DNA损伤修复与肿瘤放射敏感性的研究进展

放射治疗是肿瘤的重要治疗手段之一,但是也面临着肿瘤放疗抵抗等临床治疗效果不佳的难题。如何提高放射治疗效果,即增强肿瘤的放射敏感性仍待解决。放射治疗是通过放射线对肿瘤细胞DNA直接及间接的损伤,达到治疗肿瘤的目的。目前,对于DNA损伤修复机制的探讨,以及DNA损伤应答作为放射治疗靶点的研究是肿瘤生物学及放射生物学研究的热点。本文将对DNA损伤修复机制及其与肿瘤放射敏感性关系的近期研究进展作一综述。我们认为,DNA损伤修复基因作为放射增敏相关基因靶点,将会有很好的前景,最终促进肿瘤治疗的进展。     

USP39抑制肿瘤细胞放射敏感性的机制

目的探讨泛素特异性肽酶39(ubiquitin-specific peptidase 39, USP39)对肿瘤细胞DNA损伤应答通路的生物学作用。方法将不同肿瘤细胞系(293T, HeLa, U2OS, T47D)分别在含有100 mL/L FBS的DMEM或RPMI-1640培养基中,在37℃含有50 mL/L CO_2的培养箱中培养;用MTS[3-(4,5-diethylthiazol-2-yl)-5-(3-carboxymethoxyphenyl)-2-(4-sulfophenyl)-2H-etrazolium, inner salt]方法检测敲低USP39对肿瘤细胞放射敏感性的影响;流式细胞术检测同源重组(homologous recombination, HR)和非同源末端连接(non-homologous end joining, NHEJ)修复效率;Western blot检测敲低USP39对DNA损伤应答相关分子的表达情况;用免疫共沉淀、蛋白纯化及质谱技术,检测与USP39相互作用的蛋白并且进行基因本体论(gene ontology, GO)分析;通过微辐射诱导DNA损伤并利用激光共聚焦显微镜检测其募集至DNA损伤位点的情况。结果敲低USP39导致肿瘤细胞的放射敏感性显著增加(P<0.05);敲低USP39显著抑制肿瘤细胞的HR与NHEJ修复效率(P<0.05);敲低USP39能够促进DNA损伤应答因子蛋白的表达;USP39能够聚集至DNA损伤位点;USP39相互作用蛋白与多个DNA损伤应答相关的信号通路有关。结论 USP39对DNA损伤应答过程具有重要作用。     

宫颈癌组织中Survivin、UHRF1 mRNA表达及其与宫颈癌放疗敏感性的相关性

目的研究宫颈癌组织中Survivin mRNA、UHRF1 mRNA表达及其与宫颈癌放疗敏感性的关系。方法选取在西安交通大学第一附属医院接受根治性放疗的宫颈癌患者112例,RT-PCR法检测宫颈癌组织Survivin mRNA和UHRF1 mRNA表达水平,评估Survivin mRNA和UHRF1 mRNA表达、年龄、分期、肿瘤分化程度、肿瘤直径等临床特征与放疗敏感性的相关性,通过多因素Logistic回归分析寻找与宫颈癌放疗敏感相关的独立预测因子。结果 112例宫颈鳞癌患者放疗后,放疗抵抗48例,放疗敏感64例。与放疗敏感组相比,放疗抵抗组肿瘤分化程度低,肿瘤直径大,Survivin mRNA和UHRF1 mRNA表达水平更高(P<0.05),放疗抵抗组与放疗敏感组年龄、FIGO分期相比差异无统计学意义(P>0.05);Survivin mRNA、UHRF1 mRNA表达水平是宫颈癌患者放疗敏感性的独立预测因子,Survivin mRNA、UHRF1 mRNA低表达的患者放疗敏感性较高。结论 Survivin mRNA和UHRF1 mRNA表达与宫颈鳞癌放疗敏感性呈负相关,表达越低,放疗敏感性越高。     

凋亡阳性率及凋亡相关基因bcl-2、bax在宫颈癌放疗前后表达的意义

目的　观察 30例宫颈癌患者放疗前后的凋亡阳性率及bcl 2、bax蛋白表达的变化 ,以探讨放射治疗肿瘤的机理。方法　采用免疫组织化学方法和脱氧核苷酸转移酶介导的末端标记技术TUNNEL标记法对 30例Ⅰ -Ⅲ期宫颈鳞癌患者的放疗前后凋亡阳性率及bcl 2、bax蛋白表达水平进行检测。结果　 30例患者凋亡阳性率放疗前后的表达分别为 76 .7%和 10 0 % ,放疗后显著增高 (P <0 .0 5 ) ;bcl 2蛋白在放疗前后的表达阳性率分别为 73.3%和 4 6 .7% ,放疗后显著降低 (P <0 .0 5 ) ;bax蛋白在放疗前后的表达阳性率分别为 86 %和 10 0 % ,放疗后显著增加 (P <0 .0 5 )。结论　放疗的过程就是放射线诱导细胞调亡的过程 ,放射线通过抑制bcl 2蛋白的表达、增强bax蛋白的表达诱发肿瘤细胞的凋亡     

EGFR和Cyclin D1的联合表达预测胶质瘤的放疗敏感性

目的探讨表皮生长因子受体(EGFR)和Cyclin D1蛋白的表达与胶质瘤放疗敏感性的关系。方法采用免疫组织化学方法检测EGFR和Cyclin D1蛋白在53例不同放疗敏感性胶质瘤和10例正常脑组织中的表达。结果EGFR或Cyclin D1蛋白的表达与胶质瘤的放疗敏感性均无统计学意义(P>0.05)。EGFR和Cyclin D1蛋白的联合表达与胶质瘤的放疗敏感性具有统计学意义(P<0.05)。结论EGFR和Cyclin D1蛋白的联合表达可预测胶质瘤的放疗敏感性。     

调控C-erbB2表达对脑胶质瘤细胞凋亡及放疗敏感性的影响

目的研究C-erbB2的表达程度对脑胶质瘤细胞生物学特性及放射治疗效果的影响,以期找到控制胶质瘤细胞生长、分裂的有效途径。方法以人C-erbB2cDNA基因为靶标设计引物,构建封闭人C-erbB2基因表达的shRNA表达载体pGenesil-erbB2,在筛选出高表达C-erbB2的细胞株BT-325细胞中稳定转染构建的干扰载体pGenesilerbB2,检测细胞生物学特性的改变并探索联合放疗的治疗效果。结果 pGenesil-erbB2通过对Bcl-2mRNA的干扰作用,有效的降低了Bcl-2的表达,并通过上调p53mRNA和p27mRNA,显著增加了p53、p-p53、p27的表达,加速了肿瘤细胞的凋亡,并减少了其处于分裂期细胞的比例;转染后的BT325细胞经γ射线使致死剂量(D0)降低,存活曲线肩区(Dq)变小,对γ射线敏感性显著增强。结论通过抑制C-erbB2在脑胶质瘤细胞中的表达能够有效抑制胶质瘤细胞的体外恶性生物学行为,促进细胞凋亡并增强放射治疗效果。     

肿瘤患者局部放疗前后红细胞免疫功能的变化

肿瘤患者局部放疗前后红细胞免疫功能的变化李明众，王书文，韩苏夏，宋丽萍，葛玲，王龙生（第一临床医学院肿瘤放疗科西安７１００６１）现代医学表明：免疫抑制先于和伴随肿瘤发生［１］；局部放疗免疫力下降［２］。既往的研究只局限于白细胞免疫系，对红细胞免疫系功...     

芦荟凝胶对大鼠Ⅱ度放射性皮炎发生程度和ICAM-1表达的影响

放疗性皮炎是肿瘤放射治疗中最常见的反应之一，制约着肿瘤放射治疗的完成。芦荟(Aloe)是一种集医药、食用、美容和观赏价值于一体的重要经济植物，不仅具有促进伤口愈合、抗病毒、抗真菌等功效，还具有调节机体免疫力、抗肿瘤及防辐射的作用。目前国内外对芦荟凝胶抗放射性皮炎的临床研究较多，但机理性基础研究较少。本研究采用免疫组织化学方法并利用图像分析技术，检测了细胞间黏附分子-1(ICAM-1)在大鼠Ⅱ度放射性皮炎组织中的表达，探讨芦荟预防放射性皮炎的机理。     

辛伐他汀对食管癌细胞放疗敏感性的影响

目的观察辛伐他汀对食管癌细胞放疗敏感性的影响。方法应用间断照射的方法诱导食管癌细胞EC9706的放射抗拒细胞R-resistant;Cell Counting Kit-8检测辛伐他汀联合放疗对食管癌细胞EC9706及其放射抗拒细胞R-resistant增殖的影响;集落形成实验检测辛伐他汀对食管癌细胞EC9706及其放射抗拒细胞R-resistant的放疗敏感性的影响。结果成功诱导出食管癌细胞EC9706的放射抗拒细胞R-resistant,Cell Counting Kit-8实验及集落形成实验结果都显示辛伐他汀可以增强食管癌细胞EC9706及其放射抗拒细胞R-resistant对放疗的敏感性。结论辛伐他汀可以增强食管癌细胞的放疗敏感性。     

DNA核酸疫苗诱导小鼠免疫应答的作用

目的　研究DNA核酸疫苗诱导机体免疫应答的能力 ,为揭示其诱导机制奠定基础。方法　采用本室构建的单纯疱疹病毒 2型 (HSV 2 )糖蛋白D的真核表达质粒 pcDNA gD2免疫小鼠 ,通过ELISA法动态检测特异性抗体的产生及小鼠外周血Th1型细胞因子IFN γ、IL 2的水平同时进行病毒攻击实验。结果　pcDNA gD2和HSV 2免疫组小鼠从第 2周开始产生特异性抗糖蛋白D抗体 ,第 4～ 5周达到高峰 ;外周血清中IFN γ、IL 2水平明显高于阴性对照组。病毒攻击实验显示 2周内 pcDNA gD2和HSV 2免疫组小鼠无一只死亡 ,而阴性对照组小鼠全部死亡。结论　pcDNA gD2真核表达质粒可以诱导小鼠产生特异性体液免疫和Th1型细胞免疫 ,并具有免疫保护作用     

MDA-7/IL-24——肿瘤基因治疗的新武器

通过消减杂交法从人黑色素瘤细胞中分离出来的黑色素瘤分化相关基因(melonoma differentiation associated gene 7, MDA-7),因其分子生物学特性与IL-10相似,故将其归入IL-10家族,并重新命名为IL-24.位于人染色体1q32的MDA-7/IL-24基因在原始黑色素瘤细胞及人免疫相关组织中表达.MDA-7/IL-24的膜受体IL-20R1、IL-20R2和IL-22R1在不同组织、细胞中的分布存在差异.MDA-7/IL-24具有广泛的抗肿瘤生物学作用.它能够通过膜受体或非受体介导的凋亡途径对多种肿瘤细胞产生杀伤作用,而不影响正常细胞.此外,MDA-7/IL-24还具有抑制肿瘤新生血管形成、增强放疗敏感性和免疫调节作用.作为一种具有多种抗肿瘤功能的细胞因子,MDA-7/IL-24在临床Ⅰ期试验中已显示出良好的治疗效果,将成为肿瘤基因治疗的新武器.     

年轻妇女恶性卵巢肿瘤术后放疗46例分析

本文总结我院自1965年～1985年间恶性卵巢肿瘤146例行术后放射治疗,其中年轻妇女46例,其特点是以生殖细胞瘤为多,共27例,占58.69%,而生殖细胞瘤中又以无性细胞瘤多见,共21例,占77%。因生殖细胞瘤对放射治疗比较敏感,就是有较广泛的淋巴道转移,亦应积极采取术后放疗,可以提高生存率。本文总结46例术后放疗,其5年生存率为52.17%(24/46),较一般文献报告为高。     

肿瘤免疫研究的回顾与展望

20多年来,本校免疫病理研究室一直从事肿瘤免疫的研究,从研究肿瘤浸润淋巴细胞的活化和肿瘤逃逸的机制开始,到探索诱导浸润淋巴细胞(tumor infiltrating lymphocytes, TIL)活化的最佳条件,并将这些研究结果转化为肿瘤免疫治疗和免疫预防的实践,从一个侧面反映了人类在征服肿瘤道路上的艰苦历程。     

超分割放疗加化疗治疗晚期鼻咽癌的前瞻性临床研究

目的　探讨超分割放疗加化疗治疗晚期鼻咽癌的临床效果和反应。方法　 6 0例鼻咽癌患者随机分入超分割加同期化疗组 (研究组 )和单纯超分割放射治疗组 (对照组 )。放射治疗方法两组相同 ,鼻咽部放疗方案为 1.2Gy·次- 1 ,每天 2次 ,间隔 >6h ,总剂量 74Gy ;颈淋巴结 (+)给予治疗量 ,DT79Gy。化疗用PFL方案 :顺铂 6 0mg·m- 2 ,第 1天 ,氟尿嘧啶 75 0mg·m- 2 ,第 2～ 4天 ,亚叶酸钙 10 0mg·m- 2 ,第 2～ 4天 ,每 4周重复。研究组放射、化疗同期进行。结果　研究组的病灶全消率优于对照组 (P <0 .0 5 ) ,但皮肤黏膜Ⅲ度放射反应较多 (P <0 .0 5 )。 1年、3年和 5年生存率研究组和对照组分别为 96 % ,6 7% ,4 3%和 73% ,4 3% ,33%。结论　超分割放疗加化疗治疗晚期鼻咽癌的疗效优于单纯超分割放射治疗 ,晚期鼻咽癌患者加用化疗是合理的     

电离辐射调控细胞命运在放射性肺损伤中的作用及治疗进展

放射性肺损伤是胸部肿瘤放疗及骨髓移植预处理后常见的并发症,是患者放疗剂量的重要限制因素。一旦放射性肺损伤进展至放射性肺纤维化阶段,将严重降低患者生活质量,同时引起患者呼吸衰竭最终导致死亡。电离辐射可诱导细胞发生凋亡、上皮间质转化、衰老、焦亡及铁死亡等命运,不同细胞响应于电离辐射下的不同损伤形式在放射性肺损伤的发生发展中具有重要作用。本文以电离辐射刺激后不同细胞发生不同命运转归为切入点,简述放射性肺损伤的发病机制,并对其临床防治进行综述。     

精准放疗质控保证——位置/剂量监测技术研究进展

如何在放疗过程中对肿瘤靶区的位置和剂量进行实时监测,降低甚至避免放疗引起的各种不良反应,保证靶区接受到足够剂量的放射剂量,提高患者的局控率,是实现精准放疗亟待解决的关键问题,也是准确安全执行放疗质量控制和质量保证的重要环节。理想的放疗监测技术应具有无辐射、无创伤以及三维动态实时成像等优势,本文将对精准放疗过程中位置和剂量监测相关技术简要综述。     

SD、E3与DA1U大鼠视网膜光损伤敏感性的差异研究

目的比较SD、E3与DA1U大鼠视网膜光损伤敏感性,为构建不同品系大鼠视网膜光损伤模型和研究眼底色素抗光损伤保护视网膜的相关机制研究提供实验依据。方法成年SD、E3、DA1U大鼠,雌雄随机选取,采用视网膜电图与HE染色分别检测正常情况下与光损伤后不同品系大鼠视网膜感光功能与组织形态变化,采用TUNEL染色观察光损伤后视网膜凋亡细胞的分布与数量。结果正常状态下,SD大鼠色素上皮层、脉络膜层及E3大鼠色素上皮层均无色素分布,而E3大鼠脉络膜层、DA1U大鼠色素上皮层与脉络膜层有褐色色素分布;HE结果显示,在正常状态下,3种品系大鼠视网膜外核层厚度没有显著差异,而在光损伤条件下,SD大鼠视网膜各层细胞均严重受损;视网膜电图结果显示,在正常状态下,不同品系大鼠间视网膜电图视杆细胞反应b波振幅存在显著差异,E3大鼠最大混合反应a波及b波振幅与SD大鼠相比有显著差异,而在光损伤条件下,与SD大鼠相比,E3和DA1U大鼠视网膜电图a波与b波的波幅降幅显著减弱;TUNEL染色结果显示,与SD大鼠相比,E3与DA1U大鼠视网膜内核层及外核层凋亡细胞分布范围与数量均显著下降。结论 SD、E3与DA1U大鼠间存在视网膜色素分布与光损伤敏感性的差异,分布于脉络膜与色素上皮层的色素可能在大鼠抗视网膜光损伤过程中起到重要作用。     

紫杉醇脂质体对乳腺癌细胞SK-BR-3的放疗增敏作用及其机制

目的探索紫杉醇脂质体(力扑素)对乳腺癌细胞株SK-BR-3是否具有放疗增敏作用及其放疗增敏机制。方法利用MTT法检测放疗组、单药紫杉醇脂质体(以下简称单药组)及紫杉醇脂质体联合放疗(以下简称联合组)在不同时间对乳腺癌细胞SK-BR-3的生长抑制作用。利用流式细胞仪检测放疗组、单药组及联合组对细胞周期及凋亡的影响。利用Western blot检测凋亡相关蛋白Caspase-3、Bcl-2及Bax在不同处理组中的表达,探索紫杉醇脂质体放疗增敏作用的机制。结果 MTT结果显示放疗组、单药组及联合组均具有细胞生长抑制作用,与细胞对照组相比差异具有统计学意义(P<0.05),而且联合组较单药及放疗组具有更显著的细胞生长抑制作用,差异具有统计学意义(P<0.05);细胞凋亡结果显示放疗组、单药组及联合组凋亡细胞均明显增加,与对照组相比差异具有统计学意义(P<0.05),并且联合组在细胞周期中均出现了明显的凋亡峰;Western blot结果显示,促凋亡蛋白Caspase-3和Bax的表达在放疗组、单药组和联合组中均升高,与对照组相比差异具有统计学意义(P<0.05),并且联合组升高较放疗组及单药组更为显著,差异具有统计学意义(P<0.05),而抗凋亡蛋白Bcl-2的表达在放疗组、单药组及联合组均减低,与对照组相比差异具有统计学意义(P<0.05),而联合组较放疗组及单药组降低更明显,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论紫杉醇脂质体具有明显的放疗增敏作用,并且可能通过调控凋亡相关蛋白的表达引起细胞凋亡来发挥其放疗增敏作用。     

核磁共振弥散加权成像对局部晚期食管癌放疗靶区勾画的作用

目的研究DWI影像联合T2WI影像与CT影像融合技术的价值,探讨DWI影像对晚期食管癌放射治疗靶区范围确定的作用。方法 23例局部晚期食管癌单纯放疗病例,采用放疗所需体位及固定方法,同时对患者进行CT定位扫描、T2WI及DWI定位扫描。将获得的3个序列影像经网络传输至Eclipse治疗计划系统,使用治疗计划系统的归一化信息自动融合法对影像进行融合。由放疗医师分别在CT影像和CT与DWI融合影像上对靶区范围进行勾画。应用治疗计划系统的图像融合功能及统计功能对两种影像确定的靶区进行评价。结果以CT影像为参考确定的食管癌靶区体积及长度,相对于以CT和DWI融合图像为参考确定的食管癌靶区体积及长度之间具有明显差异;临床医师应用CT与DWI融合图像勾画的食管癌靶区体积及长度结果3个组之间更为接近。结论 DWI与CT融合图像能清楚地反映肿瘤靶区的范围,对局部晚期食管癌的靶区确定有良好的辅助作用。     

辛伐他汀通过调控PI3K/AKT通路介导的EMT参与放疗诱导的食管癌细胞耐受

目的明确辛伐他汀对食管癌细胞放疗耐受性、上皮间充质细胞转化(epithelialmesenchymal transition,EMT)发生的影响及其作用机制。方法食管癌细胞经辛伐他汀(5μmol/L)预处理8h后进行X线放射处理,克隆平板形成实验测定细胞生存分数;MTT检测放疗后细胞增殖能力;流式细胞术检测细胞凋亡;试剂盒检测caspase-3活性;Western blot检测对PI3K/AKT通路的影响。结果辛伐他汀预处理降低放疗细胞的克隆存活分数(P<0.05),放疗后细胞的增殖能力进一步降低(P<0.05),而细胞的凋亡率及caspase-3活性上调(P<0.05)。此外,辛伐他汀增加6Gy细胞处理组中上皮标记物E-cadherin的表达,同时抑制间充质标记物N-cadherin及Vimentin的表达,差异有统计学意义(P<0.05)。机制分析证实,放疗后细胞中p-AKT的表达水平明显增加,而辛伐他汀预处理可明显抑制p-AKT的表达。当用PI3K/AKT通路激动剂IGF-1预处理后,辛伐他汀介导的放疗细胞增敏效应及逆转放疗细胞EMT发生的能力明显减弱(P<0.05)。结论辛伐他汀可以阻断PI3K/AKT通路的活化,抑制放疗引发的食管癌细胞EMT发生,从而增加食管癌细胞的放疗敏感性,提示本研究将为食管癌放疗增敏的临床研究提供新的策略。