聚合酶链反应检测弓形虫核酸的研究

应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术，设计了一对寡核苷酸引物，对弓形虫Ｂ１基因的保守序列进行体外扩增，显示该引物只对弓形虫核酸扩增，可对４个或４个以上弓形虫扩增出明显条带，检测弓形虫核酸的最低量为２．５ｐｇ。该ＰＣＲ对急性感染弓形虫的小鼠，于４８ｈ后就可从部分小鼠（２／５）的外周血中检测到弓形虫核酸，９６ｈ后全部小鼠（５／５）外周血中均检测到弓形虫核酸，而感染２４ｈ后可从其肝、脾、肾等组织中扩增到弓形虫核酸。对３４例孕妇外周血分别用ＥＬＩＳＡ及ＰＣＲ平行检测，ＥＬＩＳＡ测ＩｇＭ阳性者３例，ＰＣＲ扩增阳性者６例（其中３例ＩｇＭ亦阳性），表明ＰＣＲ具有较高的敏感性和特异性。     

用PCR-SSCP方法研究子宫颈癌组织中人乳头瘤病毒E_7基因的变异

运用核酸杂交和聚合酶链式反应（ＰＣＲ）对临床确诊的６１份子宫颈癌Ⅱ～Ⅲ期标本进行了人乳头瘤病毒（ＨＰＶ）１６型Ｅ７基因的检测。非同位素地高辛标记探针斑点杂交阳性检出率为４５．９％，ＰＣＲ检测阳性率为５４．１％，两种检测结果证实ＨＰＶ－１６型感染与子宫颈癌的发生密切相关。进一步用灵敏的单链构象多态性分析法（ＳＳＣＰ）对３３例阳性标本进行分析，发现有２７例单链ＤＮＡ迁移率与正常对照有不同，推测均发生了ＤＮＡ序列的改变，提示ＨＰＶ－１６Ｅ７基因的变异在子宫颈癌组织中是较常见的现象，其与子宫颈癌的发生有一定的关系。     

应用PCR方法检测人乳头瘤病毒的E_7转化基因

应用聚合酶链反应技术（ＰＣＲ）检测５４份子宫颈癌活检标本中人乳头瘤病毒１６型（ＨＰＶ－１６）Ｅ７转化基因的存在情况，结果显示阳性率为７２．２％（３９／５４）。ＨＰＶ－１６Ｅ７转化基因在人子宫颈癌组织中的高检出率，证实该转化基因与其发生关系密切。本研究同时证明，ＰＣＲ方法具有敏感、特异、快速和实用特点，值得推广。     

套式RT-PCR检测肾综合征出血热病毒方法的建立及应用

针对汉坦病毒（Ｈａｎｔａｎｖｉｒｕｓ,ＨＶ）中国代表株（Ａ９、Ｒ２２）Ｍ基因片段设计分型引物（Ⅰ、Ⅱ型）,采用改进的异硫氰酸胍酚一步法（胍酚法）提取汉坦病毒ＲＮＡ,套式ＲＴ－ＰＣＲ检测稀释病毒上清,模拟病人血清和２０例急性期（１～７ｄ）血清样本。结果：能检测到模拟血清中少至几个ＰＦＵ病毒ＲＮＡ,敏感性５～１０ｆｇ。检测过程可在５ｈ内完成。２０例急性期患者血清检测阳性率为１００％,并能进行临床分型。扩增产物经打点杂交证实其特异性。而正常及非ＨＦＲＳ患者血清结果均为阴性。提示：套式ＲＴ－ＰＣＲ基因诊断技术优于传统的ＭａｃＥＬＩＳＡ、ＩＦＡＴ和ＲＰＨＩ诊断法。     

溶脲脲原体双相一步培养与PCR技术的临床应用

用溶脲脲原体双相一步培养法和ＰＣＲ方法同时测定５０例非淋球菌性尿道炎病人标本。双相一步培养法有２４例阳性，阳性率为４８％，ＰＣＲ测定有２０例阳性，阳性率４０％，两者无显著差异。２４例培养阳性，ＰＣＲ有５例阴性，２６例培养阴性中，ＰＣＲ有１例阳性。本文说明Ｕｕ双相一步培养法具有快速，准确，阳性经高，不易污染等优点，对于Ｕｕ的临床检测具有重要意义；ＰＣＲ方法更快速简便，并直接能从样品中测定Ｕｕ的特异核     

大鼠视觉相关脑区表达序列标签的克隆与鉴定

目的 分析视觉相关脑区基因的差异表达并获取新的表达序列标签。方法 利用差异显示反转录ＰＣＲ（ＤＤＲＴ－ＰＣＲ）技术分析大鼠外侧膝状体与视皮层基因差异表达情况，并筛选差异表达基因片段。结果 经ＤＤＲＴ－ＰＣＲ筛选并通过反Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交法除假阳性，最终获得１个差异表达基因片段。对其进行克隆、测序和同源性比较发现，该片段为一新的表达序列标签，并与心肌集钙蛋白的ｍＲＮＡ具有７４％的同源性。结论 视觉     

女性冠心病人性激素及其受体的变化

探索女性冠心病患者性激素和性激素受体的关系。方法 选测女性ＣＨＤ患者２８例和对照组３２例。采用放射配体结合法检测外周血白细胞上雌激素受体和雄激素受体。采用放免法检测雌二醇和睾酮。结果发现绝经后组Ｅ２，Ｅ２／Ｔ，ＥＲ明显低于绝经前期，ＣＨＥ组ＥＲ明显低于绝经后期。     

W基因组织表达的特异性

Ｗ基因是利用周转神经髓鞘蛋白ＰＭＰ－２２基因的编码区５’－及３’－序列引物，藉ＰＣＲ方法自人脑胶质瘤ｃＤＮＡ文库中扩增的一个基因片段，本实验研究Ｗ基因组织表达的特性性。方法搜集不同组织来源的肿瘤及正常脑组织标本，行ＲＴ－ＰＣＲ及ＲＮＡ斑点杂交检测。     

人白细胞介素18cDNA的克隆及序列测定

获取人ＩＬ－１８ｃＤＮ克隆。方法用ＲＴ－ＰＣＲ方法从人外周血单个核细胞中获取人ＩＬ－１８ｃＤＮＡ，将其克隆至天然蛋白表达载体ＰＢＶ２２０中，并进一步亚克隆至融合蛋白表达载体ＰＧＥＸ－４Ｔ－３中，对其进行酶切分析及序列测定。结果测序结果表明克隆至ＰＢＶ２２０中的ＩＬ－１８ｃＤＮＡ包含成熟ＩＬ－１８蛋白的全部编码序列，酶切分析表明一约４７０ｂｐ的基因片段克隆至ＰＧＥＸ－４Ｔ－３中，与理论预计的一致。结     

尿型纤溶酶原活化素受体在大肠癌活检标本中的表达和意义

在３３例大肠癌内镜活检标本中以抗配体免疫组化法检测肿瘤细胞尿型纤溶原活化素受体的表达，同时测定Ｃ－ｅｒｂＢ－２蛋白分布情况，结果表明，大肠癌中ｕ－ＰＡＲ阳性率为３９．３％，其中以低分化腺癌为主，占７２．７％，Ｐ１８５阳性率为４２．４％。二者表达有高度一致性，ｕ－ＰＡ是一种丝氨酸蛋白酶，在和肿细胞膜在受体结合后具有增强肿肿瘤细胞浸润能力的作用，应用肠镜活检标本检测ｕ－ＰＡＲ可作为大肠癌恶性程度及估计     

PCR法检测乙型肝炎患者外周血单个核细胞中HBV DNA

采用ＰＣＲ法检测了７７例乙肝患者外周血单个核细胞（ＰＢＭＣ）中ＨＢＶＤＮＡ，２７例阳性，总阳性率为３５．１％。慢性活动性肝炎（９／２１，４２．９％），肝炎后肝硬化（９／１９，４７．４％）及重型肝炎（８／１６，５０．０％）患者ＰＢＭＣＨＢＶＤＮＡ阳性率明显高于慢迁肝（１／１４，７．１％）和急肝（０／７）患者。结果提示ＰＢＭＣ中ＨＢＶＤＮＡ的存在在乙肝发病机理中具有一定意义。     

用聚合酶链反应检测口腔癌组织中人乳头状瘤病毒的E_6转化基因

作者采用聚合酶链反应（ＰＣＲ），并对照核酸斑点杂交法对１０例口腔恶性肿瘤组织中ＨＰＶ１６Ｅ６转化基因进行了检测。这些肿瘤包括６例口腔粘膜鳞癌（ＳＣＣ），２例涎腺腺样囊性癌（ＡＣＣ），１例涎腺恶性多形性腺瘤（ＭＰＡ）和１例腭部软组织胚胎性横纹肌肉瘤（ＥＲ）。对照组为１０例非肿瘤组织，包括唇裂、腭裂粘膜组织标本各５例。结果表明两种方法检测结果基本一致，肿瘤组阳性６例（６／１０），包括４例ＳＳＣ，１例ＡＣＣ和１例ＥＲ（除外１例ＡＣＣ用核酸杂交法检测为弱阳性），其余为阴性；对照组用核酸杂交法检测４例，除１例唇裂标本为弱阳性以外，均为阴性（０／４）；用ＰＣＲ法检测１０例均为阴性结果（０／１０）。两组间ＨＰＶ１６Ｅ６转化基因的检出率有明显差异（Ｐ＜０．０５）。这一结果为开展口腔癌的ＨＰＶ病因学研究提供了参考资料。     

PCR技术对两个Huntington舞蹈病家系的遗传学分析

本文对两个Ｈｕｎｔｉｎｇｔｏｎ舞蹈病家系进行调查并应用ＰＣＲ技术作了基因检测，所用引物５’－ＣＴ－ＧＴＧＧＧＡＣＣＴＣＧＧＣＴＡＡＧＣ－３‘及５’－ＧＴＣＡＧＣＡＣＣＴＣＡＧＡＣＣＡＧＡＧ－３‘，合成了ＰＹＮＺ－３２标志基因，经多态性连锁分析提示它对国人Ｈｕｎｔｉｎｇｔｏｎ舞蹈病进行基因检测和临床应用具有可能性。     

人类乳头状甲状腺癌TGF—βmRNA表达

目的 探讨转化生长因子－β１（ＴＧＦ－β１）在人乳头状甲状腺癌和良性腺瘤、桥本氏甲状腺炎及正常组织中的表达差别。方法 利用逆转录多聚酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）及表达峰度定量法，检测４处新鲜甲状腺手术标本组织中ＴＧＦ－β１ ｍＲＮＡ的表达。结果ＴＧＦ－β１ ｍＲＮＡ在４种甲状腺组织中的表达均有较高的阳性率（＞８３．３％），乳头状甲状腺癌中ＴＧＦ－β１ ｍＲＮＡ的表达量较良性腺瘤、桥本氏炎及正常组织均增     

AT1受体基因型和环境因素对高血压病人群脑梗？…

目的 探讨血管紧张素Ⅱ１型受体基因（ＡＴ１Ｒ基因）Ａ／Ｃ＾１１６６多态性与高血压病并发脑梗死的关系，评价ＡＴ１Ｒ基因以及１０余种侯选危险因素对高血压病人群脑梗死发生的危险贡献。方法 随机收集高血压病例２４０例，按合并脑梗死的无分为两组，采集临床病史资料，留取血标本进行临床生化指标检验和ＡＴ１Ｒ基因分析。基因分析采用ＰＣＲ－ＡＳＯ点杂交法。结果 ①２４０例病例ＡＴ１Ｒ基因的检测，未发现ＣＣ型，两种基     

小鼠乳腺癌细胞系IL—2基因转导及成瘤性研究

研究白细胞介素２转基因乳腺癌组织在小鼠体内成瘤性。方法 用感染法将人ＩＬ－２基因体外导入乳腺癌细胞系４Ｔ１。转基因细胞４Ｔ１－ＩＬ＝２培养上清内ＩＬ－２分泌量，ＤＮＡ，ＲＮＡ分别ＥＬＩＳＡ，Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交及逆转录ＰＣＲ法分析。体内实验将动物区分４Ｔ１，ＲＴ１／ＩＬ－２混合接种或单独接种三组。     

逆转录—聚合酶链反应测定血透病人的HCV—RNA

以丙型肝炎病毒的５‘非结构区设计了两对引物并建立了巢式ＲＴ／ＰＣＲ直接检测血表中ＨＣＶ ＲＮＡ方法。进一步检测了２５份血透病人的血清标本和２０份透析液标本，结果提示ＲＴ／ＰＣＲ是直接检测ＨＣＶ ＲＮＡ的可行方法，能为判断现型肝炎感染提供有利依据。     

雌激素受体在肝海绵状血管瘤中的表达及意义

采用免疫组化Ｓ Ｐ法检测３０ 例肝海绵状血管瘤（Ｃａｖｅｒｎｏｕｓ ｈｅｍ ａｎｊｉｏｍ ａｏｆｌｉｖｅｒ,ＣＨＬ）组织中雌激素受体（Ｅｓｔｒｏｓｅｎ ｒｅｃｅｐｔｏｒ, ＥＲ）的表达,并以ＣＨＬ瘤旁正常肝组织作对照。结果ＥＲ 阳性表达于ＣＨＬ 血窦内皮细胞胞浆中,阳性率为４３３％ ;ＣＨＬ瘤旁正常肝组织中未见表达（ Ｐ＜ ０．０５）。提示肝海绵状血管瘤的生长与雌激素有关。雌激素可能通过其受体作用促进ＣＨＬ生长     

肺癌组织雌／孕激素受体表达及三苯氧胺治疗

目的 通过对肺癌组织雌／孕激素受体表达的测定,从病理特征、超微结构及内分泌治疗方面进行初步探讨。方法 应用免疫组织化学ＳＰ法检测４０例肺癌和１０例肺良性病变组织雌／孕激素受体表达,并结合临床病理、超微结构,部分肺癌患者辅以三氧胺治疗。结果肺癌组织中雌激素受体（ｅｓｔｒｏｇｅｎ ｒｅｃｅｐｔｏｒ,ＥＲ）阳性率为５７．５％,孕激素受体（ｐｒｏｇｅｓｔｅｒｏｎｅ ｒｅｃｅｐｔｏｒ,ＰＲ）阳性率为４０．     

用PCR法检测胸液中结核杆菌DNA

利用聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术检测了３２例结核性渗出性胸膜炎和２０例非结核性疾病患者胸液中结核杆菌的６５ＫＤａ抗原蛋白编码基因的特异ＤＮＡ片段。结果表明，其检出率为７８．１３％，并具高度特异性。提示ＰＣＲ扩增ＤＮＡ技术对结核性渗出性胸膜炎是高度敏感和特异的早期、快速诊断方法。