和18型阳性率分别为61.8%及32.7%,高危型HPV占宫颈癌HPV的98.1%,宫颈癌组高危型HPV阳性率显著高于癌前病变组和慢性宫颈炎组。结论初步提示宫颈癌患者HPV感染以高危型为主,其中有超过一半的患者以HPV16型感染为主。TDI-FP是一新兴的高通量基因检测技术,快速、可靠、敏感、特异并且操作简便,更适合于大规模临床筛查及在临床上广泛推广应用。     

人乳头瘤病毒16型转化基因的筛选及次级克隆

人乳头瘤病毒16型转化作用在宫颈癌发生中可能起重要作用,其转化基因主要位于基因组早期区域E6、E7开放阅读框架内。为了进一步研究HPV16转化作用,我们以Pstl+ECoRI酶解HPV16DNA,以pUC-19为载体,大肠杆菌JM103细胞为宿主菌,经两次定向次级克隆,组建了质粒pEP-8。经限制性核酸內切酶和Southem转印杂交证实,其插入片段为-1.43Kb带有E6、E7 ORF的DNA片段。在E6区上游序列还含有两个TATA盒,1个Cat盒和1个细胞特异性增强子。该质粒的组建为检测HPV感染细胞中mRNA转录提供了特异性的早期基因探针,同时为进一步研究HPV转化作用及转化蛋白打下了基础。     

人乳头瘤病毒16型(湖北株)E7蛋白在NIH/3T3细胞中的表达和定位

目的　将带有人乳头瘤病毒 1 6型 (湖北株 )E7基因的真核表达载体 pL(E7 HB)SN导入NIH/3T3细胞进行瞬时表达。方法　重组质粒转染 3T3细胞通过DNA 磷酸钙共沉淀法 ;E7基因表达的检测采用RT PCR和间接免疫荧光实验。结果　E7基因导入真核细胞后能有效转录并表达E7蛋白 ,通过免疫荧光染色可看到E7蛋白主要定位在胞浆中 ,细胞核中也有 ,但量较少。结论　这可能和湖北株HPV1 6E7基因发生突变有关。     

DIG－DNA探针检测宫颈癌组织中人乳头瘤病毒6、11、16、18型DNA

用地高辛配基（Ｄｉｇｏｘｉｎｇｅｎｉｎ）分别标记，制备ＨＰＶ－６、ＨＰＶ－１１、ＨＰＶ－１６及ＨＰＶ－１８的ＤＮＡ探针，应用核酸杂交技术，对３７例宫颈癌活检组织ＤＮＡ作了检测，各型ＨＰＶＤＮＡ的检出率为：ＨＰＶ－６０％（０／３７）、ＨＰＶ－１１２．７（１／３７）、ＨＰＶ－１６６７．５％（２５／３７）、ＨＰＶ－１８１３．５％（５／３７），联合应用ＨＰＶ－１６和ＨＰＶ－１８探针共同检测结果为８１％（３０／３７）。结果显示：我国宫颈癌的发生与ＨＰＶ感染密切相关，联合应用高危型ＨＰＶ探针可提高检出率并可省时、简便。ＤＩＧ标记探针因具特异、敏感、安全和简便诸特点，宜推广应用。     

DETECTION OF HPV 16 E_6G ENE IN CERVICAL CANCER TISSUE

ＤＥＴＥＣＴＩＯＮＯＦＨＰＶ１６Ｅ_６ＧＥＮＥＩＮＣＥＲＶＩＣＡＬＣＡＮＣＥＲＴＩＳＳＵＥ￥ＹｕａｎＹｕｈａｎｇ（袁育康）；ＬｉｕＨａｎｘｉｎ（刘汉馨）；ＬｉｕＺｂｅｎｇｒｅｎｇ（刘正风）；ＣｈｕＹｏｎｇｌｉｅ（楚雍烈）（ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＭｉ?..     

THE CONSTRUCTION OF HPV16 L1 RECOMBINANT PLASMID AND ITS EXPRESSION IN MAMMALIAN CELLS

Ｐｒｅｖｉｏｕｓｓｔｕｄｉｅｓｈａｖｅｄｅｍｏｎｓｔｒａｔｅｄｔｈａｔｇｅｎｉｔａｌｉｎｆｅｃｔｉｏｎｗｉｔｈｈｉｇｈ－ｒｉｓｋｔｙｐｅｓｏｆｈｕｍａｎｐａｐｉｌｌｏｍａｖｉｒｕｓ（ＨＰＶ）,ｍｏｓｔｏｆｔｅｎＨＰＶ１６,ａｒｅｔｈｅｍｏｓｔｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｒｉｓｋｆａｃｔｏｒｆｏｒｔｈｅｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔｏｆｃｅｒｖｉｃａｌｃａｎｃｅｒ．ＨＰＶ１６ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌｐｒｏｔｅｉｎｓａｎｄｎａｔｉｖｅｖｉｒｉｏｎｓｏｎｌｙｅｘｉｓｔｉｎｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｅｄｓｕｐｅｒｆｉｃｉａ…     

人子宫颈癌中的HPV_(16)E_6mRNA、p~(53)、P~(21)~(ras)和c-myc蛋白表达

为进一步探讨子宫颈癌的分子发病机制，采用PCR、ISH和IHC方法对51例子宫颈癌组织的HPV16感染、HPV16E6mRNA、p53、p21ras和c－myc蛋白表达分布进行了研究。结果表明51例中有HPV16感染者38例，HPV16E6mRNA表达者35例，其阳性细胞主要分布在高分化癌巢之周边部或中、低分化癌之整个癌巢；p53、p21ras和c－myc蛋白阳性检出率分别为33．3％、60．8％和76．5％，其阳性细胞是弥漫或灶状分布。统计分析表明HPV16感染与P53、P21ras、c－myc蛋白积累间无关，但后三者间则显著相关。这提示癌基因活化或抗癌基因的失活及HPV16感染等因素之协同在子宫颈癌的发生发展中起重要作用。     

THE DETECTION OF P53 GENE IN HUMAN CERVICAL CARCINOMA WITH AND WITHOUT HUMAN PAPILLOMAVIRUS INFECTION

ＴＨＥＤＥＴＥＣＴＩＯＮＯＦＰ５３ＧＥＮＥＩＮＨＵＭＡＮＣＥＲＶＩＣＡＬＣＡＲＣＩＮＯＭＡＷＩＴＨＡＮＤＷＩＴＨＯＵＴＨＵＭＡＮＰＡＰＩＬＬＯＭＡＶＩＲＵＳＩＮＦＥＣＴＩＯＮＳｕｎＹｉ（孙毅）；ＳｉＬｕｓｈｅｎｇ（司履生）ＳｕｎＹｉ；ＳｉＬｕｓｈｅｎ...     

应用PCR方法检测人乳头瘤病毒的E_7转化基因

应用聚合酶链反应技术（ＰＣＲ）检测５４份子宫颈癌活检标本中人乳头瘤病毒１６型（ＨＰＶ－１６）Ｅ７转化基因的存在情况，结果显示阳性率为７２．２％（３９／５４）。ＨＰＶ－１６Ｅ７转化基因在人子宫颈癌组织中的高检出率，证实该转化基因与其发生关系密切。本研究同时证明，ＰＣＲ方法具有敏感、特异、快速和实用特点，值得推广。     

DIG－DNA探针检测宫颈癌组织中HPV－16的E_7转化基因

应用地高辛配基（Ｄｉｇ－１１－ｄＵＴＰ）标记人乳头瘤病毒１６型（ＨＰＶ－１６）Ｅ７转化基因作探针，分别检测了宫颈癌活检组织、宫颈炎及正常宫颈脱落细胞ＤＮＡ。其检出率为：宫颈癌中４２．１％（２４／５７）、宫颈炎中２．５％（１／３９）、正常宫颈中５．５％（１／１８）。宫颈组织中ＨＰＶ－１６Ｅ７转化基因的检出率较高，提示该转化基因与宫颈癌的发生可能密切相关。本研究也证实ＤＩＧ配基标记的Ｅ７基因探针具有特异、敏感、安全、稳定和能反复使用的优点，适合基层使用。     

子宫颈癌患者HPV16 E6,E7血清抗体检测

通过基因工程技术制备HPV16 E6,E7抗原,用免疫酶联吸附法检测了44例子宫颈癌病人和20例健康献血员血清HPV16 E6,E7抗体。结果表明,健康人血清HPV16 E6和HPV16 E7抗体阳性者分别占35％(7/20)和20％(4/20)。病人血清中,HPV16 E6抗体阳性率68.18％(30/44),但其反应滴度均值与健康人无显著差异。HPV16 E7抗体阳性率为58.18％(25/44),其阳性率及反应滴度均明显高于健康人。这提示,HPV16 E6抗体可能并非HPV16的型特异性抗体,而HPV16 E7抗体则有可能成为子宫颈癌发生的预报信号。     

肺癌患者血浆中血小板GMP－140的测定

采用ＧＭＰ－１４０单抗ＳＺ－５１采用酶联免疫吸附试验检测了７４例肺癌患者ＧＭＰ－１４０含量并与４０例健康人作了对照，结果发现肺癌患者血浆ＧＭＰ－１４０均值高于正常人（Ｐ＜０．０１），尤其在肺癌伴转移患者更为明显，且亦高于肺癌未转移患者（Ｐ＜０．０５），为进一步探讨血小板在肿瘤增殖与转移中的作用及临床治疗提供了参考依据。     

用HPV L_1区共有引物及PCR技术检查人尖锐湿疣和子宫颈癌中的HPV

根据HPV6、11、16、18、31、33型L1ORF高度保守区的基因序列设计合成了一对HPVL1区共有引物。该引物除与上述六型有很高的同源性外还可覆盖其它已知的20多型与女性肛生殖区感染有关的HPV。用该引物及PCR技术对一组计144例活检标本进行检测，结果显示：病理确诊的尖锐湿疣、子宫颈癌及外阴癌组织、正常宫颈标本中HPVDNA序列检出率分别为100％（55／55）、70％（28／40）和13．3％（2／15）。另外，34例临床诊断而未被病理证实的尖锐湿疣HPV－DNA亦呈阳性，说明在对这类病变进行病理诊断时有必要进行病原学检测。     

THE DETECTION OF HPV16E6，E7 GENES IN TISSUES AND THEIR ANTIBODIES IN THE SERA OF PATIENTS WITH CERVICAL CARCINOMA

ＴＨＥＤＥＴＥＣＴＩＯＮＯＦＨＰＶ１６Ｅ６，Ｅ７ＧＥＮＥＳＩＮＴＩＳＳＵＥＳ　ＡＮＤＴＨＥＩＲ　ＡＮＴＩＢＯＤＩＥＳＩＮＴＨＥＳＥＲＡＯＦＰＡＴＩＥＮＴＳＷＩＴＨ　ＣＥＲＶＩＣＡＬＣＡＲＣＩＮＯＭＡＬｉｕＴｉａｎｊｕ；ＬｉｕＨｕａ；，ＳｕｎＹｉ；，Ｓ...